DE1211636B

DE1211636B - Process for the preparation of 16alpha-hydroxysteroids

Info

Publication number: DE1211636B
Application number: DEN23882A
Authority: DE
Inventors: Jan De Flines; Willem Frederik Van Der Waard
Original assignee: Philips Gloeilampenfabrieken NV
Current assignee: Koninklijke Philips NV
Priority date: 1962-10-16
Filing date: 1963-10-14
Publication date: 1966-03-03
Also published as: CH469689A

Description

Verfahren zur Herstellung von 16 a-Hydroxysteroiden Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 16x-Hydroxysteroiden, wobei unter Steroiden hier Verbindungen verstanden werden, die der Cyclopentanoperhydrophenanthrenreihe angehören und insbesondere in 10- und 13-Stellung eine Methylgruppe tragen. Als Ausgangsstoffe kommen dementsprechend nicht nur Steroide der normalen Reihe (10ß-, 9x-Konfiguration), sondern auch Steroide der Retroreihe (10x-Methyl-, 9ß-Konfiguration) und der Pyroreihe (10«-Methyl, 9«-Konfiguration) in Betracht.Process for the preparation of 16α-Hydroxysteroids The invention relates to a process for the production of 16x-hydroxysteroids, taking under steroids Compounds are understood here which are of the cyclopentanoperhydrophenanthren series belong and in particular carry a methyl group in the 10- and 13-position. as Accordingly, the starting materials are not just steroids of the normal range (10ß-, 9x configuration), but also steroids of the retro series (10x methyl, 9ß configuration) and the pyre series (10 "methyl, 9" configuration) into consideration.

In den Ausgangsstoffen dürfen verschiedene Substituenten z. B. eine oder mehrere gegebenenfalls verätherte oder veresterte Hydroxygruppen, ein oder mehrere Ketosauerstoffatome, eine oder mehrere, gegebenenfalls ungesättigte Alkylgruppen mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, ein oder mehrere Halogenatome, z. B. Cl, Br oder F vorkommen. Es können Hydroxygruppen in den Stellungen 1, 2, 3, 6, 11, 17 oder 21 (jedoch nicht in 17x-Stellung), Ketosauerstoff atome in den Stellungen 3, 11 und/oder 20 und Alkylgruppen, wie Methyl- oder Äthylgruppen, in den Stellungen 1, 2, 3, 4, 6 oder 17, jedoch im letzteren Falle nicht in ß-Stellung, in Kombination mit einer 17a-Hydroxygruppe vorhanden sein. Weiter dürfen in den Ausgangsstoffen eine oder mehrere Doppelbindungen vorhanden sein, z. B. ausgehend von den Kohlenstoffatomen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 14 oder 17 (20).In the starting materials, various substituents such. Legs or more optionally etherified or esterified hydroxyl groups, one or several keto oxygen atoms, one or more, optionally unsaturated, alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms, one or more halogen atoms, e.g. B. Cl, Br or F occur. There can be hydroxyl groups in the positions 1, 2, 3, 6, 11, 17 or 21 (but not in the 17x position), keto oxygen atoms in positions 3, 11 and / or 20 and alkyl groups, such as methyl or ethyl groups, in positions 1, 2, 3, 4, 6 or 17, but in the latter case not in the ß-position, in combination with a 17a-hydroxy group. May continue in the starting materials one or more double bonds may be present, e.g. B. starting from the carbon atoms 1, 2, 3, 4, 5, 6, 14 or 17 (20).

Die verfahrensgemäß eingesetzten Ausgangssteroide enthalten eine 3-Keto-44-, eine 3-Keto-A4,11-, oder eine 3-Hydroxy-ds-Gruppe oder funktionell am Sauerstoffatom davon abgeleitete Gruppen, wie Äther oder Ester.The starting steroids used according to the process contain a 3-keto-44, a 3-keto-A4,11-, or a 3-hydroxy-ds group or functionally on the oxygen atom groups derived therefrom, such as ethers or esters.

Es können als gut geeignete Ausgangsstoffe genannt werden: 6 - Dehydro - retro - progesteron, Retro - Progesteron, Pyro-progesteron, Retro-testosteron, oder 17ß-Alkyl-retro-testosterone.The following can be mentioned as very suitable starting materials: 6 - Dehydro - retro - progesterone, retro - progesterone, pyro-progesterone, retro-testosterone, or 17β-alkyl-retro-testosterone.

