HK40008947B - Acid-alpha glucosidase variants and uses thereof - Google Patents

Claims (22)

1. Ein Nukleinsäuremolekül, das ein funktionelles chimäres Säure-alpha-Glucosidase (GAA)-Protein kodiert, das einen Signalpeptidteil und einen funktionellen menschlichen GAA-Teil umfasst,

   wobei der Signalpeptidteil eine Aminosäuresequenz aufweist, die aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO:2 bis 4 ausgewählt ist,

   oder wobei der Signalpeptidteil ein funktioneller Signalpeptidteil mit einer Aminosäuresequenz ist, die 1 bis 5 Aminosäuredeletion(en), -insertion(en) oder - substitution(en) im Vergleich zu der Sequenz nach SEQ ID NO:2 bis 4 umfasst.
2. Das Nukleinsäuremolekül nach Anspruch 1, wobei der Signalpeptidteil eine Aminosäuresequenz aufweist, die aus SEQ ID NO: 2 besteht.
3. Das Nukleinsäuremolekül nach Anspruch 1 oder 2, wobei der funktionelle menschliche GAA-Teil an seinem N-terminalen Ende im Vergleich zu einem funktionellen menschlichen Ausgangs-GAA-Polypeptid um 1 bis 75 aufeinanderfolgende Aminosäuren verkürzt ist.
4. Das Nukleinsäuremolekül nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei der funktionelle menschliche GAA-Teil an seinem N-terminalen Ende im Vergleich zu einem funktionellen menschlichen Ausgangs-GAA-Polypeptid um 6, 7, 8, 9, 10, 40, 41, 42, 43, 44, 45 oder 46 aufeinanderfolgende Aminosäuren verkürzt ist.
5. Das Nukleinsäuremolekül nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei der funktionelle menschliche GAA-Teil an seinem N-terminalen Ende im Vergleich zu einem funktionellen menschlichen Ausgangs-GAA-Polypeptid um 8, 42 oder 43 aufeinanderfolgende Aminosäuren verkürzt ist.
6. Das Nukleinsäuremolekül nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei der funktionelle menschliche GAA-Teil an seinem N-terminalen Ende im Vergleich zu einem funktionellen menschlichen Ausgangs-GAA-Polypeptid um 8 aufeinanderfolgende Aminosäuren verkürzt ist.
7. Das Nukleinsäuremolekül nach einem der Ansprüche 3 bis 6, wobei das funktionelle menschliche Ausgangs-GAA das in SEQ ID NO:5 oder SEQ ID NO:36 gezeigte menschliche GAA-Polypeptid ist.
8. Das Nukleinsäuremolekül nach Anspruch 7, wobei das funktionelle menschliche Ausgangs-GAA das in SEQ ID NO:5 gezeigte menschliche GAA-Polypeptid ist.
9. Das Nukleinsäuremolekül nach einem der Ansprüche 1 bis 8, bei dem es sich um eine Nukleotidsequenz handelt, die optimiert ist um die Expression und/oder die Immuntoleranz gegenüber dem funktionellen chimären GAA-Proteins in vivo zu verbessern.
10. Das Nukleinsäuremolekül nach Anspruch 9, bei dem es sich um die in SEQ ID NO:13 oder 14 gezeigte Nukleotidsequenz handelt.
11. Das Nukleinsäuremolekül nach einem der Ansprüche 1 bis 10, umfassend eine Nukleotidsequenz, die sich aus der Kombination der folgenden Sequenzen ergibt: Kodierende Sequenz für Signalpeptidteil Kodierende Sequenz für GAA-Teil SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 31 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 13 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 14 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 32 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 33 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 34 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 35 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 44 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 45 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 46 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 47 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 48 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 49 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 50 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 51 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 52 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 53 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 54 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28
