HK1011691B - Mammalian telomerase - Google Patents

Claims (35)

1. Acide ribonucléique sensiblement pur capable de s'associer à un composant protéïque d'une télomérase de mammifère pour former une holoenzyme de télomérase active du point de vue enzymatique, l'oligoribonucléotide comprenant une séquence codée par la région codante de l'insert HindIII-Sacl d'environ 2,5 kb du plasmide GRN33 (ATCC 75926), ou par une séquence qui a au moins 80 % ou 95 % d'identité d'avec au moins 50 nucléotides contigus de ladite région codante.
2. Acide ribonucléique selon la revendication 1, dans lequel la séquence est :    ou une séquence qui a au moins 80 % ou au moins 95 % d'identité avec au moins 50 nucléotides contigus de ladite séquence.
3. Acide ribonucléique selon la revendication 1 ou la revendication 2, celui-ci étant un composant ARN d'une télomérase humaine.
4. Acide ribonucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 comprenant la séquence :
5. Molécule d'acide nucléique isolé codant un acide ribonucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4.
6. Plasmide recombinant comprenant une séquence nucléotidique qui code un acide ribonucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4.
7. Cellule hôte transformée avec un plasmide selon la revendication 6.
8. Oligonucléotide comprenant plus de 10 nucléotides contigus complémentaires à des nucléotides contigus d'un acide ribonucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 et qui inhibe l'activité enzymatique d'une télomérase de mammifère.
9. Oligonucléotide selon la revendication 8, dans lequel l'oligonucléotide comprend au moins 15, éventuellement au moins 20 nucléotides contigus complémentaires à des nucléotides contigus d'un acide ribonucléique selon les revendications 1 à 4.
10. Oligonucléotide selon la revendication 8 constitué desdits plus de 10 nucléotides contigus complémentaires à des nucléotides contigus d'un acide ribonucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4.
11. Oligonucléotide selon la revendication 9 constitué desdits au moins 15, éventuellement desdits au moins 20, nucléotides contigus complémentaires à des nucléotides contigus d'un acide ribonucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4.
12. Oligonucléotide selon la revendication 8 ou la revendication 9 ayant la séquence : ou
13. Oligonucléotide selon l'une quelconque des revendications 8 à 11, celui-ci étant un ribozyme qui clive spécifiquement le composant ARN d'une télomérase.
14. Oligonucléotide selon l'une quelconque des revendications 8 à 12 comprenant des analogues de nucléotides modifiés, par exemple des ribonucléotides O-méthylés, des nucléotides phosphorothioate ou des nucléotides phosphonates de méthyle.
15. Formulation pharmaceutique comprenant un oligonucléotide selon l'une quelconque des revendications 7 à 14.
16. Oligonucléotide selon l'une quelconque des revendications 8 à 14 pour l'utilisation en tant que produit pharmaceutique.
17. Utilisation d'un oligonucléotide selon l'une quelconque des revendications 8 à 14 pour la fabrication d'un médicament pour traiter une néoplasie.
18. Procédé d'inhibition d'une activité télomérase dans une cellule in vitro, comprenant la mise en contact de la cellule avec un oligonucléotide selon l'une quelconque des revendications 8 à 14.
19. Acide nucléique recombinant ou synthétique isolé comprenant une séquence identique ou complémentaire à plus de 10 nucléotides consécutifs d'un acide ribonucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou un complément de celle-ci, et qui est choisi parmi :

    a) une sonde nucléotidique qui s'hybride spécifiquement à un ARN d'une télomérase ou sa séquence codante dans un échantillon de mammifère, de préférence humain, comprenant éventuellement un marqueur détectable ; ou

    b) une amorce nucléotidique capable d'amorcer une réaction d'amplification spécifique d'un ARN d'une télomérase ou sa séquence codante dans un échantillon de mammifère, de préférence humain.
20. Acide nucléique selon la revendication 19, dans lequel l'acide nucléique comprend une séquence identique ou complémentaire à au moins 20 nucléotides consécutifs d'un acide ribonucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou un complément de celle-ci.
21. Utilisation d'un oligonucléotide comprenant une séquence identique ou complémentaire à plus de 10 nucléotides consécutifs d'un acide ribonucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou un complément de celle-ci, tel que :

    a) une sonde nucléotidique spécifique d'un ARN d'une télomérase ou sa séquence codante dans un échantillon de mammifère, de préférence humain, comprenant éventuellement un marqueur détectable ; ou

