HK40043947B

HK40043947B - Genetically-modified cells comprising a modified human t cell receptor alpha constant region gene

Info

Publication number: HK40043947B
Application number: HK42021034118.6A
Authority: HK
Inventors: Derek Jantz; James Jefferson Smith; Michael G. Nicholson; Daniel T. MACLEOD; Jeyaraj ANTONY; Victor Bartsevich
Original assignee: Precision Biosciences, Inc.
Priority date: 2015-10-05
Filing date: 2021-06-29
Publication date: 2022-12-30

Claims

Cellule T humaine génétiquement modifiée comprenant dans son génome un gène de région constante de récepteur alpha des cellules T (TCR) humain modifié, dans laquelle ledit gène de région constante de TCR alpha humain modifié comprend de 5' à 3' :
(a) une région 5' dudit gène de région constante de TCR alpha humain ;

(b) un polynucléotide exogène codant pour un récepteur antigénique chimérique (CAR) ; et

(c) une région 3' dudit gène de région constante de TCR alpha humain ;
dans laquelle ledit polynucléotide exogène est inséré dans ledit gène de région constante de TCR alpha entre les positions 13 et 14 de SEQ ID NO : 3,

dans laquelle ledit CAR comprend un domaine extracellulaire de liaison au ligand, un domaine transmembranaire, un domaine intracellulaire de co-stimulation, et un domaine intracellulaire de signalisation cytoplasmique comprenant une séquence d'acides aminés présentée dans SEQ ID NO : 113,

et dans laquelle ladite cellule T humaine génétiquement modifiée n'exprime pas un TCR endogène sur la surface cellulaire.
Cellule T humaine génétiquement modifiée selon la revendication 1, dans laquelle ledit domaine transmembranaire comprend une séquence d'acides aminés présentée dans la SEQ ID NO : 117.
Cellule T humaine génétiquement modifiée selon la revendication 1 ou la revendication 2, dans laquelle ledit CAR comprend un domaine charnière comprenant une séquence d'acides aminés présentée dans SEQ ID NO : 116.
Cellule T humaine génétiquement modifiée selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle ledit domaine de co-stimulation comprend une séquence d'acides aminés présentée dans SEQ ID NO : 114.
Cellule T humaine génétiquement modifiée selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle ledit CAR comprend un peptide signal comprenant une séquence d'acides aminés présentée dans SEQ ID NO : 115.
Cellule T humaine génétiquement modifiée selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle ledit polynucléotide exogène comprend une séquence de promoteur qui entraîne l'expression dudit récepteur antigénique chimérique, de préférence dans laquelle ladite séquence de promoteur est présentée dans SEQ ID NO : 118.
Procédé de production d'une cellule T humaine génétiquement modifiée comprenant un gène de région constante de TCR alpha humain modifié et codant pour un CAR, ledit procédé comprenant :
(a) l'introduction dans une cellule T humaine d'une première séquence d'acides nucléiques codant pour une méganucléase recombinante, dans lequel ladite méganucléase recombinante a une spécificité pour une séquence de reconnaissance à l'intérieur dudit gène de région constante de TCR alpha humain, dans lequel ladite séquence de reconnaissance consiste en SEQ ID NO : 3, dans lequel ladite méganucléase recombinante comprend une première sous-unité et une seconde sous-unité, dans lequel ladite première sous-unité se lie à un premier demi-site de reconnaissance de ladite séquence de reconnaissance et comprend une première région hypervariable (HVR1) et ladite seconde sous-unité se lie à un second demi-site de reconnaissance de ladite séquence de reconnaissance et comprend une seconde région hypervariable (HVR2), et dans lequel ladite méganucléase recombinante produit un site de clivage au niveau de ladite séquence de reconnaissance ; et

(b) l'introduction dans ladite cellule T humaine d'une seconde séquence d'acides nucléiques comprenant un polynucléotide exogène codant pour un CAR ;
dans lequel ledit polynucléotide exogène est inséré dans ledit gène de région constante de TCR alpha humain au niveau dudit site de clivage,

dans lequel ledit CAR comprend un domaine extracellulaire de liaison au ligand, un domaine transmembranaire, un domaine intracellulaire de co-stimulation, et un domaine intracellulaire de signalisation cytoplasmique comprenant une séquence d'acides aminés présentée dans SEQ ID NO : 113,

et dans lequel ladite cellule T humaine génétiquement modifiée n'exprime pas un TCR endogène sur la surface cellulaire.
Procédé selon la revendication 7, dans lequel ladite seconde séquence d'acides nucléiques comprend de 5' à 3' :
(a) un bras d'homologie 5' qui est homologue à la séquence 5' amont flanquant ledit site de clivage ;

(b) ledit polynucléotide exogène codant pour ledit CAR ; et

(c) un bras d'homologie 3' qui est homologue à la séquence 3' aval flanquant ledit site de clivage ; dans lequel ledit polynucléotide exogène est inséré dans ledit gène de région constante de TCR alpha humain au niveau dudit site de clivage par recombinaison homologue.
Procédé selon la revendication 7 ou la revendication 8, dans lequel ledit domaine transmembranaire comprend une séquence d'acides aminés présentée dans la SEQ ID NO : 117.
Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, dans lequel ledit CAR comprend un domaine charnière comprenant une séquence d'acides aminés présentée dans SEQ ID NO : 116.
Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 10, dans lequel ledit CAR comprend un domaine de co-stimulation comprenant une séquence d'acides aminés présentée dans SEQ ID NO : 114.
Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 11, dans lequel ledit CAR comprend un peptide signal comprenant une séquence d'acides aminés présentée dans SEQ ID NO : 115.
Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 12, dans lequel ledit polynucléotide exogène comprend une séquence de promoteur qui entraîne l'expression dudit CAR, de préférence dans lequel ladite séquence de promoteur est présentée dans SEQ ID NO : 118.
Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 13, dans lequel ledit premier acide nucléique est un ARNm, et dans lequel ladite seconde séquence d'acides nucléiques est introduite dans ladite cellule T humaine par mise en contact de ladite cellule T humaine avec un vecteur de virus adéno-associé (AAV) recombinant comprenant ladite seconde séquence d'acides nucléiques, éventuellement dans lequel ledit vecteur AAV recombinant a un sérotype de AAV2 ou AAV6.
Composition pharmaceutique destinée à être utilisée dans un procédé d'immunothérapie pour le traitement du cancer chez un sujet en ayant besoin, ladite composition pharmaceutique comprenant ladite cellule T humaine génétiquement modifiée selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 et un vecteur pharmaceutiquement acceptable.