HK1170763B

HK1170763B - Common light chain mouse

Info

Publication number: HK1170763B
Application number: HK12110290.2A
Authority: HK
Inventors: John Mcwhirter; Lynn Macdonald; Sean Stevens; Samuel Davis; Andrew J. Murphy; David R. Buckler
Original assignee: Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
Priority date: 2010-02-08
Filing date: 2012-10-17
Publication date: 2017-10-06

Claims

Genetisch veränderte Maus, welche humane Immunglobulin-schwere-Kette und -leichte-Kette-variable-Domänen exprimiert, wobei die humanen Leichte-Kette-variable-Domänen von einer einzelnen umgestellten (V_L/J_L)-humanen Immunglobulin-leichte-Kette-variable-Region-Gensequenz, die in der Maus-Keimbahn vorhanden ist, exprimiert wird, wobei diese eine Keimbahnsequenz eines V_L-Gensegments und eine Keimbahnsequenz eines J_L-Gensegments umfasst und wobei genannte humane Immunglobulin-leichte-Kette-variable-Region eine umgestellte Vκ1-39/Jκ ist, wobei:
(a) der Maus ein endogener Maus-κ-Immunglobulin-leichte-Kette-variable-Region-Locus fehlt, welcher in der Lage ist, sich umzustellen und ein Gen zu bilden, welches eine Maus-κ-variable-Region codiert;

(b) die Maus eine humane gemeinsame Immunglobulin-leichte-Kette für eine Vielzahl von humanen schweren Ketten exprimiert, die gemeinsame leichte Kette abgeleitet von genannter humaner Immunglobulin-leichte-Kette-variable-Region-Gensequenz;

(c) die Maus eine B-Zelle umfasst, welche einen Antikörper exprimiert, der spezifisch an ein Antigen von Interesse bindet, wobei der Antikörper genannte gemeinsame leichte Kette umfasst und eine Immunglobulin-schwere-Kette abgeleitet aus einer Umstellung von humanen Immunglobulin-schwere-Kette-variablen-(V_H)-Gensegmenten, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem V_H2-5, V_H3-23, V_H3-30, V_H4-59 und V_H5-51 Gensegment; und

(d) 90-100% der endogenen nicht-umgestellten Maus-V_H-Gensegmente der Maus durch eine Vielzahl von nichtumgestellten humanen V_H-Gensegmenten ersetzt sind.
Genetisch veränderte Maus gemäß Anspruch 1, wobei die Maus eine Ersetzung von 90 bis 100% der endogenen nicht-umgestellten Maus-V_H-Gensegmente durch:
(i) mindestens 12 funktionelle nicht-umgestellten humane V_H-Gensegmente;

(ii) mindestens 18 nicht-umgestellte humane V_H-Gensegmente;

(iii) mindestens 39 nicht-umgestellte humane V_H-Gensegmente;

(iv) mindestens 80 nicht-umgestellte humane V_H-Segmente; oder

(v) mindestens 81 nicht-umgestellte humane V_H-Segmente
umfasst.
Genetisch veränderte Maus gemäß einem der vorangegangen Ansprüche, wobei die Maus exprimiert:
(a) eine schwere Kette, welche eine humane Immunglobulin-variable-Domäne und eine Maus-Immunglobulin-konstante-Region umfasst; und/oder

(b) einen Antikörper, welcher eine leichte Kette umfasst, welche eine humane Immunglobulin-leichte-Kette-variable-Domäne und eine Maus-Immunglobulin-leichte-Kette-konstante-Domäne und eine schwere Kette umfasst, welche eine humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Domäne und eine Maus-Immunglobulin-schwere-Kette-konstante-Domäne umfasst.
Genetisch veränderte Maus gemäß einem der vorangegangenen Ansprüche, wobei das humane V_L-Gensegment mit einer Immunglobulin-Promotor-Sequenz operativ verknüpft ist.
Genetisch veränderte Maus gemäß Anspruch 4, wobei die Immunglobulin-Promotor-Sequenz eine humane Immunglobulin-Promotor-Sequenz ist.
Verfahren zur Herstellung eines Antikörpers, welcher ein Antigen von Interesse bindet, umfassend das Immunisieren einer Maus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 mit dem Antigen von Interesse und das Verwenden einer humanen Immunglobulin-variable-Region-Gensequenz der Maus, um den Antikörper herzustellen.
Verfahren gemäß Anspruch 6, umfassend:
Exprimieren in einer einzelnen Zelle: (a) eine erste humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Region-Gensequenz einer Maus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, welche immunisiert worden ist, wobei die humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Region-Gensequenz mit einer humanen schwere-Kette-Immunglobulin-konstante-Region-Gensequenz fusioniert ist; und (b) eine humane Immunglobulin-leichte-Kette-variable-Region-Gensequenz einer Maus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, welche immunisiert worden ist, wobei die humane Immunglobulin-leichte-Kette-variable-Region-Gensequenz mit einer humanen Immunglobulin-leichte-Kette-konstante-Region-Gensequenz fusioniert ist;

