HK1171667B - Glycopolysialylation of proteins other than blood coagulation proteins - Google Patents

Claims (14)

1. Verfahren zum Konjugieren einer Polysialinsäure (PSA) oder einer modifizierten PSA (mPSA) an eine oxidierte Kohlenhydratgruppierung eines Glykoproteins, das kein Blutkoagulationsprotein ist, das eine Kohlenhydratgruppe umfasst, umfassend das Kontaktieren der oxidierten Kohlenhydratgruppierung mit der PSA oder mPSA unter Bedingungen, die eine Konjugation ermöglichen, wobei die PSA oder mPSA eine Aminooxygruppe enthält und eine Oxim-Verknüpfung zwischen der oxidierten Kohlenhydratgruppierung und der Aminooxygruppe an der PSA oder mPSA gebildet wird, wobei die modifizierte PSA eine PSA ist, umfassend eine Gruppierung, die von einer terminalen N-Acetylneuraminsäure-Gruppierung durch Oxidation oder Reduktion abgeleitet wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die PSA oder mPSA Colominsäure oder modifizierte Colominsäure ist.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, wobei die PSA oder mPSA 2 - 500 Sialinsäureeinheiten umfasst.
4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Glykoprotein ausgewählt wird aus Cytokinen, wie etwa Interleukinen, alpha-, beta-, und gamma-Interferonen, Koloniestimulierenden Faktoren, einschließend Granulozyten-koloniestimulierende Faktoren, Fibroblasten-Wachstumsfaktoren, plättchenabgeleitete Wachstumsfaktoren, Phospholipase-aktivierendes Protein (PUP), Insulin, Pflanzenproteinen, wie etwa Lektine und Rizine, Tumornekrosefaktoren und verwandten Allelen, löslichen Formen von Tumornekrosefaktorrezeptoren, Interleukinrezeptoren und löslichen Formen von Interleukinrezeptoren, Wachstumsfaktoren, Gewebewachstumsfaktoren, transformierenden Wachstumsfaktoren, wie etwa TGFαs oder TGFβs und epidermalen Wachstumsfaktoren, Hormonen, Somatomedinen, Pigmenthormonen, Hypothalamus-Freisetzungsfaktoren, antidiuretischen Hormone, Prolaktin, Choriongonadotropin, follikelstimulierendes Hormon, thyroidstimulierendes Hormon, Gewebeplasminogenaktivator, Immunglobulinen, wie etwa IgG, IgE, IgM, IgA und IgD, monoklonalen Antikörpern, Erythropoietin (EPO), Blutfaktoren, die keine Blutkoagulationsproteine sind, Galactosidasen, α-Galactosidasen, β-Galactosidasen, DNAsen, Fetuin, Fragmenten davon und Fusionsproteinen, umfassend beliebige der oben genannten Proteine oder Fragmente davon.
5. Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 3, wobei das Glykoprotein ausgewählt wird aus Tumornekrosefaktoren und verwandten Allelen, löslichen Formen von Tumornekrosefaktorrezeptoren, Immunglobulinen, wie etwa IgG, IgE, IgM, IgA und IgD, monoklonalen Antikörpern, Erythropoietin (EPO), DNAsen, Fetuin, Fragmenten davon und Fusionsproteinen, umfassend beliebige der oben genannten Proteine oder Fragmente davon.
6. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, umfassend das Oxidieren der Kohlenhydratgruppierung durch das Inkubieren des Glykoproteins mit Natriumperiodat (NaIO₄).
7. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, umfassend das Oxidieren der PSA oder mPSA, um eine Aldehydgruppe an einer terminalen Einheit der PSA oder mPSA zu bilden und das Umsetzen der oxidierten PSA oder mPSA mit einem Aminooxy-Linker.
8. Verfahren nach Anspruch 7, umfassend das Oxidieren der PSA oder mPSA unter Verwendung von NaIO₄.
9. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, umfassend das Kontaktieren der oxidierten Kohlenhydratgruppierung mit PSA oder mPSA in einem Puffer, umfassend einen nukleophilen Katalysator, ausgewählt aus Anilin und Anilinderivaten.
10. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Aminooxygruppe durch die Umsetzung oxidierter PSA oder mPSA mit einem Aminooxy-Linker gebildet wird und der Aminooxy-Linker 3-Oxapentan-1,5-dioxyamin oder 3,6,9-Trioxaundekan-1,11-dioxyamin ist.
11. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, ferner umfassend das Reduzieren einer Oxim-Verknüpfung in dem konjugierten Glykoprotein durch eine Inkubation in Gegenwart einer reduzierenden Verbindung.
12. Verfahren nach Anspruch 11, wobei die reduzierende Verbindung Natriumcyanoborhydrid (NaCNBH₃) oder Ascorbinsäure (Vitamin C) ist.
13. Konjugiertes Glykoprotein, das durch das Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche gewonnen werden kann.
14. Konjugiertes Glykoprotein, das kein Blutkoagulationsprotein ist, umfassend:

    (a) das Glykoprotein; und

    (b) mindestens eine Aminooxy-PSA oder Aminooxy-mPSA, die an das Glykoprotein von (a) gebunden ist, wobei die Aminooxy-PSA oder Aminooxy-mPSA mit dem Glykoprotein über eine oder mehrere Kohlenhydratgruppierungen verbunden ist, wobei mPSA PSA ist, umfassend eine Gruppierung, die von einer terminalen N-Acetylneuraminsäure-Gruppierung durch Oxidation oder Reduktion abgeleitet wird.