TW200800915A - Novel hydrogen sulfate salt - Google Patents

Description

200800915 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種新穎鹽類，且更特別地說，係關於 一種6-(4-漠·2_氯_苯胺基）_7_氟·3·甲基_3h-苯并咪唾·5_竣 酸（2-羥基-乙氧基）_醯胺（以下皆稱為"化合物丨"）之新穎鹽 類，其係為一種ΜΕΚ抑制劑，係有益於治療及/或預防哺乳 動物中之增生性疾病狀態，諸如癌症。更精確地說，本發 明係關於一種化合物丨的硫酸氫鹽及製備該鹽之方法。本 鲁發明亦提供包含化合物1的硫酸氫鹽之醫藥組成物，及該 鹽於製備用來治療及/或預防在人類或動物體中增生性疾病 狀態如癌症之藥劑之用途，以及藉由投予一治療有效量的 化合物1之硫酸氫鹽治療在哺乳動物中增生性疾病狀態如 癌症的方法。 【先前技術】 透過生長因子受體及蛋白激酶的細胞傳訊，為細胞生 長、增生及分化的一種重要的調節者。在正常的細胞生長 ® 中，生長因子透過受體活化（例如PDGF或EGF及其它），活 化MAP激酶路徑。其中最重要，也最為熟知的包括正常及 不受控制細胞生長的MAP激酶路徑為Ras/Raf激酶路徑。活 化GTP結合的Ras會造成Raf激酶的活化及間接磷酸化。之 後Raf會磷酸化MEK1及2上兩個絲胺酸殘基（MEK1的S218 及 S222 及 MEK2 的 S222 及 S226)(Ahn 等人，in 2001，332:417-413)。然後’被活化的 ΜΕΚ會 石粦酸化其目前僅習知的受質，ΜΑΡ激酶ERK1及2。ERK的 6 200800915 磷酸化，乃是藉由MEK發生在ERK1上的Y204及T202，以 ERK2 Ji Y185^T1 83(Ahn ^ A ? Methods in Enzymology 2001，332:417-431)。被磷酸化的ERK二聚化且然後易位至 其中其所累積之細胞核。（Khokhlatchev等人，Ce/7 1 998, 93:605-615)。在細胞核中，ERK涉及數個重要的細胞功 能中，包括但不限定於細胞核運輸、訊號轉導、DNA修復、 核小體裝配及易位，及mRNA加工和轉譯（Ahn等人， Mo/ecw/ar CW/，2000，6:1343-1354)。全面地，以生長因子 治療細胞會導致ERK1及2的活化，將造成增生及在某些案 例中，會造成分化（Lewis等人，ddv· Cancer及以.1998, 74:49-139)。 在增生疾病中，基因突變及/或生長因子受體過度表 現、下游訊號蛋白或蛋白激酶皆包含於ERK激酶路徑所導 致的不受控制的細胞增生且，最終導致腫瘤形成。例如， 一些包含突變的癌症由於持續的生長因子的產生而造成此 路徑的持續活化。其它突變可導致已活化GTP結合Ras複合 體的去活化作用喪失，再一次的造成MAP激酶路徑的活 化。突變、致癌的Ras型可在50%的結腸癌及>90%胰臟癌 中被發現，及許多其它型癌症（Kohl等人，1993， 260:1834-183 7)。近來，bRaf突變在超過60%之惡性黑色素 瘤中已被確認（Davies，YL，專 k，Nature 2002，417:949-954)。在bRaf的這些突變會造成構成性地活性的MAP激酶 級聯。原發性腫瘤的樣本及細胞系之研究已顯示出在胰 臟、結腸、肺、卵巢及腎臟癌的MAP激酶路徑的構成性或 7 200800915 過度的活化（Hoshino，R·，等人，（9加ogeM 1999，18:813-822)。因此，癌症及過度活化的MAP激酶路徑間有相當強 的關連性，其造成原因源起於基因突變。 MAP激酶級聯的構成性或過度活化在細胞增生及分化 上扮演了重要的角色，此路徑的抑制被相信有益於過度增 生疾病。MEK在此路徑上為關鍵的角色，因其位在Ras及Raf 的下游。另外，其為一具吸引力的治療標的，因為MEK磷 酸化的習知受質僅有MAP激酶，ERK1及2。MEK的抑制在 數個研究中已顯示出具有潛在的治療益處。例如小分子 MEK抑制劑在裸鼠異種移植上，已顯示出會抑制人類腫瘤 的生長（Sebolt-Leopold 等人，Nature-Medicine \999， 5(7):810-816; Trachet等人，JXCi?四月 6-10, 2002, Poster #5426; Tecle, H., IBC 2nd International Conference of Protein ⑽ses，九月 9 -1 0, 2002)，阻止動物靜態痛覺超敏（static allodynia) (WO 01/05390)及抑制急性骨髓性白血病細胞的 生長（Milella等人，丄 C//i hveW· 2001，108(6):851-859)。 MEK的小分子抑制劑已被揭示。至少十三個專利申請 案已在過去幾年出現：US 5,525,625 ; WO 98/43960 ; WO 99/01421 ； WO 99/01426 ； WO 00/41505 ； WO 00/42002 ； WO 00/42003 ； WO 00/41994 ； WO 00/42022 ； WO 00/42029 ； WO 00/68201 ; WO 01/68619及 WO 02/06213。 MEK的抑制劑亦被敘述於WO 03/077914中。6·(4-溴-2-氯-苯胺基）-7 -氣-3-甲基- 3Η-苯弁嗦σ坐-5-叛酸（2-經基-乙氧 基）-醯胺，或”化合物Γ’係例示於WO 03/077914中且具有下 8 200800915 列結構式：

化合物1

化合物1已顯示出具有對MEK的抑制活性，且因此有 益於治療過度增生疾病，諸如癌症。 WO 03/077914揭示，一般說來，某些其中所揭露之化 合物的醫藥上可接受鹽類。更精確地，在W〇 03/077914中 陳述其中所揭露之化合物的醫藥上可接受鹽類具有足夠地 鹼卩刀，可形成含有酸性加成鹽的醫藥上可接受陰離 子，及此類陰離子的範圍已列表。相似地，該具有酸性部 份之化合物的適當鹽類，係藉由以一種鹼性化合物處理及 斗寸別疋無機驗處理該化合物而形成。 適合用於藥劑之醫藥上活性化合物的形式係為能提供 適合處理的性質，該性質允許其被處理及調配。然而，茲 亦需要確認最終配方之生物性質，諸如錠劑的溶解率及活 性成分的生體利用率係最佳化，在選擇最適當完全滿足不 同需要的特地形式上需經常地妥協。然而，在某些事例中， 鹽類不易形成及/或不穩定，原因可能為低的PKa值。PKa 值表示酸和鹼的強度，例如酸失去質子的傾向或鹼得到質 子的傾向(B刪ed J.N.，版 P-· cw (1923)47:718): 此現象在化合物1特別如此。 9 200800915 【發明内容】 發明摘述 本發明提供一種化合物1的硫酸氫鹽（1:1藥物·· H2S〇4) 及其各種形式，其全部皆包括在本發明範疇之中。該鹽類 可為不同的形式，其全部皆包括在本發明範疇之中。這些 形式包括無水形式及溶劑合物。更進一步形式可藉由去= 劑化溶劑合物產生。在一特別具體態樣中，該鹽類為益水 •㈣。 ^在進一步的觀點中，本發明提供一種使用化合物！硫酸 氫鹽作為治療過度增生疾病及症狀之藥劑的方法。 本务明之另外的觀點係為一種化合物丨硫酸氫鹽之用 途，其係用於製備治療或預防過度增生疾病及症狀之藥 劑。 ’、 本务明另外的優點及新穎的特徵將有部份在接下來敘 述中提出，及有部份將顯而易見為熟習此技術者基於檢視 _ t接著的說明書或是可從本發明的實施中學習。本發明的 優點可由特別是在附加的中請專利範圍項中所指出的手 攸、組合物、組成物及方法中所了解及達到。 【實施方式】 發明詳述 芩考貧料可依本發明的特定具體態樣來詳細地撰寫， -中貝例的闡述伴隨有結構及分子式。當本發明以列舉的 、體恶樣敘述的同時，須知其並非要以這些具體態樣限制 本U相反地，本發明乃是要涵蓋所有替代物、修飾物 200800915 及等價物，這些可能包含於如巾請專利範圍項中所定義的 本發明範疇。熟習該項技術者將認可許多類似或相等於此 處所描述的方法及材料，可被用於本發明的實施。本發明 並不僅限於在此所述的方法及材料。倘或多個被包 含的文獻、專利及相似的材料不同於或相反於本申請案， 包括但不限於歧義的術語、術語用法、所述技術或類似 者，皆屬為本申請案所支配。