Halten der Zelle unter Bedingungen, die ausreichend sind, um einen vollständig humanen Antikörper zu exprimieren; und

Isolieren des Antikörpers.
Verfahren gemäß Anspruch 7, wobei die Zelle eine zweite humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Region-Gensequenz einer Maus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 umfasst, welche immunisiert worden ist, wobei die zweite humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Region-Gensequenz mit einer humanen Immunglobulin-schwere-Kette-konstante-Region-Gensequenz fusioniert ist, wobei die erste schwere-Kette-variable-Region-Gensequenz eine humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Domäne codiert, welche ein erstes Epitop erkennt, und die zweite humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Region-Gensequenz eine humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Domäne codiert, welche ein zweites Epitop erkennt, und wobei das erste Epitop und das zweite Epitop nicht identisch sind.
Verwendung einer Maus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 zur Herstellung eines Antikörpers.
Verwendung gemäß Anspruch 9, wobei der Antikörper ein humaner bispezifischer Antikörper ist.
Verfahren zur Herstellung eines humanen bispezifischen Antikörpers, wobei das Verfahren das Erhalten humaner Immunglobulin-variable-Region-Gensequenzen von B-Zellen einer Maus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 und Herstellen des Antikörpers mit genannten Sequenzen umfasst.
Verwendung einer Maus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, um eine Zelle zu erzeugen, welche einen humanen bispezifischen Antikörper exprimiert, wobei die humanen bispezifischen Antikörper-schwere-Kette-variable-Region-Sequenzen von humanen Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Region-Gensequenzen exprimiert werden, die aus den B-Zellen der Maus erhalten werden.
Verwendung gemäß Anspruch 12, wobei die Zelle umfasst:
(a) eine humane leichte-Kette-variable-Immunglobulin-Region-Gensequenz, welche eine humane Immunglobulin-leichte-Kette-variable-Domäne codiert, abgeleitet von einem humanen Vκ1-39Jκ-Gensegment, wobei die humane Immunglobulin-leichte-Kette-variable-Region-Gensequenz mit einer humanen Immunglobulin-leichte-Kette-konstante-Region-Gensequenz direkt oder durch einen Linker fusioniert ist, resultierend in einem Gen, welches eine humane Immunglobulin-leichte-Kette codiert;

(b) eine erste humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Region-Gensequenz, welche eine erste humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Domäne codiert, wobei die erste humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Region-Gensequenz mit einer humanen Immunglobulin-schwere-Kette-konstante-Region-Gensequenz direkt oder durch einen Linker fusioniert ist, resultierend in einem Gen, welches eine erste humane Immunglobulin-schwere-Kette codiert; wobei die erste humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Domäne ein erstes Epitop erkennt; und

(c) eine zweite humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Region-Gensequenz, welche eine zweite humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Domäne codiert, wobei die zweite humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Region-Gensequenz mit einer humanen Immunglobulin-schwere-Kette-konstante-Region-Gensequenz direkt oder durch einen Linker fusioniert ist, resultierend in einem Gen, welches eine zweite humane Immunglobulin-schwere-Kette codiert; wobei die zweite humane Immunglobulin-schwere-Kette-variable-Domäne ein zweites Epitop erkennt und das erste Epitop nicht spezifisch erkennt, wobei die ersten und die zweiten Immunglobulin-schweren-Ketten jeweils mit den humanen Immunglobulin-leichten-Ketten gemäß (a) verbunden sind.
Verwendung einer Maus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 zur Identifizierung einer humanen Immunglobulin-schwere-Kette-variablen-Domäne, anwesend in einer Immunglobulin-schweren Kette, welche mit der einzelnen leichten Kette verbunden ist.