HK1169125B - Methods of production of glycoproteins in mammalian cell cultures using glucocorticoids - Google Patents

Claims (19)

1. Procédé de culture de cellules pour la production d'une molécule de CTLA4 soluble, comprenant: a) la culture de cellules CHO qui produisent une molécule de CTLA4 soluble dans une culture de cellules dans des conditions qui permettent la production de protéines; et b) l'ajout de niveaux non toxiques de glucocorticoïde.
2. Procédé de culture de cellules selon la revendication 1, dans lequel la sialylation de la molécule de CTLA4 soluble est augmentée comparée à une sialylation dans une culture sans ajout de glucocorticoïde.
3. Procédé de culture de cellules selon la revendication 1, dans lequel la mort cellulaire est supprimée comparée à une apoptose cellulaire dans une culture sans ajout de glucocorticoïde.
4. Procédé de culture de cellules selon la revendication 1, dans lequel la viabilité cellulaire est augmentée comparée à une viabilité cellulaire dans une culture sans ajout de glucocorticoïde.
5. Procédé de culture de cellules selon la revendication 1, dans lequel le titre de CTLA4 est augmenté comparé au titre de CTLA4 dans une culture sans ajout de glucocorticoïde.
6. Procédé de culture de cellules selon la revendication 1, dans lequel l'agrégation de la molécule de CTLA4 est diminuée comparée à l'agrégation de la molécule de CTLA4 dans une culture sans ajout de glucocorticoïde.
7. Procédé de culture de cellules selon les revendications 1-6, dans lequel le glucocorticoïde est choisi parmi la dexaméthasone, la bétaméthasone, le fludrocortisone acétate, l'hydrocortisone, la méthylprednisolone, la prednisolone, la prednisone et la triamcinolone.
8. Procédé de culture de cellules selon les revendications 1-6, dans lequel le niveau de glucocorticoïde est maintenu dans la culture de cellules à une concentration de 1 nM à 1mM.
9. Procédé de culture de cellules selon les revendications 1-6, dans lequel le glucocorticoïde est ajouté au milieu basal, au milieu d'alimentation ou comme un bolus à tout moment durant le procédé de culture.
10. Procédé selon les revendications 1-6, dans lequel le glucocorticoïde est ajouté à un moment après une inoculation qui est avant le commencement de la phase de mort initiale.
11. Procédé selon la revendication 10, dans lequel le glucocorticoïde est ajouté à un moment après une inoculation qui est pendant la phase de croissance initiale.
12. Procédé selon la revendication 11, dans lequel le glucocorticoïde est ajouté à, ou environ de, la fin de la phase de croissance initiale.
13. Procédé de culture de cellules selon l'une quelconque des revendications 1-12, dans lequel la molécule de CTLA4 soluble est une molécule mutante de CTLA4 soluble qui comprend la séquence d'acides aminés commençant avec une méthionine à la position +1 ou une analine à la position -1 et finissant avec un acide aspartique à la position 124 comme il est montré dans la SEQ ID NO: 3 jointe à une fraction d'immunoglobuline comprenant une charnière, des domaines CH2 et CH3, dans lequel le glucocorticoïde est la dexaméthasone et la dexaméthasone est soutenue ou maintenue dans la culture de cellules à une concentration de 0,1 µM à 10 µM et dans lequel le volume de la culture de cellules est d'au moins 500 litres.
14. Procédé de culture de cellules selon la revendication 13, dans lequel la molécule de CTLA4 soluble est une molécule mutante de CTLA4 soluble qui comprend la séquence d'acides aminés commençant avec une méthionine à la position +1 ou une analine à la position -1 et finissant avec un acide aspartique à la position 124 comme il est montré dans la SEQ ID NO: 3 jointe à une fraction d'immunoglobuline comprenant une charnière, des domaines CH2 et CH3, dans lequel les cellules sont alimentées avec un milieu d'alimentation comprenant le glucocorticoïde dexaméthasone et dans lequel le volume de la culture de cellules est d'au moins 500 litres.
15. Procédé de culture de cellules selon l'une quelconque des revendications 1-12, dans lequel la molécule de CTLA4 soluble comprend la séquence d'acides aminés commençant avec une méthionine à la position +1 ou une analine à la position -1 et finissant avec un acide aspartique à la position 124 comme il est montré dans la SEQ ID NO: 1 jointe à une fraction d'immunoglobuline comprenant une charnière, des domaines CH2 et CH3, dans lequel le glucocorticoïde est la dexaméthasone et la dexaméthasone est soutenue ou maintenue dans la culture de cellules à une concentration de 1 nM à 0,1 µM et dans lequel le volume de la culture de cellules est d'au moins 500 litres.
16. Procédé de culture de cellules selon l'une quelconque des revendications 1-12, dans lequel la molécule de CTLA4 soluble comprend la séquence d'acides aminés commençant avec une méthionine à la position +1 ou une analine à la position -1 et finissant avec un acide aspartique à la position 124 comme il est montré dans la SEQ ID NO: 1 jointe à une fraction d'immunoglobuline comprenant une charnière, des domaines CH2 et CH3, dans lequel les cellules sont alimentées avec un milieu d'alimentation comprenant le glucocorticoïde dexaméthasone, dans lequel le volume de la culture de cellules est d'au moins 500 litres.
17. Procédé de culture de cellules selon l'une quelconque des revendications 1-12, 15 et 16, dans lequel la molécule de CTLA4 soluble comprend une séquence d'acides aminés commençant avec une méthionine à la position +1 ou une analine à la position -1 et finissant avec une lysine à la position +357 comme il est montré dans la SEQ ID NO: 1.
18. Procédé de culture de cellules selon l'une quelconque des revendications 1-12, 13 et 14, dans lequel la molécule mutante de CTLA4 soluble comprend une séquence d'acides aminés commençant avec une méthionine à la position +1 ou une analine à la position -1 et finissant avec une lysine à la position +357 comme il est montré dans la SEQ ID NO: 3.
19. Procédé de culture de cellules selon la revendication 9, dans lequel le glucocorticoïde est la dexaméthasone et la dexaméthasone est ajoutée au milieu d'alimentation.