本發明提供-種化合物丨的硫酸氫鹽（1:1藥物對叫⑻ 及其各種形式，其全部皆包括在本發明範圍之中。該鹽類 可有不同的形<，其全部皆包括在本發明範圍之中。這些 形式包括無水形式及溶劑合物。更進—步形式可藉由去; 劑化溶劑合物產生。在—特別具體態樣中，該鹽類為盈水 化合物丨的硫酸氫鹽類。更進一步的觀點’本發明提供一 種化合物1硫酸氫鹽形式，i蓝 ' ^ ^ ^其展現使其在用於藥劑上特別 適合的獨特物理及醫藥性質。 在特疋具體態樣中Μ匕合物i的鹽類為結晶狀。在製造 操作性質的觀點上，特別是在其㈣及流動性質上，該I 晶鹽已被發現較自由驗佳。鹽類的形成能提供一種純化的 :段’就如處理過的雜質可被分離及鹽類一般較自由鹼形 式易於分離。 〜·〜、，％ 31 (硫酸氫鹽為結晶 :，其令人驚㈣被發現當與化合物i的自由驗形式及化 “勿!之特定其它鹽形式比較時，具有改進的醫藥性質。 特別地，此結晶鹽的溶解率及其生物體利用率已被發現較 11 200800915 /、自由驗开y式及其它鹽類特別地高，就如接下來所闡述實 例。化合物1的硫酸氫鹽超過自由鹼形式的增加的生物體 利用率已顯示與用於投藥的配方無關。自由驗形式與硫酸 氫鹽形式的生物體利用率已在此被比較，當以相同分散調 配物給藥時，而在簡單錠劑調配物中亦可觀察到相似的差 異。 硫酸氫鹽所提供的增加的生物體利用率的程度係令人 馬冴，並且特別有益，因為化合物J的自由鹼形式已被分 類為BCS第4級化合物。BCS第4級化合物正常具有低的生 物體利用率，因其低溶解率及滲透性，而吸收上的滲透性 的限制意指此鹽類通常不被期望能在吸收上能產生實質的 影響（參見，例如：Dressn^n等人，（2001) />/^削rec/2七 月：68)。 化合物1之硫酸氫鹽之適合的溶劑合物係形成自寬廣範 圍的溶劑’特別是有機溶劑，諸如四氫吱喃（丁Hf)、已猜 φ (ACN)、乙醇（Et〇H)及甲醇（MeOH)。適當的有機溶劑包括 酉曰類，诸如C! -6烧基醋，例如乙酸乙醋，以及g同類，諸如◦ _ 1 6 烧基酮，例如甲基乙基酮（2- 丁酮）。 该鹽類的製備能被化合物1的漿液在有機溶劑及水中與 硫酸的反應所影響。為了製備1:1的鹽類，約需使用1當量 的硫酸。因此，於一更進一步的觀點中，本發明提供一種 製備化合物1的硫酸氫鹽的方法，該方法包括： (i)將化合物1之漿液在有機溶液及水中與約1當量的硫 酸反應； 12 200800915 (11)回收來自生成溶液的鹽類；及 ㈣之後，若意欲或需要，形成其溶劑合物。 ?硫酸對化合物1的量的莫耳比率係適當地為自識!至 2:1的耗㈣’例如範圍為從至]ΐ5:ι。適當的被使 用的硫酸形式為濃硫酴的 φ…4 式。在一個特別的具體態樣 中ϋ對化合物！的莫耳比率為1ι〇·ι〇。 的开 Ο申所加入水的適當量係限制在必須確保鹽類 、、曲^用的精確的量係視溶劑的特殊本質，硫酸的 7辰度4專而定，作血却土士 ^ _旦六产 仁八1地，水的量將以低於20%ν/ν的總液 體里存在，例如由13%至17% V/v。 在一特別的具體態樣申，名 , 〇 在步驟⑴中所使用的有機溶 齡頂(甲基乙基嗣)，水約佔液體體積的15%，使用的 液體總量相對於化合物1約為8毫升/克化合物卜 適當&，在㈣⑴錢的添加仙控制时式 例如溫度低於1〇°C，及妙 、隹― …、後步驟（1)剩餘者，在提高溫度下 進仃，例如由30-90¾，更推 本^ & 〇r „ 更進一步的實例為範圍在55。(：>75 c間，及更進一步的實例約在65它。 適合的有機液體包括有機 係溶解度不佳。如在此所用* 中化“勿1及其鹽類 你# — 土 斤用者，洛解度不佳”意指溶解度 低於母克溶質100毫升溶劑〆 ]例如母克溶質30至100毫升、玄 劑。這些溶劑包括烷基鲖類 毛升命 丁亦 頸例如C1_6烷基酮類，諸如2 丁酮。醇類，諸如（^6醇_ ^ 如1 例如甲醇或乙醇，及酯類， =成基醋’例如乙酸乙顆。在一具體態樣中，有機 /谷W丨為曱基乙基酮（2_ 丁 _ )。 13 200800915 適當地，反應混合物在步驟⑴及（ii)間過濾以移除任何 外來雜質。該殘餘物被選擇性地清洗，例如以有機液體及 水之混合物，且該來自濾液之所欲的鹽結晶，其可選擇性 地與清洗液結合。 在特定具體態樣中，於步驟（ii)中，藉由冷卻反應混合 物、選擇性地添加另外的有機液體而使硫酸氫鹽沉殿以回 收硫酸氫鹽。另外的有機液體可為於步驟⑴中所使用之相 同的有機液體，或其可為一不同的有機液體，其條件為此 作用係作為化合物1之硫酸氫鹽的反溶劑。以化合物i之硫 酸氫鹽的結晶播種溶液，可幫助沉澱的步驟。 在一具體態樣中，在冷卻前，濾液先經過蒸餾步驟以 移除水分並確保鹽類能在可接受的產量下回收。在一特別 的具體態樣中，溶劑為2-丁酮且濾液在大氣壓力下蒸餾。 在冷卻過程中，鹽類可從生成漿液中回收，例如藉由 過遽的方式。然後’回收物質可被乾燥，例如在提高溫度 下，例如由40至60。。’且另一例為約5(rc，直到達到固定 的重篁。如果產物為具有有機液體（諸如甲醇）的溶劑合物， 如有需要，在此時可藉由加熱去溶劑化。 硫酸氯鹽的物理性曾膜：太每> 貝將在貫施例中作更進一步的探討 及欽述。 本發明亦包含同位夸> «χ士 ^ I “達' 化合物，其與本發明所敘 者相同，但事實上，會右_十夕2 ^ ^ ^ 或多個原子被具有與通常自 界已發現者不同的原子質量 併入本發明化合物的同仇素 或質量數的原子所取代。可被 的實例包括氫、破、氮、氧、 14 200800915 磷、硫、氟及氯的同位素，諸如個別地為2H、3H、13匸、14 m 31P、32p、35s、18F及36C1。包含前述提^ 之同位素及/或其它原子之其他同位素之化合物丨之硫酸怎

