HK1069185B

HK1069185B - Stable adenoviral vectors and methods for propagation thereof

Info

Publication number: HK1069185B
Application number: HK05101594.3A
Authority: HK
Inventors: Ronald Vogels; Menzo Jans Emco Havenga; David Adrianus Theodorus Zuijdgeest
Original assignee: Crucell Holland B.V.
Priority date: 2002-04-25
Filing date: 2003-04-24
Publication date: 2009-04-24

Claims

Rekombinantes Adenovirus der Untergruppe B mit einer Deletion in der E1-Region und wobei das Adenovirus nicht für ein funktionelles E1B 55K-Genprodukt codiert, wobei das Adenovirus umfasst:
(i) die Adenovirussequenz, die zwischen dem Stoppcodon der E1B 55K codierenden Sequenz und dem Startcodon der pIX codierenden Sequenz lokalisiert ist; und

(ii) eine funktionelle pIX codierende Sequenz unter der Kontrolle einer Sequenz mit Promotoraktivität, wobei die Sequenz mit Promotoraktivität aus bis zu 0,7 kb der Adenovirussequenzen besteht, die sich direkt stromaufwärts des pIX-Startcodons befinden, wobei die Sequenz die erforderliche Minimalsequenz für die Promotoraktivität umfasst, welche in den letzten 166 Basenpaaren der E1B 55K codierenden Sequenz vorkommt.
Rekombinantes Adenovirus nach Anspruch 1, wobei die Sequenz mit Promotoraktivität bis zu 600 Nucleotide der Adenovirussequenzen direkt stromaufwärts der pIX codierenden Sequenz enthält.
Rekombinantes Adenovirus nach Anspruch 1, wobei die Sequenz mit Promotoraktivität bis zu 300 Nucleotide der Adenovirussequenzen direkt stromaufwärts der pIX codierenden Sequenz enthält.
Rekombinantes Adenovirus nach Anspruch 1, wobei die Sequenz mit Promotoraktivität bis zu 250 Nucleotide der Adenovirussequenzen direkt stromaufwärts der pIX codierenden Sequenz enthält.
Rekombinantes Adenovirus der Untergruppe B, das eine funktionelle pIX codierende Sequenz und eine Deletion in der E1-Region umfasst, wobei die pIX codierende Sequenz unter der Kontrolle eines heterologen Promotors ist, der die Expression in einer gegebenen Verpackungszelle steuert.
Rekombinantes Adenovirus nach Anspruch 5, wobei der heterologe Promotor eine Nucleinsäuresequenz umfasst, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem nichtendogenen proximalen pIX-Promotor, einem viralen Promotor, einem zellulären Promotor, einem synthetischen Promotor und einem Hybridpromotor.
Rekombinantes Adenovirus nach Anspruch 6, wobei der heterologe Promotor ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Sequenzen, die mindestens zum Teil vom Ad5-proximalen pIX-Promotor, einem Rous Sarcomavirus-Promotor und einem Adenovirus-E1B-Promotor abgeleitet sind.
Rekombinantes Adenovirus nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei das Adenovirus von einem Adenovirus-Serotyp 35 oder einem Adenovirus-Serotyp 11 abgeleitet ist.
Rekombinantes Adenovirus nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass es des weiteren eine Sequenz enthält, die ein funktionelles E4-orf6-Protein codiert, das von einem Adenovirus der Untergruppe C abgeleitet ist.
Isolierte Nucleinsäure, die nach Einführen in eine geeignete Verpackungszelle das Genom eines rekombinanten Adenoviruses nach einem der Ansprüche 2 bis 9 darstellt.
Verfahren zum Erhöhen der Stabilität und/oder der Verpackungskapazität eines rekombinanten Adenoviruses der Untergruppe B mit einer Deletion in der E1-Region, umfassend den Schritt der Expression der Elemente, die für die Produktion und den Zusammenbau des rekombinanten Adenoviruses in Viruspartikel in der Verpackungszelle notwendig sind, dadurch gekennzeichnet, dass die folgenden Elemente beibehalten oder wieder in das Adenovirus eingeführt werden:
(i) die Adenovirussequenz, die zwischen dem Stoppcodon der E1B 55K codierenden Sequenz und dem Startcodon der pIX codierenden Sequenz lokalisiert ist; und

(ii) eine funktionelle pIX codierende Sequenz unter der Kontrolle einer Sequenz mit Promotoraktivität, wobei die Sequenz mit Promotoraktivität aus bis zu 0,7 kb der Adenovirussequenzen besteht, die sich direkt stromaufwärts des pIX-Startcodons befinden, wobei die Sequenz die erforderliche Minimalsequenz für die Promotoraktivität umfasst, welche in den letzten 166 Basenpaaren der E1B 55K codierenden Sequenz vorkommt.
Verfahren nach Anspruch 11, wobei die Sequenz mit Promotoraktivität bis zu 600 Nucleotide der Adenovirussequenzen direkt stromaufwärts der pIX codierenden Sequenz enthält.
Verfahren nach Anspruch 11, wobei die Sequenz mit Promotoraktivität bis zu 300 Nucleotide der Adenovirussequenzen direkt stromaufwärts der pIX codierenden Sequenz enthält.
Verfahren nach Anspruch 11, wobei die Sequenz mit Promotoraktivität bis zu 250 Nucleotide der Adenovirussequenzen direkt stromaufwärts der pIX codierenden Sequenz enthält.
Verfahren zum Erhöhen der Stabilität und/oder der Verpackungskapazität eines rekombinanten Adenoviruses der Untergruppe B mit einer Deletion in der E1-Region, umfassend den Schritt der Expression der Elemente, die für die Produktion und den Zusammenbau des rekombinanten Adenoviruses in Viruspartikel in der Verpackungszelle notwendig sind, wobei die pIX codierenden Sequenzen unter der Kontrolle eines heterologen Promotors sind.
Verfahren nach einem der Ansprüche 11 bis 15, wobei das rekombinante Adenovirus von einem Adenovirus-Serotyp 35 oder einem Adenovirus-Serotyp 11 abgeleitet ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche 15 und 16, wobei der heterologe Promotor ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem nichtendogenen proximalen pIX-Promotor, einem viralen Promotor, einem zelluläre Promotor, einem synthetischen Promotor und einem Hybridpromotor.
Verfahren nach Anspruch 17, wobei der heterologe Promotor ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus dem Ad5-proximalen pIX-Promotor, einem Rous Sarcomavirus-Promotor und einem Adenovirus E1B-Promotor.
Rekombinante Adenovirus-Verpackungszelle, umfassend ein rekombinantes Adenovirus nach einem der Ansprüche 1 bis 9.