12. Ein Nukleinsäurekonstrukt, umfassend das Nukleinsäuremolekül nach einem der Ansprüche 1 bis 11, das eine Expressionskassette ist, die das Nukleinsäuremolekül umfasst, das funktionsfähig mit einem leberspezifischen Promotor verknüpft ist, der aus der Gruppe bestehend aus dem alpha-l-Antitrypsin-Promotor (hAAT), dem Transthyretin-Promotor, dem Albumin-Promotor und dem Thyroxin-bindenden Globulin (TBG)-Promotor ausgewählt ist, wobei das Nukleinsäurekonstrukt gegebenenfalls ferner ein Intron umfasst, das aus der Gruppe bestehend aus einem menschlichen Beta-Globin b2 (HBB2)-Intron, einem Faktor IX (FIX)-Intron, einem Hühner-Beta-Globin-Intron und einem SV40-Intron ausgewählt ist, wobei das Intron gegebenenfalls ein modifiziertes HBB2-Intron nach SEQ ID NO:7, ein modifiziertes FIX-Intron nach SEQ ID NO:9 oder ein modifiziertes Hühner-Beta-Globin-Intron nach SEQ ID NO:11 ist.
13. Das Nukleinsäurekonstrukt nach Anspruch 12, umfassend in dieser Reihenfolge: einen Enhancer; ein Intron; einen leberspezifischen Promotor; das Nukleinsäuremolekül, das das funktionelle chimäre GAA-Protein kodiert; und ein Polyadenylierungssignal, wobei das Konstrukt in dieser Reihenfolge umfasst: eine ApoE-Kontrollregion; ein modifiziertes HBB2-Intron; einen hAAT-Promotor; das Nukleinsäuremolekül, das für das funktionelle chimäre GAA-Protein kodiert; und ein Rinderwachstumshormon-Polyadenylierungssignal.
14. Das Nukleinsäurekonstrukt nach Anspruch 13, wobei das Nukleinsäurekonstrukt die Nukleotidsequenz nach SEQ ID NO:20, 21 oder 22 oder eine Nukleotidsequenz umfasst, die aus einer der in Anspruch 11 gezeigten Kombinationen resultiert.
15. Eine Zelle, die mit dem Nukleinsäuremolekül nach einem der Ansprüche 1 bis 11 oder dem Nukleinsäurekonstrukt nach einem der Ansprüche 12 bis 14 transformiert ist, wobei die Zelle eine Leberzelle oder eine Muskelzelle ist.
16. Ein chimäres GAA-Polypeptid, umfassend einen Signalpeptidteil und einen funktionellen menschlichen GAA-Teil, wobei der Signalpeptidteil ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO:2 bis 4.
17. Das chimäres GAA-Polypeptid nach Anspruch 16, wobei der Signalpeptidteil eine Aminosäuresequenz aufweist, die aus SEQ ID NO: 2 besteht.
18. Das chimäres GAA-Polypeptid nach Anspruch 16 oder 17, wobei der funktionelle menschliche GAA-Teil an seinem N-terminalen Ende im Vergleich zu einem funktionellen menschlichen Ausgangs-GAA-Polypeptid um 8, 29, 42 oder 43 aufeinanderfolgende Aminosäuren verkürzt ist.
19. Das chimäres GAA-Polypeptid nach einem der Ansprüche 16 bis 18, umfassend eine Aminosäuresequenz, die sich aus der Kombination der folgenden Sequenzen ergibt: Signalpeptid-Teil GAA-Teil SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 5 oder SEQ ID NO: 36 SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 29 SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 41 SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 30 SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 42 SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 43 SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 4
20. Eine pharmazeutische Zusammensetzung, die in einem pharmazeutisch akzeptablen Träger das Nukleinsäuremolekül nach einem der Ansprüche 1 bis 11, das Nukleinsäurekonstrukt nach einem der Ansprüche 12 bis 14, die Zelle nach Anspruch 15 oder das chimäre GAA-Polypeptid nach einem der Ansprüche 16 bis 19 enthält.
21. Das Nukleinsäuremolekül nach einem der Ansprüche 1 bis 11, das Nukleinsäurekonstrukt nach einem der Ansprüche 12 bis 14, die Zelle nach Anspruch 15 oder das chimäre GAA-Polypeptid nach einem der Ansprüche 16 bis 19, zur Verwendung als Medikament.
22. Das Nukleinsäuremolekül nach einem der Ansprüche 1 bis 11, das Nukleinsäurekonstrukt nach einem der Ansprüche 12 bis 14, die Zelle nach Anspruch 15 oder das chimäre GAA-Polypeptid nach einem der Ansprüche 16 bis 19, zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung einer Glykogenspeicherkrankheit, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus GSDI (von Gierke-Krankheit), GSDII (Pompe-Krankheit), GSDIII (Cori-Krankheit), GSDIV, GSDV, GSDVI, GSDVII, GSDVIII und tödlicher angeborener Glykogenspeicherkrankheit des Herzens.