HK1225071B - Methods, kits, and systems for multiplexed detection of target molecules and uses - Google Patents
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Claims (12)
- Procédé de détection d'une pluralité de molécules de protéines cibles dans un échantillon comprenant:a. la mise en contact d'un échantillon avec une composition comprenant une pluralité de sondes cibles, chaque sonde cible dans la pluralité comprenant :i. une molécule de liaison à une cible qui se lie spécifiquement à une molécule cible distincte dans l'échantillon ;ii. une séquence nucléotidique d'identification qui identifie la molécule de liaison à la cible ; etiii. un lieur clivable entre la molécule de liaison à une cible et la séquence nucléotidique d'identification ;b. la séparation des sondes cibles non liées provenant d'une pluralité de complexes dans l'échantillon, chaque complexe ayant une molécule de protéine cible et une seule sonde cible liée à celle-ci, le complexe n'ayant pas de seconde sonde cible se liant à une région différente de la molécule de protéine cible ;c. la libération des séquences nucléotidiques d'identification provenant de la pluralité de complexes ; etd. la détection de signaux à partir des séquences nucléotidiques d'identification libérées en fonction d'un procédé d'électrophorèse non gélifiée sans aucune étape d'amplification, les signaux pouvant être distingués pour les séquences nucléotidiques d'identification, permettant ainsi d'identifier les molécules cibles correspondantes et de détecter une pluralité de molécules cibles différentes dans l'échantillon, etle procédé comprenant en outre, avant l'étape de détection (d), le couplage des séquences nucléotidiques d'identification libérées de l'étape de libération (c) à une composition de détection comprenant une pluralité de sondes rapporteurs, chaque sonde rapporteur située dans la pluralité comprenant : une première région spécifique de la sonde cible qui est capable de lier une première partie de la séquence nucléotidique d'identification ; et une étiquette détectable qui identifie la sonde rapporteur, l'étiquette créant un signal distinct unique pour chaque sonde rapporteur.
- Procédé selon la revendication 1, dans lequel la molécule de liaison à une cible est un anticorps.
- Procédé selon la revendication 1 ou la revendication 2, dans lequel le lieur clivable est un lieur clivable, ne pouvant pas être hybridé.
- Procédé selon la revendication 3, dans lequel le lieur clivable et ne pouvant pas être hybridé est sensible à une enzyme, au pH, à la température, à la lumière, au stress de cisaillement, à la sonication, à un agent chimique (p. ex. au dithiothréitol) ou à toute combinaison de ceux-ci.
- Procédé selon la revendication 3 ou la revendication 4, dans lequel le lieur clivable, ne pouvant pas être hybridé, comprend un lieur photoclivable choisi dans le groupe constitué des molécules (i)-(xix) et de toute combinaison de celles-ci, les structures chimiques des molécules (i)-(xix) étant représentées comme suit : chacun des points noirs dans chaque molécule représentant un point de connexion ou de couplage qui se connecte, directement ou indirectement, à la molécule de liaison à une cible ou à la séquence nucléotidique d'identification.
- Procédé selon la revendication 5, dans lequel la libération des séquences nucléotidiques d'identification à partir des sondes cibles liées comprend l'exposition des sondes cibles liées à la lumière ultraviolette.
- Procédé selon la revendication 1, dans lequel la détection comprend la détection de signaux provenant des étiquettes détectables respectives des sondes rapporteurs qui sont couplées aux séquences nucléotidiques d'identification libérées, les signaux pouvant être distingués pour les sondes rapporteurs respectives et délimitant les séquences nucléotidiques d'identification, permettant ainsi d'identifier les molécules de liaison à une cible correspondantes et de détecter une pluralité de molécules cibles dans l'échantillon.
- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans lequel les séquences nucléotidiques d'identification sont choisies de telle sorte qu'elles ne réagissent pas de manière croisée avec un génome humain et les séquences nucléotidiques d'identification étant dérivées d'un génome de pomme de terre.
- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans lequel les séquences nucléotidiques d'identification ;i) ont une longueur d'environ 30 à 100 nucléotides ;ii) ont une longueur d'environ 70 nucléotides ; ouiii) ont une longueur d'environ 70 nucléotides et ont une séquence choisie dans le tableau 2 (SEQ ID n° 1 à SEQ ID n° 110).
- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans lequel :i) l'échantillon comprend moins de 500 cellules ; ouii) comprenant en outre, avant la mise en contact, la séparation des cellules cibles des cellules interférentes dans l'échantillon et les cellules cibles comprenant des cellules rares choisies dans le groupe constitué des cellules tumorales en circulation, des cellules foetales, des cellules souches, des cellules immunitaires, des cellules clonales et de toute combinaison de celles-ci.
- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, dans lequel la composition comprend en outre une pluralité de sondes de commande, chaque sonde de commande dans la pluralité comprenant :i. une molécule de liaison à un contrôle qui se lie spécifiquement à une molécule de protéine de contrôle dans l'échantillon ;ii. une séquence de contrôle d'identification qui identifie la molécule de liaison à un contrôle ; etiii. un lieur clivable entre la molécule de liaison à un contrôle et la séquence de contrôle d'identification,et le procédé comprenant en outre la quantification des signaux en normalisant les signaux associés aux sondes cibles par les signaux associés aux sondes de contrôle.
- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, comprenant en outre l'extraction d'une molécule d'acide nucléique à partir du même échantillon et la soumission de la molécule d'acide nucléique à une analyse d'acide nucléique, permettant ainsi de détecter des molécules d'acide nucléique provenant du même échantillon.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US61/834,111 | 2013-06-12 | ||
| US61/912,054 | 2013-12-05 | ||
| US61/972,940 | 2014-03-31 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HK1225071A1 HK1225071A1 (en) | 2017-09-01 |
| HK1225071B true HK1225071B (en) | 2020-09-04 |
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