HK1160891B - Fibronectin type iii domain based scaffold compositions, methods and uses - Google Patents

Claims (14)

1. Echafaudage de protéines isolées comprenant une séquence d'acides aminés qui possède au moins 75% d'identité à SEQ ID NO:16, qui présente 7 brins et 6 boucles entre les brins, et qui comprend la séquence d'acides aminés SEQ ID NO:16, mais dans lequel une ou plusieurs des boucles sont altérées pour se lier à une cible tandis que les brins conservent leur séquence en tant que portions d'ossature, les boucles se trouvant sur les résidus 13-16, 22-28, 38-43, 51-54, 60-64 et 75-81 de SEQ ID NO:16 et étant capables de se lier à des protéines cellulaires et/ou à des molécules d'acides nucléiques.
2. Echafaudage de protéines isolées selon la revendication 1, dans lequel les régions de boucles sur ou à proximité des résidus 22-28, 51-54 et 75-81 de SEQ ID NO:16 sont altérées pour ce qui est de leur affinité et spécificité de liaison.
3. Echafaudage de protéines isolées selon la revendication 1 ou la revendication 2, l'échafaudage de protéines isolées se liant à une protéine cible qui présente une K_D inférieure ou égale à environ 10^-7 M, telle que 0,1-9,9 X 10^-8, 10^-9, 10^-10, 10^-11, 10^-12, 10^-13, 10^-14 ou 10^-15M, telle que déterminée par résonance plasmonique de surface de la méthode Kinexa.
4. Procédé de construction d'une banque d'échafaudages de protéines selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, comprenant les étapes consistant à fournir un polypeptide ayant la séquence d'acides aminés SEQ ID NO:16 ; et à introduire une diversité dans des copies du polypeptide ayant la séquence d'acides aminés SEQ ID NO:16 pour former la banque d'échafaudages de protéines, dans lequel l'étape d'introduction d'une diversité comprend la mutation d'au moins une région boucle choisie dans le groupe consistant en les résidus au niveau des positions ou à proximité des positions 13-16, 22-28, 38-43, 51-54, 60-64 et 75-81 de SEQ ID NO:16.
5. Banque produite par le procédé de la revendication 4.
6. Procédé de production d'un échafaudage de protéines se liant à une cible spécifique avec une affinité de liaison prédéfinie, comprenant la mise en contact de la banque de la revendication 5 avec la cible spécifique, et l'isolement d'un échafaudage de protéines se liant à la cible spécifique avec l'affinité prédéfinie.
7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel l'étape d'isolement comprend l'isolement des molécules de l'échafaudage se liant à la cible spécifique, et l'essai des molécules de l'échafaudage isolées pour ce qui est de leur affinité de liaison à la cible spécifique, dans lequel en option:

   (i) l'étape d'isolation comprend un panning de la bibliothèque avec la cible spécifique, l'identification des molécules d'échafaudage se liant à la cible spécifique, et l'isolation des molécules d'échafaudage de liaison ; ou

   (ii) l'affinité est inférieure ou égale à environ 10^-7M.
8. Molécule d'acide nucléique isolée codant pour l'échafaudage de protéines selon l'une quelconque des revendications 1 à 3.
9. Molécule d'acide nucléique isolée selon la revendication 8, comprenant la séquence nucléotidique présentée dans SEQ ID NO:17.
10. Vecteur acide nucléique isolé comprenant la molécule d'acide nucléique isolée selon la revendication 8.
11. Cellule hôte procaryote ou eucaryote comprenant la molécule d'acide nucléique isolée selon la revendication 8, en option ladite cellule hôte étant au moins une cellule hôte choisie parmi E. coli BL21Star(DE3), une autre cellule de E. coli, une levure, COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, les cellules de myélome ou de lymphome, ou toute cellule dérivée, immortalisée ou transformée de ces dernières.
12. Composition comprenant l'échafaudage de protéines selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 et au moins un support ou diluant pharmaceutiquement acceptable, en option comprenant en outre au moins un composé ou un polypeptide choisi parmi un marqueur ou un rapporteur détectable, un antagoniste du TNF, un médicament anti-infectieux, un médicament du système cardiovasculaire (CV), un médicament du système nerveux central (SNC), un médicament du système nerveux autonome (SNA), un médicament des voies respiratoires, un médicament du tractus gastro-intestinal (GI), un médicament hormonal, un médicament pour le bilan fluidique ou électrolytique, un médicament hématologique, un antinéoplasique, un médicament immunomodulateur, un médicament ophtalmique, otique ou nasal, un médicament topique, un médicament nutritionnel, une cytokine et un antagoniste des cytokines.
13. Dispositif médical comprenant l'échafaudage de protéines selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, ledit dispositif convenant à la mise en contact ou l'administration dudit échafaudage de protéines par au moins un mode choisi parmi la voie parentérale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intra-articulaire, intrabronchique, intra-abdominale, intracapsulaire, intracartilagineuse, intracavitaire, intracoeliaque, intracérébelleuse, intracérébroventriculaire, intracolique, intracervicale, intragastrique, intrahépatique, intramyocardique, intra-ostiale, intrapelvique, intrapéricardique, intrapéritonéale, intrapleurale, intraprostatique, intrapulmonaire, intrarectale, intrarénale, intrarétinienne, intraspinale, intrasynoviale, intrathoracique, intra-utérine, intravésicale, intralésionelle, en bolus, vaginale, rectale, buccale, sublinguale, intranasale et transdermique.
14. Article de manufacture pour utilisation pharmaceutique ou diagnostique humaine, comprenant un matériau d'emballage et un récipient contenant une solution ou une forme lyophilisée de l'échafaudage de protéines selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel ledit récipient est en option un composant d'un dispositif ou d'un système d'administration parentéral, sous-cutané, intramusculaire, intraveineux, intra-articulaire, intrabronchique, intra-abdominal, intracapsulaire, intracartilagineux, intracavitaire, intracoeliaque, intracérébelleux, intracérébroventriculaire, intracolique, intracervical, intragastrique, intrahépatique, intramyocardique, intra-ostial, intrapelvique, intrapéricardique, intrapéritonéal, intrapleural, intraprostatique, intrapulmonaire, intrarectal, intrarénal, intrarétinien, intraspinal, intrasynovial, intrathoracique, intra-utérin, intravésical, intralésionnel, en bolus, vaginal, rectal, buccal, sublingual, intranasal ou transdermique.