鹽及其多晶型物皆包括在本發明的範圍中。本發明的特= 同位素標誌的化合物，例如那些含有放射活性同位素，' 二 如Η及乂係被併入，其在藥物及/或受質組織分佈試驗； 相當有用。氣化，即3Η及碳_14，即％，之同位素 於製備及偵測而廣泛的被使用。更進-步來說，以較重的 如氖，即扭取代’因其較大的代謝穩定性而能提 ’、寸疋冶療上的益處’如增加體内半生期或減少劑 二：因：’可用於一些特殊環境中。本發明同位素： :、，::： 已揭露於wo 03/077914中的流程來製 …〃糸製備期間藉由已準備好隨時可用的同位素椤处 峨代非同位素試劑，或在製備此鹽類時：有 可使用同位素標諸的硫酸。 “要， 或軟=:物:二適合口服的形式(例如藥片、錠劑、硬的 含油的或即時二二：分散的粉末或顆粒、糖聚、酿劑、 形式(例如極二：性懸浮液)、適合藉由吸入式投藥的 式投藥的形& 粉末或液體噴劑）、適合藉由吹入 注射的形式⑷:如極細的分離的粉末）、適合非經腸胃道 管内或灌輪劑量0的H溶液1於靜脈、皮下、肌肉内、血 如乳霜、軟膏、、予液或礼液）、適合局部投藥的形式（例 性懸浮液）、滴人/旋膠、含油溶液或懸浮液或即時製備的水 、&直腸投藥的形式（例如栓劑）。在一具體態 15 200800915 樣中，化合物1之硫酸氫鹽係口服投藥。一般而言，上述 組成物可使用傳統佐劑以習常方式製備。 活性化合物的投予量，視被治療者、病症及症狀的嚴 重性、投藥速率、化合物的處置及開藥醫師的斟酌而定。 然而，一有效的劑量範圍為約每天每公斤體重約001至約 100毫克，而約1至約35毫克/公斤/天較佳，以單一或分開 的知彳里方式投藥。對一 7 0公斤的人而言’劑量為約〇 · 7至7 〇 〇 〇 _ 耄克/天，而約70至約2500毫克/天則較佳。在某些例子中， 低於前述範圍下限的劑量者可能亦有效，而在其它實例 中，使用較大的劑量可能亦不會造成任何有害的副作用， 其條件在於此類較大的劑量可先分散成數個小劑量後，分 $在每天投藥中。諸如藥片及膠囊，—單位劑量形式將通 常含有，例如1-1000毫克的活性成分，而5_42〇毫克的活性 成分則較佳。較佳地為使用每日劑量範圍0 03_6毫克/公

……！你伞叼所定義 的匕合物1之硫酸氮鹽藉由、;A田 刀H Λ孤精田，口療去用於人類或動物體的治 療或預防的方法。本發明更進一步 Μ 规點馮將此發明所定 我的化““之硫酸氫鹽使用作為藥劑。纟更 點中，本發明提供本發明所定義的化 柞焱、二汰4 谓之石瓜酸風鹽用於 乍為〉。療透過ΜΕΚ所媒介之疾病 動物，唑L , 和別疋在溫血哺乳 堵如人類的增生性疾病、或不正常έ 癌症之藥劑。因此，本發明之另外的觀，= 發明所定義之化合物1之硫酸氫鹽之用途，=:: 16 200800915 治療透過MEK所媒介之疾病狀態，特別是在溫血哺乳動 物，諸如人類的增生性疾病、或不正常細胞生長，諸如癌 依據本發明更進一步的觀點，本發明提供一種用於治 療透過ΜΕΚ所媒介的疾病狀態，特別是在需要此種治療之 溫血哺乳動物，諸如人類的增生性疾病、或不正常細胞生 長，諸如癌症之方法，其包含投予一有效量之本發明所提 _ 之化合物1之硫酸氫鹽或本發明所定義之醫藥組成物至該 哺乳動物。 增生性疾病的特殊實例，其可使用本發明的鹽類或組 成物來治療，包括哺乳動物的過度增生性疾病。特殊的癌 症為腦H癌、鱗狀細胞癌、膀脱癌、胃_、騰臟癌、 乳癌'頭部癌、頸部癌、腎癌、腎臟癌、印巢癌、攝護腺 癌、結腸直腸癌、食道癌、睪丸癌、婦癌或甲狀腺癌。 然而，本發明的化合物及組成物亦可被用於非癌症過 ⑩度增生性病症的治療上，諸如良性皮膚增生（例如牛皮癖）、 血管再狹窄或攝護腺（例如良性攝護腺肥大症（ΒΡΗ))。 因ΜΕΚ所媒介的疾病的装农眘為丨丨r π m 1 _ _

治療。此類疾病可能包括腫瘤血管新生、 生成相關之疾病的 、慢性發炎疾病， 17 200800915 二如類風濕性闕節炎、動脈粥狀硬化、發炎性腸病，皮膚 二：’諸如牛皮癖、溼疹、及硬皮症、糖尿病、糖尿病視 :、病變、早產兒視網膜病變、老化型黃斑病變、血管瘤、 神經膠質瘤、璽$ $ & αΑ + 、 …、色素細胞瘤、卡波西氏肉瘤及卵巢癌、乳 a、肺癌、m臟炙、攝護腺癌、結腸癌及表皮癌。

Ί正常細胞生長”及、度增生性疾病用語在本 〆、中可日換使用，意指細胞生長不受正常調節機制所 =(例如接觸性抑制的喪失）。這包括如⑴因突變的酷胺 西夂激酶的表現或受體酪胺酸激酶的過度表現所增生的腫瘤 細胞（腫瘤）之不正常生長；⑺其它增生性疾病的良性及惡 I*生、’、田胞’其中異常酪胺酸激酶活化產生之不正常生長;(3) 任何藉由受體酪胺酸激酶而增生的腫瘤之不正常生長；（4) =何藉由異常絲胺酸/蘇胺酸激酶活化而增生的腫瘤之不正 系生長’（5)其它增生性疾病的良性及惡性細胞，其中異常 絲胺酸/蘇胺酸激酶活化產生之不正常生長。 除非有其它指定，此處所用之用語、、治療（treating)" 乃意指逆轉、減輕、抑制進展或避免病症或疾病，或一或 多種此種病症或疾病的症狀。除非有其它指定，此處所用 之用語、、治療（treatment)，，乃意指剛剛上述定義π治療 (treating)"的治療行為。 因此，病患可以本發明的化合物及組成物來治療，例 如被診斷出患有牛皮癬、血管再狹窄、動脈粥狀硬化、、 肺癌、非小細胞肺癌' 骨癌、CMML、胰臟癌、結腸直腸 癌、皮膚癌、頭頸部癌症、黑色素細胞癌（特別是侵犯皮膚 200800915 或眼内的黑色素細胞癌）、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門 附近區域的癌症、胃癌、結腸癌、乳癌、睪丸癌、婦癌（例 如，子宮肉瘤、輸卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、陰道 癌或外陰癌）、卵巢癌、多發性骨髓瘤、肝細胞癌、何杰金 氏淋巴瘤、食道癌、小腸癌、内分泌系統癌（例如，曱狀腺、 田J甲狀腺或月上腺癌）、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、攝 護腺癌、慢性或急性血癌、特別是兒童急性骨髓性白血病

