HK40059692B - Multimeric coding nucleic acid and uses thereof - Google Patents

Claims (14)

1. Acide nucléique codant multimère (MCNA) comprenant deux polynucléotides ou plus, liés via un pont oligonucléotidique comprenant une liaison phosphodiester inversée 3'-3' de telle sorte que le composé acide nucléique codant multimère comprenne deux extrémités 5' ou plus, dans lequel au moins l'un des deux polynucléotides ou plus est un polynucléotide codant et au moins l'un des deux polynucléotides ou plus est un polynucléotide non codant, et dans lequel chaque polynucléotide est un polyribonucléotide.
2. MCNA selon la revendication 1, dans lequel :

   (a) le polynucléotide codant code pour une protéine d'intérêt ; et

   (b) le polynucléotide non codant inhibe l'expression génique.
3. MCNA selon la revendication 1 ou la revendication 2, dans lequel :

   (a) le polynucléotide codant est un ARNm ; et/ou

   (b) le polynucléotide non codant est un petit acide ribonucléique interférent (siRNA), un microARN (miRNA) ou un petit ARN en épingle à cheveux (shRNA).
4. Composé MCNA selon l'une quelconque des revendications précédentes, le MCNA comprenant :

   (a) un polynucléotide codant qui code pour l'ARNm du régulateur de la conductance transmembranaire de lamucoviscidose (hCFTR), lié à un polynucléotide non codant via une liaison d'extrémité 3' entre les polynucléotides ;

   (b) un polynucléotide codant qui code pour l'ARNm de la phénylalanine hydroxylase humaine (hPAH), lié à un polynucléotide non codant via une liaison d'extrémité 3' entre les polynucléotides ; ou

   (c) un polynucléotide codant pour l'ARNm de l'ornithine transcarbamylase humaine (hOTC), lié à un polynucléotide non codant via une liaison d'extrémité 3' entre les polynucléotides.
5. MCNA selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel un ou plusieurs des polynucléotides codants comprennent une région 5' non traduite (5' UTR) et/ou une région 3' non traduite (3' UTR) , éventuellement dans lequel un ou plusieurs des polynucléotides codants comprennent une 3' UTR, éventuellement dans lequel la 3' UTR a une longueur de 5 à 2000 nucléotides.
6. MCNA selon la revendication 5, dans lequel la 3' UTR comprend :

   (a) une pluralité de segments multi-A avec des espaceurs entre eux, éventuellement dans lequel :

   (i) chacun des segments multi-A comprend 8 à 50 adénosines consécutives ;

   (ii) la pluralité des segments multi-A est comprise entre 1 et 100 ;

   (iii) les espaceurs ont des longueurs différentes, comprises entre 5 et 100 ; et/ou

   (iv) les espaceurs comprennent de l'ADN, de l'ARN et/ou des bases modifiées, éventuellement dans lequel les bases modifiées sont choisies parmi 2'-OMe-A, 2'-OMe-G, 2'-OMe-C, 2'-OMe-U, 2'-F-A, 2'-F-G, 2'-F-C, 2'-F-U, LNA-A, LNA-G, LNA-C, LNA-U, la N6-méthyl-adénosine, la 2-thiouridine (2sU), la 5-méthyl-cytidine (5mC), la pseudouridine (ΨU) et la 1-méthyl-pseudouridine ; et/ou

   (b) comprend une structure pseudonœud ; et/ou

   (c) n'est pas suivie d'une queue de polyadénylation (poly-A) .
7. MCNA selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel un ou plusieurs des polynucléotides codants comprennent une queue poly-A, éventuellement dans lequel la queue poly-A a une longueur de 25 à 5000 nucléotides.
8. MCNA selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, dans lequel la 3' UTR se lie à des protéines se liant au poly-A (PABP) et/ou la 3' UTR comprend un motif de séquence « kissing loop ».
9. MCNA selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel :

   (a) les nucléotides constituant le pont oligonucléotidique sont choisis dans le groupe constitué par 2'-OMe-A, 2'-OMe-G, 2'-OMe-C, 2'-OMe-U, 2'-F-A, 2'-F-G, 2'-F-C, 2'-F-U, LNA-A, LNA-G, LNA-C, LNA-U, la N6-méthyl-adénosine, la 2-thiouridine (2sU), la 5-méthyl-cytidine (5mC), la pseudouridine (ΨU) et la 1-méthyl-pseudouridine ;

   (b) le pont oligonucléotidique comprend au moins une liaison covalente à un fragment actif, éventuellement dans lequel le fragment actif est un groupe ciblant, un peptide, un produit de contraste, une petite molécule, une protéine, un ADN et/ou un ARN ; et/ou

   (c) les nucléotides proximaux par rapport à la liaison inversée 3'-3' sont fonctionnalisés avec un ou plusieurs agents ciblant GalNac triantennaires.
10. MCNA selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel :

    (I) le polynucléotide codant comprend un ou plusieurs nucléotides modifiés éventuellement dans lequel :

    (a) les nucléotides modifiés sont choisis dans le groupe constitué par 2'-OMe-A, 2'-OMe-G, 2'-OMe-C,2'-OMe-U, 2'-F-A, 2'-F-G, 2'-F-C, 2'-F-U, LNA-A, LNA-G, LNA-C, LNA-U, la N6-méthyl-adénosine, la 2-thiouridine (2sU), la 5-méthyl-cytidine (5mC), la pseudouridine (ΨU) et la 1-méthyl-pseudouridine, éventuellement dans lequel les nucléotides modifiés substituent 1 à 100 % des bases natives correspondantes, éventuellement dans lequel :

    (i) au moins 25 % des uridines sont remplacées par des 2-thiouridines ; et/ou

    (ii) 100 % des cytidines sont remplacées par des 5-méthylcytidines ; et/ou

    (b) les nucléotides modifiés sont en outre modifiés par une substitution 4'-thio sur le noyau ribose ; et/ou

    (II) les nucléotides natifs des polynucléotides sont modifiés par une substitution 4'-thio sur le noyau ribose.
11. Composition comprenant le MCNA selon l'une quelconque des revendications précédentes encapsidé ou complexé avec un véhicule d'administration.
12. Composition selon la revendication 11, dans laquelle le véhicule d'administration est choisi dans le groupe constitué par les liposomes, les nanoparticules lipidiques, les nanoparticules lipidiques solides, les polymères, les virus, les sol-gels et les nanogels.
13. Composition comprenant le MCNA selon l'une quelconque des revendications précédentes pour une utilisation en thérapie.
14. Composition selon la revendication 13, dans laquelle le MCNA est administré par une voie d'administration choisie dans le groupe constitué par une administration intraveineuse, une administration sous-cutanée, une administration orale, une administration sous-dermique, une administration oculaire, une administration intrapulmonaire par injection intratrachéale, une administration intramusculaire, une administration intrathécale ou une administration intraarticulaire, éventuellement dans laquelle le MCNA comprend un polynucléotide codant qui code pour :

    (a) l'ARNm du régulateur de la conductance transmembranaire de la mucoviscidose (hCFTR) ;

    (b) l'ARNm de la phénylalanine hydroxylase humaine (hPAH) ; ou

    (c) l'ARNm de l'ornithine transcarbamylase humaine (hOTC).