HK40023296B - Transmembrane ph-gradient polymersomes for the quantification of ammonia in body fluids - Google Patents

Claims (15)

1. Un polymersome comprenant (a) une membrane, qui comprend un copolymère à blocs de poly(styrène) (PS) et de poly(oxyde d'éthylène) (PEO), dans lequel le rapport de poids moléculaire PS/PEO est supérieur à 1,0 et inférieur à 4,0 ; et (b) un noyau qui renferme un acide et au moins un colorant sensible au pH.
2. Le polymersome selon la revendication 1, où (a) le copolymère à blocs est un copolymère à diblocs; et/ou (b) l'acide et au moins un colorant sensible au pH sont des molécules différentes ou la même molécule; et/ou (c) où l'acide est un acide hydroxylique, plus préférentiellement un acid citric; et/ou (d) le colorant sensible au pH est un au moins un colorant fluorescent sensible au pH ou un au moins un colorant d'absorbance sensible au pH.
3. Le polymersome selon la revendication 1 ou 2, préparé par une méthode comprenant le mélange d'un solvent organique contenant le copolymère avec une phase aqueuse contenant l'acide et au moins un colorant sensible au pH, où le solvent organique est préférentiellement immiscible dans l'eau ou partiellement miscible dans l'eau.
4. Une méthode pour préparer le polymersome défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 3, comprenant :

   (a) dissoudre le copolymère à blocs de PS ou PEO dans un solvent organique, préférentiellement un solvent immiscible dans l'eau ou partiellement miscible dans l'eau, pour former une phase organique comprenant un copolymère ;

   (b) mélanger la phase organique comprenant un copolymère avec une phase aqueuse contenant l'acide et au moine un colorant sensible au pH pour former un polymersome ; et

   (c) retirer le au moins un colorant sensible au pH et solvent organique non encapsulée.
5. La méthode selon la revendication 4, où la phase aqueuse comprend entre 0,2 et 100 mM d'acide.
6. Un polymersome préparé par la méthode définie à la revendication 4 ou 5.
7. Le polymersome selon l'une quelconque des revendication 1 à 3 ou 6, le coeur duquel comprend en outre de l'ammoniac.
8. Une composition comprenant le polymersome défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 3 ou 6 et au moins un excipient, préférentiellement où (i) le au moins un excipient comprend une agent de prséservation, un cryoprotecteur, un lyoprotecteur, un antioxydant, ou une combinaison d'au moins deux de ceux-ci ; et/ou (ii) la composition est sous une forme liquide ou solide.
9. Une bande comprenant une composition selon la revendication 8, sous une forme solide.
10. Utilisation d'un polymersome selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 et 6, ou la composition selon la revendication 8, ou une bande selon la revendication 9, pour une quantification in vitro de l'ammonia dans un échantillon liquide.
11. L'utilisation selon la revendication 10, où l'échantillon comprend un fluide biologique d'un individu ; et préférentiellement l'échantillon comprend un tampon.
12. L'utilisation selon la revendication 11, où l'individu (i) souffre d'une maladie ou d'un trouble associé à l'ammoniac ou de phénylcétonurie (ii) est soupçonné d'être atteint d'une maladie ou d'un trouble associé à l'ammoniac ou d'une phénylcétonurie, ou est susceptible de l'être ; ou iii) suit un traitement anti-hyperammonémie ou anti-phénylcétonurie.
13. Une méthode, pour déterminer in vitro la concentration d'ammoniac est un échantillon, comprenant :

    (a) mettre en contact le prolymersome défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 3 et 6, la composition selon la revendication 8, ou la bande selon la revendication 9, avec l'échantillon ;

    (b) déterminer au moins une propriété spectroscopique dépendant du pH dans l'échantillon contenant le polymersome ou la composition ou dans la bande contenant l'échantillon ; et

    (c) déterminer la concentration d'ammoniac dans l'échantillon à l'aide d'au moins une propriété spectroscopique dépendant du pH en se référant à une courbe standard.
14. La méthode selon la revendication 13, où :

    (A)

    (i) propriété spectroscopique dépendant du pH est une absorbance dépendante du pH, le colorant sensible au pH est un colorant d'absorbance dépendant du pH et la courbe standard est une courbe standard d'absorbance ; ou; ou

    (ii) la propriété spectroscopique dépendant du pH est une intensité de fluorescence dépendant du pH, le colorant sensible au pH est un colorant fluorescent sensible au pH et la courbe standard est une courbe standard de fluorescence; ou

    (iii) (b) (b) comprend en outre la détermination d'au moins une propriété spectroscopique indépendante du pH ou d'au moins une autre propriété spectroscopique dépendant du pH dans l'échantillon contenant le polymersome ou la composition ou dans la bande contenant l'échantillon pour calculer au moins un rapport de propriétés spectroscopiques, et dans lequel (c) détermine la concentration d'ammoniac dans l'échantillon contenant le polymersome ou la composition ou dans la bande contenant l'échantillon en utilisant au moins un rapport de propriétés spectroscopiques dépendant du pH en se référant à une courbe standard de rapport de propriétés spectroscopiques, de préférence dans lequel:

    • 'au moins une propriété spectroscopique dépendant du pH et l'au moins une propriété spectroscopique indépendante du pH sont produites par le même colorant sensible au pH ; et/ou

    • la propriété spectroscopique est l'absorbance, et le colorant sensible au pH est un colorant d'absorbance sensible au pH ou la propriété spectroscopique est la fluorescence, et le colorant sensible au pH est un colorant fluorescent sensible au pH,

    and/or

    (B) l'échantillon comprend un échantillon de fluide corporel d'un sujet, de préférence dans lequel le fluide corporel est un échantillon de sang ou de fraction de sang, un échantillon de salive ou un échantillon de sperme ; de préférence, le fluide corporel a été prétraité avec la phénylalanine ammoniac lyase et, avantageusement, la méthode sert à (i) diagnostiquer in vitro une maladie ou un trouble associé à l'ammoniac ou une phénylcétonurie chez le sujet, une concentration d'ammoniac dans l'échantillon supérieure à une concentration d'ammoniac de référence indiquant que le sujet est atteint d'une maladie ou d'un trouble associé à l'ammoniac ou d'une phénylcétonurie ; ou pour (ii) contrôler in vitro l'efficacité d'un traitement anti-hyperammonémie ou anti-phénylcétonurie, une concentration d'ammoniaque dans l'échantillon inférieure à une concentration d'ammoniaque de référence indiquant que le traitement anti-hyperammonémie ou anti-phénylcétonurie est efficace.
15. Un kit pour déterminer la concentration d'ammoniac dans un échantillon comprenant (a) le polymersome défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 3 et 6, la composition définie dans la revendication 9 ou la bandelette de la revendication 9, et (b) (i) une solution d'hydratation du polymersome, (ii) un tampon pour ajuster le pH de la phase externe du polymersome et/ou de l'échantillon à doser ; (ii) un tampon pour ajuster le pH de la phase externe du polymersome et/ou de l'échantillon à doser ; (iii) un diluant pour diluer l'échantillon à doser ; (iv) une courbe standard de fluorescence et/ou une courbe standard d'absorbance ; (v) une ou plusieurs solutions de concentration d'ammoniac connue ; ou (vi) une combinaison d'au moins deux des éléments (i) à (v).