固形瘤、淋巴細胞淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌（例如， 月細胞癌、腎盂癌）或中樞神經系統癌（例如，原發性中樞 神經系統淋巴瘤、脊椎軸癌、腦幹神經膠瘤或腦垂體腺癌）。 化合物1之硫酸氫鹽可用於單獨治療或除了化合物工之 硫酸氫鹽外，與其它一或多種物質及/或治療併用。此類合 併治療可藉由療程中個別組成物的同時、連續❹開投; 來達成。在醫療腫瘤學的領域中，合併不同型治療方式治 療癌症病患乃是正常的實施方式。在醫療腫瘤學中，此= 口併⑺療的其它組成，除了化合物丨之硫酸氫鹽外，可能 還有手術、放射線治療或化學治療。此類化學治療可能： 盍的治療劑種類，諸如： ^⑴抗血官新生藥劑，諸如會抑制血管内皮生長因子的 如，抗血管内皮細胞生長因子抗體[癌 :]、及VEGF受體酪胺酸激酶抑制劑，諸如4-(4-溴-2_ 乳笨胺基）·6-甲氧基.7_(1_甲基旅κ基甲氧基）喧唾琳 (:474 ;在w〇 Glm65 i中的實施例2)、4n |甲基 卞5基氧基）_6_甲氧基比口各咬小基丙氧基）啥唾琳 19 200800915 (AZD2171 ;在 WO 00/47212 中的實施例 240)、 vatalanib(PTK787 ； WO 98/35985) A SU1 1248(sunitinib ； WO 01/60814)、化合物，諸如揭示於國際專利申請案WO 97/22596 > WO 97/30035、WO 97/32856及 WO 98/13354 以 及那些藉由與本發明不同的機制作用者（例如，linomide、 整合素a v /3 3功能抑制劑、血管抑素、razoxin、沙利竇邁 (thalidomide)、MMP-2(基質金屬蛋白酶2)抑制劑、MMP-9(基 質金屬蛋白酶9)抑制劑及COX-II(環氧化酵素II)抑制劑）及 (ii)血管標把劑（例如，combrestastatin phosphate及揭 示於 WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、W〇 02/04434及WO 02/08213中的化合物以及敘述於國際專利申 請案號WO 99/02166中之血管損害劑（例如，N-乙醯基秋水 仙醇-Ο-磷酸鹽））；

(i i i)細胞生長抑制劑，諸如抗雌激素劑（例如，體得適 錠（tamoxifen)、弗瑞斯錠（toremifene)、那洛西芬 (raloxifene)、 卓羅昔芬（droloxifene)及愛碌西芬 (iodoxyfene))、雌激素受體下降調節劑（例如，氟維司群 (fulvestrant))、黃體酮（例如，megestrol acetate)、芳香酶 抑制劑（例如，阿那曲嗤（anastrozole)、來曲嗤（letrazole)、 福拉ϋ坐（vorazole)、及依稀美坦（exemestane))、抗助孕素、 抗雄性素（例如，氟他胺（flutamide)、尼魯米特（nilutamide)、 比卡魯胺（bicalutamide)及醋酸環丙氯地孕_ (cyproterone acetate))、LHRH激動劑及结抗劑（例如，戈舍瑞林乙酸鹽 (goserelin acetate)、亮丙瑞林（leuprorelin)及布舍瑞林 20 200800915 (buserelin))、5 α •還原酶之抑制劑（例如，非那雄胺 (finasteride))； (iv) 抗侵入劑（例如，金屬蛋白酶抑制劑如馬立馬斯他 (marimastat)及尿激酶纖溶酶原激活因子受體功能抑制劑或 抗肝素酶（heparanese)抗體）； (v) 生長因子功能抑制劑（此類生長因子包括，如血小 板知生生長因子及肝細胞生長因子），此類抑制劑包括生長 φ 口子抗體、生長因子受體抗體（例如，抗-erbb2抗體 trast腿mab [HerceptinTM]，抗视心抗體卿丨她⑽❿、抗 -erbBl 抗體 cetuximab[C225])及任何 Stern 等人，c川“μ reviews in oncology/haematology，2005，ν〇1·54，第 11-29 頁揭示的生長因子或生長因子受體抗體；此類抑制劑亦包 括酪胺酸激酶抑制劑，諸如表皮生長因子家族抑制劑（例 如’ EGFR家族赂胺酸激酶抑制劑，諸如Ν_(3_氯冰氯苯 基）7甲氧基- 6-(3-嗎琳代丙氧基）_喹σ坐琳_4-胺（gefitinib， • AZDi 839)、N-(3-乙炔基苯基）_6,7_雙（2_曱氧基乙氧基）喹 唑啉-4-胺（埃羅替尼（erl〇tinib)，〇81_774)及6_丙烯醯胺基_ N (3-氯-4-氯笨基）_7_(3-嗎啉代丙氧基）喹唑琳-4_胺（cn〇33) 及erbB2酪胺酸激酶抑制劑，諸如拉帕替尼（lapatinib)、肝 細胞生長因子家族抑制劑、血小板衍生生長因子家族抑制 刈，諸如伊馬替尼（lmabinib)、絲胺酸及蘇胺酸激酶抑制劑 (例如，Ras/Raf傳訊抑制劑，諸如法尼基（farnesyl)轉移酶 抑制劑，例如索雷弗尼（s〇rafenib)(BAY43_9〇〇6))、透過mek 及/或AKT激酶作用之細胞傳訊抑制劑、卜]^^抑制劑、 21 200800915 激酶抑制劑、IGF受體（類胰島素生長因子）激酶抑制劑； aurora激 if 抑制劑（例如，AZD1152、PH739358、VX-680、 MLN8054、R763、MP235、MP529、VX-528及 AX39459)及 細胞週期蛋白依賴性激酶抑制劑，諸如CDK2及/或CDK4抑 制劑； (vi)抗增生/抗腫瘤藥及其組合，就如醫藥腫瘤學中所 使用者，諸如，抗代謝物藥（例如，抗葉酸藥，如滅殺除癌 錠（methotrexate)、氟嘧錠類，如5_氟脲嘧啶、替加福 (tegafur)、嘌呤及腺苷酸相似物及阿糖胞苷、羥基脲，或 是如特別揭示於歐洲專利申請案號239362中之抗代謝物藥 之 ，堵如N-(5-[N-(3，4-二鼠-2-甲基-4·側氧口奎嗤琳 (〇x〇quinaZ〇lin)_6-基甲基）-N-甲基胺-2-噻吩甲醯基）_L_麸 胺酸；抗腫瘤抗生素（例如，蒽環類（anthracyciine)，諸如 阿黴素（addamycin)、撲類惡（bleomycin)、艾徽素 (doxorubicin)、道諾黴素（daunomycin)、泛艾徽素（epirubicin) 及乂達艾黴素（idarubicin)、排多癌（mitomycin_C)、可美淨 (dactinomycin)及普卡黴素（mithramycin));翻衍生物（例如， 順翻及卡鉑）；烷化藥劑（例如，氮芥、美法崙（melphalan)、 瘤可寧（chlorambucil)、白消安（busulphan)、環磷醯胺、異 環磷酰胺（ifosfamide)、亞硝脲（nitrosourea)及替派 (thiotepa))，抗有絲分裂劑（例如，長春花生物驗，諸如維 克絲丁（vincristine)、敏伯斯登（vinblastine)、長春花鹼醯 胺（vindesine)及溫諾平（vinoreibine);及紫杉醇類（tax〇id)， 諸如紫杉醇及剋癌易（taxotere));拓樸異構酶抑制劑（例如， 22 200800915 差向鬼臼毋素（epip〇d〇phyll〇t〇xin)，諸如滅必治（^叩⑽丨心) 曰匕泊苷（tenip〇slde)、安莎克林（細8扣如匀、癌康定 (iopotecan)、坎並 4全金 * / . 曰特賽辛（camptothecin)及抗癌妥 ⑽notecan));酵素（例如，天冬醯胺酸酶）；及胸苷酸合成 酶抑制劑（例如，雷替曲塞（raltitrexed)); 及額外化學治療劑形式包括： (Vii)生物反應調節劑（例如，干擾素）； φ (V111)抗體（例如，依決洛單抗（edrec〇1〇mab)); (ix)反義療法，例如那些關於上述所狀標的，諸如， ISIS2503(—種抗ras之反義）； ⑴基因治療法，包括如置換異常基因，諸如異常的p53 或異常的BRCA1或BRCA2，GDEpT法（基因導向酵素前藥 治療），諸如利用胞嘧啶脫氨酶、胸腺嘧啶激酶或細菌氣還 原酶酵素，及增加病患對化療或放射治療耐受性的方法， 諸如多重抗藥性基因治療；及 〆 • (Χ〇免疫治療法，包括如在活體外或活體内增加病电 腫瘤細胞免疫原性的方法，諸如介白素2、介白素4或_ 球-巨嗟細胞集刺激因子；減少丁細胞失能的方法，利用 轉染免疫細胞的方法，諸如細胞激素·轉染之樹突細胞；利 用細胞激素轉染之腫瘤細胞株的方法，以及利用抗特應 體的方法。 、心、几 例如，化合物1之硫酸氫鹽可與有效量之一或多種選自 抗血官生成劑、訊息傳導抑制劑及抗增生劑之物質合併使 23 200800915 在一特別的具體態樣中，抗血管生成劑，諸如MMP-2(基 質-金屬蛋白酶2)抑制劑、MMP-9(基質-金屬蛋白酶9)抑制 劑及COX-II(環氧化酶II)抑制劑，皆可與本發明化合物1之 硫酸氫鹽及本發明所述之醫藥組成合併使用。有用的COX-II抑制劑的實例包括希樂葆（CELEBRETM)(alecoxib)、伐地 考昔（valdecoxib)及羅非昔布（rofecoxib)。有用的基質-金屬 蛋白酶抑制劑的實例已敘述於WO 96/33 172、WO 96/27583 > WO 98/07697、WO 98/03516、WO 98/34918、 WO 98/34915、WO 98/33 768、WO 98/30566、WO 90/05719、 WO 99/52910、WO 99/52889、WO 99/29667、美國專利第 5,863,949號及美國專利第5,861,510號，這些全部都併於此 處作為參考。適當的MMP-2及MMP-9抑制劑為那些具有少 量或不具有抑制MMP-1的活性者。特別是那些相對於其它 基質-金屬蛋白酶（即，MMP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、 MMP-6、ΜΜΡ·7、MMP-8、MMP_10、MMP11、MMP-12及 MMP-13)而會選擇性抑制MMP-2及/或MMP-9者會被使用。 能用於本發明的特別的MMP抑制劑的實例為AG-3340、RO 32-3555及 RS 13-0830。 因此，本發明更進一步觀點就是化合物1之硫酸氫鹽與 上列（i)-(ix)之抗腫瘤劑中任何一種的組合使用。一本發明 更進一步的觀點係提供化合物1之硫酸氫鹽與上列（i)-(ix) 之抗腫瘤劑中的一或多種的組合使用。一本發明更進一步 的觀點係提供化合物1之硫酸氫鹽與上列（i)-(ix)之任何類 型的抗腫瘤劑組合使用。 24 200800915 此處’用語、、組合"的使用乃是指同時、分開或連續 投樂。在一個本發明觀點中，、、組合”意指同時投藥。在 另一個本發明觀點中，、、組合〃意指分開投藥。在本發明 更進一步觀點中，、、組合"意指連續投藥。其中，投藥係 為連續或分開者，其延遲投予第二成分之時間，不應喪失 此組合效果之益處。 依據一本發明更進一步的觀點，乃是提供一種包含化 合物1之硫酸氫鹽及一種選自上述（i)_(xi)的抗腫瘤劑之組 合的套組。 依據一本發明更進一步的觀點，乃是提供一種套組， 其包括： a) 第一單位劑量形式的化合物1之硫酸氫鹽； b) 一種選自上述（iHxi)的抗腫瘤劑為第二單位劑量形 式；及 c) 作為包含該第一及第二劑量形式之容器裝置。 化合物1已被發現在下列試驗中具有活性。於大腸桿菌 中表現N端具有6個His-標誌、構成性地活性的MEK1(2_ 393)’並且以傳統的方式（Ahn等人，Science 1994,265:966·

