HK1168279B - Variants of c-type natriuretic peptide - Google Patents

Claims (12)

1. Variante des natriuretischen Peptids vom C-Typ (C-Type Natriuretic Peptide, CNP), ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus:

   PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-Gly-CNP37) (SEQ ID Nr: 145),

   PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-CNP37) (SEQ ID Nr: 186),

   MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-CNP37) (SEQ ID Nr: 192),

   MGQEIIPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-Gly-CNP37) (SEQ ID Nr: 191).
2. Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine CNP-Variante nach Anspruch 1 und einen pharmazeutisch unbedenklichen Exzipienten, einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Verdünnungsmittel.
3. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 2, bei der es sich um eine lyophilisierte Formulierung handelt, hergestellt aus einer Formulierung, die einen Citronensäure-Citrat-Puffer oder einen Essigsäure-Acetat-Puffer mit einem pH-Wert von etwa 4 bis etwa 6 umfasst, wobei die Formulierung gegebenenfalls weiterhin ein die Isotonizität einstellendes Mittel und/oder einen Füllstoff umfasst und/oder weiterhin ein aus der aus Methionin, Ascorbinsäure, Salzformen von Ascorbinsäure, Thioglycerin und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewähltes Antioxidationsmittel umfasst.
4. CNP-Variante nach Anspruch 1 oder pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 2 oder 3 zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung einer mit Knochen in Zusammenhang stehende Erkrankung oder Skelettdysplasie ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Osteoarthritis, hypophosphatemischer Rachitis, Achondroplasie, Hypochondroplasie, kurzer Statur, Zwergwuchs, Osteochondrodysplasien, thanatophorer Dysplasie, Osteogenesis imperfecta, Achondrogenese, homozygoter Achondroplasie, Chondrodysplasia punctata, camptomeler Dysplasie, kongenitaler lethaler Hypophosphatasie, dem perinatalen lethalen Typ von Osteogenesis imperfecta, Kurzrippen-Polydaktyliesyndromen, Hypochondroplasie, dem rhizomenen Typ von Chondrodysplasia punctata, metaphysealer Dysplasie vom Jansen-Typ, Spondyloepiphysialer Dysplasia congenita, Atelosteogenese, diastropher Dysplasie, kongenitalem kurzem Femur, mesomeler Dysplasie vom Langer-Typ, mesomeler Dysplasie vom Nievergelt-Typ, Robinow-Syndrom, Reinhardt-Syndrom, Akrodysostose, peripherer Dysostose, Kniest-Dysplasie, Fibrochondrogenese, Roberts-Syndrom, akromesomeler Dysplasie, Mikromelie, Morquio-Syndrom, Kniest-Syndrom, metatropher Dysplasie und Spondyloepimetaphysealer Dysplasie.
5. CNP-Variante nach Anspruch 1 oder pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 2 oder 3 zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung einer Erkrankung der vaskulären glatten Muskulatur, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hypertonie, Restenose, Arteriosklerose, akuter dekompensierter Herzinsuffizienz, kongestiver Herzinsuffizienz, Herzödem, Nierenödem, Leberödem, akuter Niereninsuffizienz und chronischer Niereninsuffizienz.
6. Verfahren zur rekombinanten Produktion einer CNP-Variante nach Anspruch 1, umfassend:

   (i) die Kultivierung einer bakteriellen Wirtszelle, welche ein erstes Polynukleotid umfasst, welches für eine CNP-Polypeptidvariante nach Anspruch 1 codiert, verbunden mit einem zweiten Polynukleotid, welches für ein spaltbares Peptid oder Protein codiert, unter Bedingungen, die zur Expression eines Fusionspolypeptids, das durch die ersten und zweiten Polynukleotide codiert wird, führen, wobei das Fusionspolypeptid die CNP-Variante direkt an das spaltbare Peptid oder Protein gebunden oder indirekt über einen Linker daran gebunden umfasst und wobei das spaltbare Peptid bzw. Protein ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Histidin-Tags, humanem Transkriptionsfaktor TAF12, der TAF12-Histon-Faltungsdomäne, TAF12(C/A), TAF12(D/E), TAF12(4D/4E), TAF12(6D/6E), TAF12(10D/10E), TAF12(C/A&D/E), TAF12(C/A&4D/4E), TAF12(C/A&6D/6E), TAF12(C/A&10D/10E), Ketosteroidisomerase, maltosebindendem Protein, β-Galaktosidase, Glutathion-S-Transferase, Thioredoxin, der chitinbindenden Domäne, BMP-2 und BMP-2(C/A), und

   (ii) das Abspalten des spaltbaren Peptids oder Proteins vom Fusionspolypeptid unter Freisetzung der CNP-Variante.
7. Verfahren nach Anspruch 6, wobei das Fusionspolypeptid als ein lösliches Protein oder als ein Einschlusskörper exprimiert wird, weiterhin umfassend die Isolierung des exprimierten Fusionspolypeptids aus der Wirtszelle oder dem Kulturmedium.
8. Verfahren nach Anspruch 6 oder 7, welches weiterhin das In-Kontakt-Bringen des isolierten Fusionspolypeptids mit einem Spaltungsmittel ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Ameisensäure, Bromcyan (CNBr), Hydroxylamin, Proteinselbstspaltung, Faktor Xa, Enterokinase, ProTEV und SUMO-Protease umfasst.
9. Verfahren nach Anspruch 8, wobei es sich bei dem Spaltungsmittel um Ameisensäure handelt und wobei das In-Kontakt-Bringen des isolierten Fusionspolypeptids mit einem Spaltungsmittel in Gegenwart von etwa 1% bis etwa 10% Ameisensäure bei einer Temperatur von etwa 50°C bis etwa 70°C über eine Zeitspanne von etwa 5 Stunden bis etwa 36 Stunden erfolgt.
10. Verfahren nach einem der Ansprüche 6 bis 9, welches eine CNP-Variante ausgewählt aus der folgenden Gruppe liefert:

    PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-CNP37) (SEQ ID Nr: 186),

    MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-CNP37) (SEQ ID Nr: 192),

    PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-Gly-CNP37) (SEQ ID Nr: 145) und

    MGQEIIPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-Gly-CNP37) (SEQ ID Nr: 191).
11. CNP-Variante, hergestellt nach dem Verfahren nach einem der Ansprüche 6 bis 9, wobei die CNP-Variante ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus:

    PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-CNP37) (SEQ ID Nr: 186),

    MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-CNP37) (SEQ ID Nr: 192),

    PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-Gly-CNP37) (SEQ ID Nr: 145) und

    MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-Gly-CNP37) (SEQ ID Nr: 191).
12. CNP-Variante zur Verwendung in einem Verfahren zur Erhöhung des Wachstums langer Knochen, wobei die CNP-Variante ausgewählt ist aus:

    (SEQ ID Nr: 192) MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met- CNP37),

    (SEQ ID Nr: 186) PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-CNP37),

    (SEQ ID Nr: 145) PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-Gly-CNP37) und

    (SEQ ID Nr: 191) MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Met-Gly-CNP37).