HK1082771B - Apparatus and methods for detecting dna in biological samples - Google Patents

Claims (24)

1. Appareil pour la détection d'un ADN cible dans un échantillon biologique en utilisant une hybridation électrique, comprenant un substrat formé avec au moins une cellule de réaction possédant une couche d'oxyde d'aluminium offrant une surface sur laquelle des sondes de capture d'ADN sont attachées; et un moyen pour une hybridation électriquement assistée à l'usage entre ledit ADN cible et lesdites sondes de capture.
2. Appareil selon la revendication 1, dans lequel ladite surface d'oxyde d'aluminium est formée par une oxydation d'une couche d'aluminium.
3. Appareil selon la revendication 1, dans lequel ladite surface d'oxyde d'aluminium est formée par une technique de pulvérisation cathodique.
4. Appareil selon l'une quelconque des revendications 1-3, dans lequel ladite surface d'oxyde d'aluminium est revêtue avec un premier composé pour agir comme une couche d'attache pour la sonde de capture.
5. Appareil selon la revendication 4, où ledit appareil comprend en outre des sondes de capture attachées à ladite surface d'oxyde d'aluminium et où lesdites sondes de capture sont marquées avec un deuxième composé qui peut s'attacher au dit premier composé.
6. Appareil selon la revendication 5, dans lequel lesdits premier et deuxième composés comprennent une paire anticorps-protéine.
7. Appareil selon la revendication 6, dans lequel ledit premier composé comprend des anticorps anti-digoxygénine et dans lequel ledit deuxième composé comprend de la digoxygénine.
8. Appareil selon la revendication 5, dans lequel lesdits premier et deuxième composés comprennent de la streptavidine et de la biotine, ou vice versa.
9. Appareil selon l'une quelconque des revendications 1-3, dans lequel ladite surface d'oxyde d'aluminium est revêtue avec une première molécule pour agir comme une couche d'attache pour la sonde de capture.
10. Appareil selon la revendication 9, où ledit appareil comprend en outre des sondes de capture attachées à ladite surface d'oxyde d'aluminium et où lesdites sondes de capture sont marquées avec une deuxième molécule présentant une affinité avec ladite première molécule.
11. Appareil selon l'une quelconque des revendications 1-10, dans lequel ladite couche d'oxyde d'aluminium possède une épaisseur d'au moins 50 Å.
12. Appareil selon l'une quelconque des revendications 1-11, dans lequel ladite surface d'oxyde d'aluminium est revêtue avec un réactif pour réduire le signal de fond dans un procédé de détection.
13. Appareil selon la revendication 12, dans lequel ledit réactif comprend un ADN de sperme de saumon.
14. Appareil selon la revendication 12, dans lequel ledit réactif comprend de l'albumine, ou une autre protéine, ou du Ficoll.
15. Procédé pour la détection d'un ADN cible dans un échantillon biologique, comprenant les étapes suivantes:

    (a) fourniture d'une cellule de réaction qui est exempte de tout agarose ou couche de gel et formée avec une surface d'oxyde d'aluminium qui est revêtue avec un premier composé pour assurer l'orientation correcte de la sonde de capture,

    (b) ajout à ladite cellule d'une solution contenant des sondes de capture formées avec une séquence d'ADN complémentaire au dit ADN cible et marquées avec un deuxième composé présentant une haute affinité avec ledit premier composé,

    (c) approvisionnement dudit échantillon vers ladite cellule,

    (d) ajout à ladite cellule d'une solution contenant des sondes de détection de l'ADN cible formées avec une séquence d'ADN complémentaire au dit ADN cible pour une hybridation électrique avec l'ADN cible,

    (e) fourniture d'un courant électrique pour une hybridation électriquement assistée à l'usage entre ledit ADN cible et lesdites sondes de capture,

    (f) ajout à ladite cellule d'un moyen pour générer un signal détectable dans une cellule où l'ADN cible a été capturé par lesdites sondes de capture et détecté par lesdites sondes de détection, et

    (g) détection dudit signal.
16. Procédé selon la revendication 15, dans lequel lesdits premier et deuxième composés comprennent une paire anticorps-protéine.
17. Procédé selon la revendication 16, dans lequel lesdits premier et deuxième composés comprennent de l'anti-digoxygénine et de la digoxygénine.
18. Procédé selon la revendication 16, dans lequel lesdits premier et deuxième composés comprennent une paire d'interaction de protéines ou de molécules non protéiques avec une affinité l'une pour l'autre.
19. Procédé selon la revendication 16, dans lequel lesdits premier et deuxième composés comprennent de la streptavidine et de la biotine, ou vice versa.
20. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15-19, comprenant en outre l'ajout d'un réactif pour réduire le signal de fond.
21. Procédé selon la revendication 20, dans lequel ledit réactif réduisant le signal de fond est de l'albumine ou est dérivé d'un ADN de sperme de saumon.
22. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15-21, dans lequel, dans l'étape (f), ledit moyen pour générer ledit signal inclut une solution de nanoparticules d'or revêtues de streptavidine qui se lient avec ladite sonde de détection, et une solution d'ions argent qui sont réduits sur la surface desdites nanoparticules d'or pour former des dépôts d'argent.
23. Puce à ADN pour la détection d'un ADN cible dans un échantillon en utilisant une hybridation électrique, comprenant un substrat incluant au moins une cellule de réaction, ladite au moins une cellule de réaction possédant une couche d'oxyde d'aluminium avec une surface sur laquelle des sondes de capture d'ADN peuvent être attachées, et un moyen pour une hybridation électriquement assistée à l'usage entre ladite cible et lesdites sondes de capture.
24. Procédé selon la revendication 23, dans lequel ledit courant électrique est un courant électrique à impulsion.