970)將蛋白質純化。MEK1的活性被評估，其係藉由測量/ 33P-ATP 上之 r ”p_phosphate併人；^端 His標誌之 ERK2，此 蛋白質乃是於大腸桿菌中表現並以傳統方法純化，而且是 在MEK1存在的狀況下。此試驗乃是在96孔聚丙烯盤中進 行。培養混合物（100微升）包含ΡΗ7·4之25mM之Hepes、10mM 之氯化鎂、5mM之；5-甘油磷酸鹽、ι〇0μΜ之釩酸鈉、5mM 25 200800915 之DTT、5nM之MEK1及1 μΜ之ERK2。抑制劑係懸浮於 DMSO，而所有反應的進行，包括對照組，下在1%DMS0 的最終濃度下進行。反應乃藉由添加1〇μΜ之ATP(伴隨 0.5gCi之τ 33P-ATP/孔）而起始，並且培養於周圍溫度中持 續45分鐘。加入等體積之25%的TCA以終止反應並沉澱此 蛋白質。沉澱的蛋白質以玻璃纖維B過濾盤獲取，而過量 的標諸 ATP則以 Tomtec MACH III harvestor洗掉。在 Packard Microscint 20以30μί/孔加入過濾盤前，可以先將過濾盤風 乾，且該盤以Packard TopCount計數。在此試驗中，化合 物1表現出的IC5Q少於50微莫耳濃度。 實施例 為了闡釋本發明，接下來的實施例皆被包括。然而， 需被了解的是這些實施例並不會侷限本發明並且僅是意指 建議實施本發明的方法。所提供產率係用於所進行之實施 例，並且極可能透過更進步研發而增加產率。1H NMR光譜 (400MHz)以 TMS(O.OOppm)為參考值、13C NMR光譜（100MHz) 以NMR溶劑（3 9.5ppm)為參考值及19F NMR光譜以三氯氟甲 烷（O.OOppm)為參考值。FTIR光譜由 Nicolet Magna 860 ESP FTIR光譜儀以不同方式獲得，包括來自於粉狀KBr中之此 物質的2%w/w分散物，其係利用DRIFTS取樣技術，超過 4,000-400公分-1的中紅外線光譜區。 實施例1 化合物1之硫酸氫鹽的製備 26 200800915

rTH 加入硫酸（12·3毫升、〇·226莫耳）至〇-5t之於2_ 丁酮（68〇 毫升）及水（115毫升）中之6_(4_溴_2_氯_苯胺基）_7_氟_3•甲基 苯并咪唑—5-羧酸（2_羥基·乙氧基醯胺（100克、〇.2〇6 莫耳）（可如敘述於WO 03/077914的實施例1〇中獲得，該文 獻可做為本發明參考資料，且描述如下）之攪拌懸浮液中， 接著加入水（5毫升）並維持溫度在1(rc或更低。將此攪拌混 &物加熱至65 C並在過濾掉外來雜質前持續3〇分鐘。此過 濾器以2-丁酮（85毫升）及水（15毫升）之混合物清洗。將此合 併的濾液在加入2-丁酮（500毫升）前，先加熱至72χ：並維持 溫度於60-72。(：間。產生的混合物在大氣壓力（大約蒸餾溫 馨 度為73_74°C )下進行蒸餾直到收集到500毫升的餾出物。 加入第二次等分部分之2_ 丁酮（5〇〇毫升），並維持此混 合物的溫度高於70°C。產生的混合物再次蒸餾直到收集到 250毫升的餾出物。該混合物被冷卻至〇_5它達約1小時。將 產生的漿液過濾，以2_ 丁酮（240毫升）清洗，並在減壓、5〇 t下乾燥，直到達到恆重，產生一灰白色結晶固體的6_(4_ 溴_2_氯-苯胺基）_7_氟_3_曱基-3H-苯并咪唑巧_羧酸（2_羥基_ 乙氧基）-醯胺硫酸氫鹽（103·5克、〇·186莫耳、㈧％產率）。 W-NMRGOOMHz、D6 DMSO) 3 3·58(2Η、t、Ch2〇h)、 3·89(2Η、t、Ch2〇N)、3·99(3Η、s、CH3)、6·47(1Η、dd、 27 200800915