    b) une amorce nucléotidique capable d'amorcer une réaction d'amplification spécifique pour un ARN d'une télomérase ou sa séquence codante.
22. Utilisation selon la revendication 21, dans laquelle l'oligonucléotide comprend une séquence identique ou complémentaire à au moins 20 nucléotides consécutifs d'un acide ribonucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou un complément de celle-ci.
23. Procédé de détermination du niveau, de la quantité ou de la présence d'un composant ARN d'une télomérase dans un échantillon de mammifère, de préférence humain, comprenant les étapes consistant à:

    a) combiner l'échantillon avec une sonde oligonucléotidique telle que définie dans la revendication 19 ou la revendication 20 dans des conditions dans lesquelles l'oligonucléotide s'hybridera spécifiquement à un ARN de télomérase dans l'échantillon, et détecter tout hybride qui se forme comme résultat ; ou

    b) combiner l'échantillon avec une paire d'amorces oligonucléotidiques telles que définies dans la revendication 19 ou la revendication 20, effectuer une réaction d'amplification et détecter tout produit d'amplification qui se forme comme résultat.
24. Procédé selon la revendication 23, comprenant en outre la quantification de l'hybride ou du produit d'amplification de manière à déterminer la concentration du composant ARN d'une télomérase dans l'échantillon.
25. Procédé de détection d'un composant ARN d'une télomérase dans un échantillon provenant d'un patient, comprenant la liaison d'une sonde ou d'une amorce oligonucléotidique marquée telles que définies dans la revendication 19 ou la revendication 20 à un échantillon provenant du patient, et la détection de la présence d'un matériau marqué lié à l'ARN dans l'échantillon.
26. Procédé de détection de la présence de cellules cancéreuses dans un échantillon, le procédé comprenant la détermination du niveau du composant ARN d'une télomérase dans l'échantillon selon la revendication 23 ou la revendication 24 et la corrélation de la présence d'un niveau pathognomique du composant ARN de télomérase en présence de cellules cancéreuses.
27. Trousse de détermination du niveau, de la quantité ou de la présence d'un composant ARN d'une télomérase humaine dans un échantillon, ladite trousse comprenant une sonde ou une amorce oligonucléotidique telles que définies dans la revendication 19 ou la revendication 20 et comprenant éventuellement une série d'instructions.
28. Procédé d'isolement d'une holoenzyme de télomérase, comprenant la capture de la protéine d'holoenzyme en utilisant un agent d'affinité comprenant plus de 10 nucléotides consécutifs d'un oligonucléotide complémentaire d'un acide ribonucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, et la récupération ensuite de la protéine à partir de l'agent d'affinité.
29. Procédé selon la revendication 28, dans lequel l'agent d'affinité est attaché à un support solide ou il est modifié chimiquement pour une immobilisation ultérieure sur un support solide.
30. Procédé d'identification d'un composant ARN d'une télomérase d'une espèce mammifère non humaine comprenant la mise en contact d'un acide nucléique à partir du tissu de ladite espèce avec une amorce oligonucléotidique telle que définie dans la revendication 17 ou la revendication 18.
31. Acide nucléique isolé, recombinant ou synthétique comprenant une région régulatrice de la transcription ayant au moins une des propriétés suivantes :

    (a) elle comprend la séquence suivante, ou son complément :

    (b) elle comprend une séquence qui est identique à au moins 25 nucléotides consécutifs de la séquence de (a) ;

    (c) elle comprend une séquence qui est identique à au moins 80 % ou 95 % à au moins 100 nucléotides consécutifs de la séquence en (a) ou son complément ;

    (d) elle s'hybride spécifiquement à l'insert HindIII-Sacl d'environ 2,5 kb du plasmide pGRN33 (ATCC 75928) ; ou

    (e) elle s'hybride spécifiquement à un insert SauIIIA1 - HindIII du clone lambda 28-1 (ATCC 75925).
32. Acide nucléique selon la revendication 31, dans lequel la région régulatrice de la transcription contrôle la transcription d'une séquence génique à laquelle elle est liée de manière fonctionnelle.
33. Plasmide recombinant comprenant une séquence nucléotidique selon la revendication 31.
34. Cellule hôte transformée avec un plasmide selon la revendication 33.
35. Mammifère non humain transgénique ayant au moins un allèle d'un composant ARN d'une télomérase mammifère inactivé d'un point de vue fonctionnel, lequel a été interrompu par ciblage homologue.