HK1119243B - Improved monocyte activation test better able to detect non-endotoxin pyrogenic contaminants in medical products - Google Patents

Claims (19)

1. Verfahren zum Nachweisen von nicht-Endotoxin-Pyrogenen in einer Probe, umfassend die Schritte:

   Vereinigen eines Monocyten-enthaltenden Reagenzes und der zu testenden Probe in einem Testsystem, das eine Mikrotiterplatte umfasst, die eine Mehrzahl von Mikrotitervertiefungen umfasst, die derart geformt sind, dass das Monocyten-enthaltende Reagenz konzentriert wirt, so dass ein größere Zelle-zu-Zelle-Kontakt verglichen mit einer Mikrotitervertiefung mit flachem Boden bereitgestellt wird, wobei jede Mikrotitervertiefung eine Bodenwand umfasst, die nicht-planar ist, gekrümmt ist, parabolisch ist oder sich abwärts erstreckt, und wobei die Oberfläche der Mikrotitervertiefung eine Polypropylenbeschichtung umfasst oder die gesamte Mikrotitervertiefung aus Polypropylen zusammengesetzt ist,

   Inkubieren des Monocyten-enthaltenden Reagenzes und der Probe, wobei, wenn die Probe ein Pyrogen umfasst, das Monocyten-enthaftende Reagenz ein Cytokin oder einen endogenen Mediator einer Entzündungsreaktion erzeugt, und wobei entweder das Testsystem ferner mindestens eine Oberfläche umfasst, die mit einem Antikörper gegen ein Cytokin oder einen endogenen Mediator einer Entzündungsreaktion behandelt ist, oder das Verfahren den weiteren Schritt des Überführens des Inhalts des Testsystems zu einem zweiten Testsystem umfasst, das mindestens eine Oberfläche umfasst, die mit einem Antikörper gegen ein Cytokin oder einen endogenen Mediator einer Entzündungsreaktion behandelt ist, und

   Testen des Testsystems oder des zweiten Testsystems bezüglich der Gegenwart des Cytokins oder des endogenen Mediators, das oder der an den Antikörper an der Oberfläche gebunden ist, wobei eine erhöhte Konzentration des Cytokins oder des endogenen Mediators, das oder der an die Oberfläche gebunden ist, die Gegenwart von Pyrogenen In der getesteten Probe anzeigt.
2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Seiten der Mikrotitervertiefung einwärts geneigt sind.
3. Verfahren nach Anspruch 1, wobei der Antikörper auf mindestens einem Teil des Inneren der Mikrotitervertiefung aufgebracht ist.
4. Verfahren nach Anspruch 3, wobei der Antikörper ein Antikörper gegen einen endogenen Mediator einer Entzündungsreaktion ist.
5. Verfahren nach Anspruch 4, wobei der endogene Mediator Endothelin ist.
6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei das Cytokin aus der Gruppe, bestehend aus Interleukin-1 (IL-1), Interleukin-1 ra (IL-1 ra), Interleukin-6 (IL-6), Interleukin-8 (IL-8) und Tumomekrosefaktor-α (TNF-α), ausgewählt ist.
7. Verfahren nach Anspruch 6, wobei das Cytokin IL-6 ist.
8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei das Testsystem oder die Testsysteme ein kolorimetrischer enzymgekoppelter Immunabsorptionstest (ELISA), ein Radioimmuntest oder ein Fluoreszenzimmuntest ist oder sind.
9. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Monocyten-enthaltende Reagenz einkernige Zellen von peripherem Blut (PBMCs) oder Zellen einer monocytischen Zelllinie umfasst.
10. Verfahren nach Anspruch 9, wobei die monocytische Zelllinie eine menschliche monocytische Zelllinie umfasst.
11. Verfahren nach Anspruch 10, wobei die monocytische Zelllinie eine menschliche monocytische Zelllinie umfasst, die aus der Gruppe, bestehend aus MONOMAC-6, THP-1 und 28SC, ausgewählt ist.
12. Verfahren nach Anspruch 9, wobei die monocytische Zeillinie eine Zelllinie umfasst, die endogene CD 14- und Toll-artige Rezeptoren umfasst, oder die mit CD14- und/oder Toll-artigen Rezeptoren und/oder Reportergenen für Entzündungsmediatoren oder pyrogene Mediatoren transfiziert worden ist.
13. Verfahren nach Anspruch 9, wobei die PBMCs menschliche PBMCs sind.
14. Verfahren nach Anspruch 9, wobei das Monocyten-enthaltende Reagenz in dem Testsystem bei einer Zelldichte von mindestens etwa 250000, 500000, 600000, 700000, 800000, 900000, 1000000, 1100000, 1200000, 1300000, 1400000, 1500000, 1600000, 1700000, 1800000, 1900000 oder 2000000 Zellen pro Vertiefung vorliegt.
15. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Monocyten-enthaltende Reagenz Vollblut umfasst.
16. Verfahren nach Anspruch 15, wobei das Vollblut menschliches Vollblut ist.
17. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei das Monocyten-enthaltende Reagenz ferner ein Verdünnungsmittel, ein gerinnungshemmendes Mittel oder sowohl ein Verdünnungsmittel als auch ein gerinnungshemmendes Mittel umfasst.
18. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Probe ein parenteral verabreichtes medizinisches Produkt ist, das optional aus der Gruppe, bestehend aus einem Blutprodukt, einer Dialyselösung, einem Impfstoff und einem Plasmaexpander, ausgewählt ist.
19. Diagnostisches Kit, umfassend:

    ein kryokonserviertes Monocyten-enthaftendes Reagenz,

    eine Mikrotiterplatte, die eine Mehrzahl von Mikrotitervertiefungen umfasst, die derart geformt sind, dass das Monocyten-enthaltende Reagenz konzentriert wird, so dass ein größere Zelle-zu-Zelle-Kontakt verglichen mit einer Mikrotitervertiefung mit flachem Boden bereitgestellt wird, wobei jede Mikrotitervertiefung eine Bodenwand umfasst, die nicht-planar ist, gekrümmt ist, parabolisch ist oder sich abwärts erstreckt, wobei die Oberfläche der Mikrotitervertiefung eine Polypropylenbeschichtung umfasst oder die gesamte Mikrotitervertiefung aus Polypropylen zusammengesetzt ist, und entweder das Testsystem ferner mindestens eine Oberfläche umfasst, die mit einem Antikörper gegen ein Cytokin oder einen endogenen Mediator einer Entzündungsreaktion behandelt ist, oder das Kit ein zweites Testsystem umfasst, das mindestens eine Oberfläche umfasst, die mit einem Antikörper gegen ein Cytokin oder einen endogenen Mediator einer Entzündungsreaktion behandelt ist, wobei das Cytokin oder der endogene Mediator einer Entzündungsreaktion ein Cytokin oder ein endogener Mediator einer Entzündungsreaktion ist, das oder der durch das Monocyten-enthaltende Reagenz erzeugt wird, wenn es einer Probe ausgesetzt wird, die ein Pyrogen umfasst.