ArH)、7·29(1Η、dd、ArH)、7·63(1Η、d、ArH)、7·91(1Η、 s、ArH)、7·96(3Η、br、ROH、NH、SOH)、8·10(1Η、br、 ArNH)、8.94(1H、s、NCHN)、11.79(1H、s、ONH)。13C NMR(100MHz、D6 DMSO)占 32.1(CH3)、58.5(CH2OH)、 77.3(CH2ON)、108.2(CH)、109.6(CBr)、115.8(CH)、 120.6(CC1)、122.0(C)、125.0(CC = O)、129.4(C)、130.5(CH)、 131.1(CH)、132.3(C)、140.6(C)、145.8(CF)、146.5(CH)、 164.2(C=0)。 紅外線分析的結果顯示於圖2。光譜線的標定（Spectra^ assignment)摘述於表 1。 表1 波數（公分^ ~ 3,255 3,200 - 2,700 2,700 - 2,300 1，673 1,653 1，640 - 1，370 I括初級絲目之ΟΉ伸縮振‘~^ (stretching vibration)及二級芳香胺及 二級醯胺基團之N-H伸縮振動。 包括芳香環及苯并味ϋ坐基團之=C4j伸 縮振動及脂肪族C_H伸縮振動。 包括苯并咪唑1 : 1硫酸鹽基團之多個 NH+伸縮振動。 二級醯胺基團之C=〇伸縮振動，其中 羰基受不同環境影響如氫鍵結。 包括C==C芳香環伸縮振動，笨并咪唑 基團之OC及C=N伸縮振動，初級醇 基團之0-H變形振動及脂肪族變 形振動。 28 200800915 波數（公分、 標定 1，570 二級醯胺基團之CNH組頻譜帶 (combination band) 〇 1,506 包括二級芳香胺基團之CNH彎曲振動 (bending vibration) ° 1，213 芳基C-F伸縮振動。 1,189 苯并咪唑1:1硫酸鹽基團之不對稱S〇3· 伸縮振動。 1,100-1,000 包括初級醇基團之〇〇伸縮振動及芳 基C-Br伸縮振動。 1，011 苯并咪唑1 : 1硫酸鹽基團之對稱8〇3· 伸縮振動。 920 - 600 包括1，2,4-三取代之芳香環及苯并咪 唑基團之C-H wag振動及〇=C環彎曲 振動。 888 包括苯并咪唑1 : 1硫酸鹽基之S_0(H) 伸縮振動。

實施例1A 化合物1之硫酸氫鹽的熨備 將硫酸（1.52毫升、27.86毫莫耳）加入於四氫吱喃 (THF)(62毫升）及水（8毫升）之6-(4-溴-2-氯笨胺基）-7_氣 甲基-3H-笨并咪唑-5-羧酸（2-羥基乙氧基醯胺（1〇克、 0·〇214莫耳）（可如敘述於WO 03/077914的實施例1〇中獲 得，該文獻可做為本發明參考資料，且描述如下）之授掉雜 29 200800915 芋、2 ,此日守溫度需維持於1 〇°c或更低。在過濾掉任何外 來雜貝泊加熱攪拌混合物至65X：並持續30分鐘。然後加 (150毛升）至混合物中並維持溫度高於6〇。〇。然後冷 匕口物至0-5 C達約2小時。過濾產生的漿液，以THF(3〇

毛升U洗並於50它減壓乾燥，直到達到恆重，產生一灰白 色…b曰口體的6_(4·溴_2_氯苯胺基）_7_氟_3_甲基苯并咪 坐5羧齔（2_羥基乙氧基）_醯胺硫酸氫鹽pH克、〇17莫 耳82%產率）。該產物與上面實施例丨所產生者相同。

實施例1B K4 /臭 _3_ 甲基 _3H-茉# 咪唑-5-羧酸（2_ 氧基V醯胺的事偌 硝基甲醅:在容量3公升的三 頦圓底燒瓶裝入125毫升的硫酸。加入發煙硝酸（8 ·4毫升、 199¾莫耳）並緩恢攪拌此混合物。達分鐘以上，將$克數 份之2,3,4-二氟苯甲酸（25克、142毫莫耳）分批加入。攪拌 此深棕黃色溶液60分鐘至反應完成。將反應混合物倒入i 升的冰：水混合物中，並以二乙基醚萃取（3χ6〇〇毫升）。將 合併萃取物乾燥（MgSOd並在減壓下濃縮以產生一黃色固 體。將此固體懸浮於己烷中並攪拌3〇分鐘，之後過濾產生 29克（92%)的灰黃色固體的淨化產物：MS APCI㈠m/z 220(M-1)偵測。 步驟Β^_1ΐ·胺基_2,3·二氟硝基笨甲酸:將氫氧化銨溶 液（〜30%於水）（35毫升、271毫莫耳）加至2,3,4-三氟-5-硝基· 本曱酸（15克、67.8¾莫耳）的30¾升水溶液中並於〇°c攪 200800915 拌。當氫氧化銨加入完成後’將反應物加温至室溫並攪拌 之。2.5小時後，將反應混合物冷卻至0°C並小心加入濃鹽 酸直到反應混合物酸鹼值達到0。以水（30毫升）稀釋反應混 合物並以二乙基醚萃取之（3x50毫升）。乾燥（硫酸镁）此合併 的有機萃取物並減壓濃縮以得到1 4克（95%)所要的純的產 物：MS APCI(-)m/z 217(M-1)偵測。 童驟C:_生-胺基·2,3-二氟-5-石肖基笨甲酸甲1酷:在氮 _ 氣、〇°C下，將於己烷（6.88毫升、13.75毫莫耳）中之2Μ的 四甲基矽烧（TMS)重氮甲烧之溶液加至4-胺基-2,3-二氟- 5-石肖基苯甲酸（2.00克、9·17毫莫耳）的25毫升4:1四氫呋喃 (THF):甲醇之懸浮液中。在上述加入完成後，加溫反應混 合物至室溫。〇 _ 5小時後，小心加入醋酸以破壞過量的tms 重氮曱烧。然後’此反應在減壓下濃縮並且於真空中乾燥 出1.95克所欲的純產物：APCI(-)m/z 231(Μ-1)偵測。 兔驟D: 4_胺基硝基_2_苯胺篡_笨甲酸曱基酯： 馨懸浮4-胺基-2,3-二氟-5-硝基苯甲酸甲基酯（23·48克、1〇11 笔莫耳）於二甲苯（125毫升）中並加入苯胺（92毫升、1〇11毫 莫耳）。在125 C及氮氣下將此反應混合物攪拌16個小時。

