HK1183325B - Self-deleting plasmid - Google Patents
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- plasmid
- cell environment
- site specific
- selectable marker
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Claims (11)
- Verfahren zur Herstellung eines selektionierbares-Markergen-freien Plasmids, wobei man in den Verfahrensschritten:a) ein ein selektionierbares Markergen, das von aus Ecdif, cer, psi, pif und mwr ausgewählten Zielstellen einer stellenspezifischen Rekombinase flankiert ist, enthaltendes Plasmid in einer ersten Wirtszellenumgebung, in der eine Rekombination zwischen den Zielstellen der stellenspezifischen Rekombinase nicht bewirkt werden kann, kultiviert, wobei die erste Wirtszellenumgebung eine inaktivierende Mutation in einem oder mehreren der für PepA, ArgR und ArcA codierenden Gene umfasst; undb) anschließend das Plasmid in einer zweiten Wirtszellenumgebung kultiviert, in der eine Rekombination zwischen den Zielstellen der stellenspezifischen Rekombinase bewirkt werden kann, so dass das selektionierbare Markergen ausgeschnitten wird, wobei die zweite Wirtszellenumgebung aktive Versionen von PepA und ArgR oder ArcA enthält und eine aus XerC und XerD ausgewählte stellenspezifsche Rekombinase umfasst.
- Verfahren nach Anspruch 1, wobei man in dem weiteren Verfahrensschritt:c) das selektionierbares-Markergen-freie Plasmid in Zellkultur hält.
- Verfahren nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, wobei man in dem weiteren Verfahrensschritt:d) das selektionierbares-Markergen-freie Plasmid aus der zweiten Wirtszellenumgebung isoliert.
- Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die erste Wirtszellenumgebung und die zweite Wirtszellenumgebung in unterschiedlichen Zellen vorliegen.
- Verfahren nach einem der Ansprüche 1-3, wobei die erste Wirtszellenumgebung und die zweite Wirtszellenumgebung innerhalb der gleichen Wirtszelle ausgebildet sind.
- Verfahren nach Anspruch 5, wobei die erste Wirtszellenumgebung und die zweite Wirtszellenumgebung zeitlich getrennt sind.
- Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei es sich bei dem selektionierbaren Markergen um ein Antibiotikaresistenz-Gen handelt.
- Verfahren nach einem der Ansprüche 1-6, wobei das selektionierbare Markergen die Produktion eines für die erste und/oder die zweite Wirtszellenumgebung essentiellen, jedoch darin fehlenden Stoffwechselprodukts ermöglicht.
- Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei es sich bei der ersten Wirtszellenumgebung und/oder der zweiten Wirtszellenumgebung um eine gramnegative Bakterienzelle handelt.
- Verfahren nach Anspruch 9, wobei die erste Wirtszellenumgebung und die zweite Wirtszellenumgebung unabhängig aus den Gattungen Escherichia, Salmonella, Shigella, Agrobacterium, Pseudomonas und Vibrio ausgewählt sind.
- Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Plasmid ein oder mehrere interessierende Gene codiert.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB1011046.8A GB201011046D0 (en) | 2010-06-30 | 2010-06-30 | Plasmid maintenance |
| GB1011046.8 | 2010-06-30 | ||
| PCT/GB2011/000975 WO2012001352A1 (en) | 2010-06-30 | 2011-06-28 | Self-deleting plasmid |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HK1183325A1 HK1183325A1 (en) | 2013-12-20 |
| HK1183325B true HK1183325B (en) | 2015-07-10 |
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