色固體，其以二 以二甲苯清洗後再以二乙基醚清洗。得到 莫耳）的黃色固體，其為所欲之純產物。該 縮，於二氯甲烷中再溶解及透過以二氯曱 /中洗。該所欲部分在減壓下濃縮以產生褐 乙基_研制以產生5.47克（17.91毫莫耳）之 31 200800915 黃色固體，其為所欲之純產物。該合併產物產率為27.69克 (90%)。MS APCI(-)m/z 304(M-1)偵測。 步驟E: 7-氟-6-苯胺基-3H-茉#咪唑_5_羧酸曱基酯：4-胺基-3-氟-5-硝基-2-苯胺基·苯甲酸甲基酯（16.70克、54.71 毫莫耳）、甲酸（250毫升、6·63莫耳）及20% Pd(OH)2/C(9.00 克、16.91毫莫耳）之乙醇（250毫升）於氮氣下、4〇t攪拌2小 時，之後於95 °C攪拌16小時。冷卻反應混合物至室溫並透 φ 過助濾劑過濾並以乙酸乙酯漂洗。濾液以減壓方式濃縮出 一黃色固體。將此固體以二乙基醚研制，產生成13.47克（86%) 所要之棕褐色的固體產物。MS APCI(+)M/Z 286(M+1)偵 測；MS APCI(-)m/z 284(M-1)偵測。 步驟F: 6_(4-漠-笨胺基）-7 -氣-3H-笨并喻唾轉酸甲基 IL·將7-IL-6-苯胺基-3Η-苯并味嗤-5-魏酸曱基醋（4·99克、 17.51毫莫耳）溶於ν，Ν-二甲基甲醯胺（275毫升）中。加入固 體Ν-演琥轴醯亞胺（3.15克、17.70毫莫耳）並且將此反應混 _ 合物於氣氣、室溫下授拌。3 0分鐘後，加入飽和亞琉酸氫 鈉水溶液淬滅。然後，將此反應混合物倒入分液漏斗並以 水及乙酸乙酯稀釋之而使液相分層。水層以乙酸乙酉旨萃取 之。此合併有機萃取物以水清洗三次後以鹽水清洗一次， 然後乾燥（硫酸鈉）並在減壓下濃縮產生6·38克純的棕褐色 固體之所欲產物。MS ESI(+)m/z 364，366(M+Br pattern) 價測。 溴氯-苯胺基）-7-氟-3 ΗΊ并味唾_5_藉 氣lAH :將6-(4-溴-苯胺基）-7-氟-3Η-苯并咪唑_5_羧酸甲 32 200800915 基酯（6·38克、17.51¾莫耳）溶於n，N-二曱基甲醯胺（275毫 升）中。加入固體N-氯號珀醯亞胺（2·36克、17.70毫莫耳）並 且將此反應〃b合於氮氣、室溫下攪拌，直到反應完成（％ $ 天）。將飽和亞硫酸氫鈉水溶液加至此反應混合物中淬滅而 成一懸浮液。此生成固體以過濾收集之，然後以水及二乙 基醚清洗及在減壓下乾燥以產生6·07克（87%)的米黃色固體 之所欲純產物。MS ESI(+)m/z 398，400(M+Br pattern)债 測。 步轉_U-(4-溴-2·氣茉胺基）-7-氟-3 -甲某-3Η-笨并咪唑 羧酸ΐ.碁酯及6_(4_漠氯茉胺基氤-1-甲某-1Η_苯并 兔唑羧釀甲基酯：將6-(4-溴-2-氯-苯胺基）-7-氟_3Η_苯并 咪唑-5-羧酸曱基酯（150毫克、〇·38毫莫耳）、碘甲烷（28微 升、0.45毫莫耳）及碳酸鉀（78毫克、〇·56毫莫耳）於二甲基 甲醯胺（1 ·5毫升）中的溶液於75 攪拌1小時。此反應混合 物以乙酸乙酯稀釋，然後以飽和碳酸鉀水溶液清洗兩次， 然後以鹽水清洗及乾燥（硫酸納）。快速管柱色層分析（2〇: 1 二氯甲烧/乙酸乙酯）提供5 6毫克（3 6%)的較流動的白色固體 的6-(4-溴-2_氣苯胺基）-7-氟-3-曱基-3Η-苯并咪唑-5-羧酸曱 基酯。19F NMR(376MHz、CD3OD)-133.5(s)。MS APCI(+)m/z 412，414(M+，Br pattern)偵測。54毫克（35%)的白色固體 6-(4-漠-2 -氣本胺基）-7 -氣-1-甲基-1 Η-苯并咪嗤-5-羧酸曱基 酯亦被分離出來。19F NMR(376MHz、CD3〇D)-139.9(s)。MS APCI(+)m/z 412，414(M+，Br pattern)偵測。 堂^lL^(4·溴-2-氣-茉胺某）-7-氟-3-甲基-3H-茉养咪唑 33 200800915 -5 -叛酸:將6 ( 4 -漠-2 -氣贫甘、 乳-本胺基）-7·氟-3 -甲基-3H-苯并咪 唑-5-羧酸甲基酯（56毫$ ，n ! j山处 見0.14¾莫耳）溶於2:1 thf/水（3 毫升）中及加入氫氧化鈉⑺以古 u奶㈧.55¾升、水溶液、〇·55毫莫 耳）。攪拌兩小時後以旋隸蒗&、士 ϊ 焚轉条發減少四分之一此反應的起始 體積並將殘餘物以水稀釋5 古 — W袢至50笔升。藉由加入1.0Μ HC1水 溶液酸化此水溶液至酸驗值2,，然後以ι:ι四氣咬喃/乙酸乙 西曰萃取（3x)，乾燥（硫酸鈉）及在減壓下濃縮以產生〇毫克

(79%)的灰白色固體純羧酸。Ms ESI(+)m/z Μ?，398(M+Br pattern)偵測。 氟-3-甲基-3H-茉并咪唑 ili_,羧酸（2-乙增氧基）醯胺：將6_(4·溴-2-氯-苯胺 基）-7-氟-3 -甲基-3Η-苯并咪唑_5_羧酸（2 〇〇克、5毫莫耳）、 〇-(2-乙烯氧基·乙基）_羥基胺（〇·776克、7·5毫莫耳）、 HOBt(0.88克、6.5毫莫耳）、三乙胺（丨·6!毫升、23毫莫耳） 及EDC1( 1.3克、6.5毫莫耳）溶於二甲基甲醯胺（52毫升），且 於室溫攪拌48小時。反應混合物以乙酸乙酯稀釋，以水洗 (3x)、飽和碳酸鉀洗（2χ)、飽和氯化銨洗（2χ)、鹽水洗，乾 燥（Na2S〇4 )及在減壓下濃縮產生灰白色固體。以二乙基 _研制該固體以產生2.18克（90%)灰白色固體之所欲產物。 MS ESI(=)m/z 483，485(M+Br pattern)摘測。 企屬K: 6-(4·溴-2-氪-苯胺基V7-氟-3-甲基-3H-1并咪 逢二^^1羧酸（2-羥某氧篡）醯胺：將鹽酸Π4毫升、1.0M水溶 液、14毫莫耳）加入6-(4-溴-2-氯-苯胺基）-7-氟-3 -甲基·3Η-苯并咪唑-5-羧酸（2-乙烯氧基乙氧基）醯胺（2·18克、4·50毫 34 200800915 a 莫耳）於乙醇（50毫升）中之懸浮液並且攪拌該混合物24小 %。以$疋轉蒸發以浪縮此反應混合物至乾燥並分開此固體 於3 ·· 1乙酸乙酯/四氫呋喃及飽和碳酸鉀間。水相以3 :丨乙酸 乙酯/四氫呋喃萃取（3x)，並乾燥（硫酸鈉）此合併有機物， 及、/辰縮產生2.11克（100%)的6-(4-溴-2-氯苯胺基）-7-氟-3-甲 基-3H-苯并咪唑-5-羧酸（2-羥基乙氧基）醯胺的灰白色固 體。MS ESI(+)m/z 457，459(Μ+Βτ pattern)偵測。屮 • NMR(4〇〇MHz、MeOH-d4" 8.26(s，m)、7 78(s1h)、 7.57(d，lH)、7.24(dd，lH)、6.40(dd，lH)、3.86(s，3H)、 3_79(m，2H)、3.49(m，2H)。19F NMR(376MHz，MeOH-d4)- 133.68(s)。 實施例2 硫酸氫鹽之物理性質研究 實施例1產物可以下列測試決定其物理特性。 粉狀X光繞射（PXRD) φ 所有樣本皆以Bruker D5000繞射儀測試。X光粉末繞射 光譜乃是由將結晶鹽樣本中裝置在Siemens單晶矽（single silicon crystal(SSC))晶圓黏片（wafer mount)上並利用載玻 片之幫助展開此樣本成一薄層來測定。以每分轉數3〇旋轉 此樣本（以改善計算統計）並藉由銅長細聚焦管所產生之X光 照射，操作控制於40kV及40mA且波長為1.5406埃。準直的 X光源穿過一 V20自動可變分歧狹缝組（automatic variable divergence slit set )，並以一 2 毫米反散射狹缝（antiscatter slit )及0.2毫米摘測狹縫（detector slit)導引反射輻射。暴 35 200800915 露此樣本每0·02度2-Θ增加量1秒（連續掃瞄模式）在θ_θ模式 的範圍2度至40度2-Θ間。此運轉時間為31分41秒。此設備 配備有一閃燦什數斋以作為偵測器。控制及資料獲取乃是 藉由 DeU 〇ptiplex 686 ΝΤ 4.〇 w〇rkstaU〇n以⑽加咖軟體 操作。 資料在範圍2-θ 2_4〇。間收集，於每4秒提高—次的2_θ 〇.〇2。的增加量並分類於表2，伴隨由固定狹縫⑴⑻s叫的

• 繞射儀測量衍生的相對強度。 表2

掃描結果表示於 硫酸氫鹽的XRPD， 圖 而 最強的最強峰表示於表 表3 其中上方灰線表示化合物1之 下方黑線表示自由形式。一開始就 3。位於24.59。的峰則特別強。

36 200800915

、x光粉末繞射之熟習該項技術者將了解峰之相對強渡 =被例如，尺寸大於30微米之顆粒及非單一高寬比率所 衫響，其可影響樣本的分析。熟習該項技術者亦將了解反 射的位置可被位於繞射儀之樣本的精確高度及繞射儀之校 令所影響。樣本的表面平面亦可具有小影響。因此，所呈 現之繞射圖數據並不被視為絕對值（參見Jenkins，r. &

Snyder ， R.L. "Introduction to X-Ray p〇wder

DiffraCt〇metry” ’ J〇hn WUey & s〇ns，Μ%，為進一步訊 息）。 實施例3

於狗中進行研究，其係測量經禁食的狗投予15〇毫克於 7·5宅升不同的分散調配物的自由鹼等價口服劑量，該分散 調配物中所含化合物i為自由形式或硫酸氫鹽形式於藥學 上可接受分散劑中。 給體重12_17公斤及2到6歲大的經禁食的米格魯犬 (beagle dog) 口服每三個劑量日150毫克的單一劑量。每 劑量日係間隔一週。 所有調配物係臨時在分劑前製備，其係藉由1〇毫升可 棄式注射器加7·5毫升適當的分散溶液至含有1 5〇毫克適當 37 200800915 樂物形式的自由驗等價物之管拖 铁銘a t 于丨貝卿心g瓶，然後加盍並震盪混合3〇 秒以形成一分散液。 ，此分散液利用可棄式注射器由管瓿中移出並藉由置入 胃部的強飼管投予該動物藥物。藉由2〇毫升可棄式注射器 加入15¾升水沖洗管瓶兩次（總沖洗體積=3〇毫升），然後加 蓋震盪5秒，利用可睾放注射哭劣夕山& J π』茱式/王射态f夕出官瓶内沖洗液並藉由 強飼管投予此沖洗液至動物中。

狗每日被餵予約400克的特殊飲食服務實驗餐A (Special Diet Services Lab〇rat〇ry — a )及無限制的水。 於肝素鐘（lithium hepadn)管中的全血（2毫升）由頸靜脈 抽取，抽取時間分為給藥前立刻及給藥後〇5、^、2、34、 5、6、8、12、18、24、36及48小時。血液们嶋啊離心 15分鐘後將血漿移至血液收集管且該血激館藏於_2吖中直 到要進行分析時。 分析血漿（50mcL)中化合物1之、;g痒 _ ^ ’T 口物1之/辰度。兩隻狗被排除分

析，因其在服藥後沒多久就發生嘔吐。 土 在口服藥物後的平 均化合物1血漿濃度量變曲線表示於圖3中，其中以▲表示 的線闡述一包含化合物丨之硫酸氫鹽的調配物，而以二 的線顯示出在相同調配物下化合物丨自由鹼的結果。"， 兹顯示調配物的改變對暴露有相對小的影響力（結果未 於此公開）。然而，當化合物1以硫酸氫鹽給藥時，產生一 實質約4至8倍的暴露增加。 。更進一步， 而言係容易地 前述係被認為僅作為闡述本發明之原理 因為許多修飾物及改變物對熟習該項技術者 38 200800915 顯而易知，所以並非是要去限制本發明至如上述所顯示的 明確結構及方法。因此，所有適當的修飾物及等價物可落 於如以下申請專利範圍中所定義之本發明的範圍中。 、、當字彙、、包括（comprise：r、、、包括（c〇寧广、 、、包含（include)，，、'、包含（including)„及、'包含㈣㈣以广 用於本案說明書及接下|的申專利範圍日夺，乃是意欲去 詳細指明所陳述的特徵、整體、成分或步驟的呈現，但並 籲非排除一或更多個特徵、整體、成分或步驟或其群組的呈 現或增加。 【圖式簡單說明】 伴隨的圖式（其併於此處且成為說明書之一部分）列 舉說明本發明之非限制性的具體態樣，及與描述一起作為 解釋本發明之原理。 圖1顯示化合物1硫酸氫鹽的XRPD。 圖2顯示利用DRIFTS取樣技術獲得化合物1的硫酸氯鹽 P 的紅外線光譜。 圖3顯示在投予1 5 〇臺古白+认¥ /西rt ^、 u毛見自由鹼4彳貝口服分散劑量的化 合物1(χ)及硫酸氫鹽（▲)绛林备从始 厂、口不艮的狗後，化合物1血漿濃度 程度之結果。 【主要元件符號說明】 益 $ 39

Claims (1)

1. 200800915 十、申請專利範圓·· κ一種化合物1的硫酸氫鹽。 2.根據申請專利範圍第1項之化合物的1硫酸氫鹽，其 為無水形式。 3 ·根據申請專利範圍第1項之化合物1的硫酸氫鹽，其 為溶劑合物的形式。 卜4·根據可述申請專利範圍項中任一項之化合物1的硫酸 氣鹽’其為結晶狀。 5·根據申凊專利範圍第4項之化合物i的硫酸氫鹽，其 中族化合物1的硫酸氫鹽在χ射線粉末衍射圖譜（x_ray powder diffracti〇n pattern)中具有至少一個約 24 59。的特定 峰〇 6·根據申請專利範圍第5項之化合物i的硫酸氫鹽，其 中該化合物1的硫酸氫鹽在X射線粉末衍射圖譜中，於約2_ Θ之特定峰相當於24·59。、π·”。、23 99。、27 65。、1224。、 23.49。、24·30〇、17.02。、25.91。及22.50% 人根據申請專利範圍第丨項之化合物丨的硫酸氫鹽，其 具有與圖1顯示的X射線粉末衍射圖譜實質上相同的χ射線 粉末衍射圖譜。 8·根據申請專利範圍第〗或2項之化合物丨的硫酸氫鹽， 其中為非晶形式。 9·一種製備根據申請專利範圍第2至8項中任一項之化 合物1的硫酸氫鹽之方法，該方法包括 (i)在有機液體中，將化合物j的漿液與至少一化學計 40 200800915 量之硫酸與水反應。 (ii)從生成溶液中回收鹽；及 (ni)之後，若意欲或需要，形成其溶劑合物。 10. 根據中請專利n圍第9項之方法，其中在步驟 加入的水量限於必須能確保鹽形成的量。 11. 根據申請專利範圍第9或10項之方法，其 係在溫度自40-80°C下進行。 1 )

   12. 根據申請專利範圍第9至u項中任一項之方法 中有機液體為CV6烷基酮。 ’其 13_根據申請專利範圍第9至12項中任一項之方法，复 中硫酸氫鹽係在步驟2中’ #由冷卻反應混合物，選擇^ 地添加進—步的有機液體來回收，以便使硫酸氫鹽沉凝。 ☆根據申請專利範圍第1至8項中任一項之化合物1的 爪西夂氫鹽’其係使用作為用於治療透過所媒介的 狀態之藥劑。 、丙 15.—種根據申請專利範圍第1至8項中任-項之化合物 1的石瓜酸虱鹽之用途，其係用於製備用於治療透過所 媒"之疾病狀態的藥劑。 1 6 · 一種治療需要此種治療之溫血哺乳動物中透過μεκ 所媒”之疾病狀態之方法，纟包括投予該哺乳動物有效量 之根據申請專利範圍第項中任一項之化合物1的硫酸