Die verfahrensgemäß herstellbaren, in der Stellung 16 oxydierten Steroide haben entweder an sich oder nach Umwandlung in andere Steroide eine interessante pharmakologische Wirkung. Sie sind daher wichtige Zwischenprodukte für die Herstellung von pharmakologisch wirksamen Steroiden.The 16-position oxidized steroids which can be prepared according to the process have an interesting one either in and of themselves or after conversion to other steroids pharmacological effect. They are therefore important intermediate products for production of pharmacologically active steroids.

Bei der Einführung einer 16-Hydroxygruppe durch das erfindungsgemäße Verfahren wird diese wahrscheinlich in die a-Lage orientiert.When a 16-hydroxy group is introduced by the inventive Procedure, this is likely to be oriented in the a-location.

Es ist bereits bekannt, daß man lOß-Methylsteroide durch Bebrütung einer entsprechenden 16-Desoxyverbindung mit dem Enzymsystem gewisser Mikroorganismen in 16-Stellung hydroxylieren kann. Hierfür wurden bereits verwendet Pestalotia funerea aus der Klasse der Fungi imperfecti, ferner die Streptomycesarten S. roseochromogonus (W a k s m a n, Collection 3689) S. sp. ATCC 11009, S. roseochromogenus (ATCC 3347), S. viridis und S. olivaceus.It is already known that lOß-methyl steroids can be produced by incubation a corresponding 16-deoxy compound with the enzyme system of certain microorganisms can hydroxylate in the 16-position. Pestalotia funerea have already been used for this from the class of the Fungi imperfecti, also the Streptomyces species S. roseochromogonus (W a k s m a n, Collection 3689) S. sp. ATCC 11009, S. roseochromogenus (ATCC 3347), S. viridis and S. olivaceus.

Es wurde nun gefunden, daß eine 16cx-Hydroxygruppe mit Hilfe des Enzymsystems von Fungi der Familie der Sphärioidaceae der Ordnung der Sphäropsydales der Klasse der Fungi imperfecti in die vorstehend genannten Steroide eingeführt werden kann.It has now been found that a 16cx-hydroxy group with the help of the enzyme system of Fungi of the family of the Sphärioidaceae of the order of the Sphäropsydales of the class the imperfect fungi can be introduced into the aforementioned steroids.

Es ist bereits bekannt, daß die Fungi der Ordnung der Sphäropsidales eine Oxydation am Kohlenstoff atom 1 von 10ß-Methylsteroiden bewerkstelligen können und daß Fungi dieser Ordnung, d. h. die der Familie der Sphärioidaceae, zur selektiven Einführung von einer 21-Hydroxygruppe in lOß-Methylsteroide benutzt werden können.It is already known that the fungi are of the order of the Sphäropsidales can bring about an oxidation at the carbon atom 1 of 10ß-methyl steroids and that fungi of this order, i. H. those of the family of the Sphärioidaceae, for selective Introduction of a 21-hydroxy group in lOß-methyl steroids can be used.

Die Erfindung betrifft nun ein Verfahren zur Herstellung von 16a-Hydroxysteroiden, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man ein 3-Keto-d 4-, 3-KetodM- oder ein 3-Hydroxy-As-steroid der Androstan-oder Pregnanreihe, das in der Stellung 16 2 Wasserstoffatome besitzt, und der 10oc-Methyl-9ß-, l0oc-Methyl, 9x- oder 10ß-Methyl-9x-reihe angehört, oder deren an der 3-ständigen Sauerstoffunktion funktionell abgeleiteten Derivate nach den für die mikrobiologisch geführte Oxigenierung von 16-Desoxysteroiden üblichen Methoden mit Hilfe von Enzymsystemen oder Sporen von Mikroorganismen der Familie der Sphärioidaceae bebrütet. Es hat sich ergeben, daß insbesondere Mikroorganismen der Art der, Stagomospora curtisii (B e r k und C k e) Sacc für das Verfahren nach der Erfindung geeignet sind.The invention now relates to a process for the preparation of 16a-hydroxysteroids, which is characterized in that one has a 3-keto-d 4-, 3-keto-M or a 3-hydroxy-As steroid the androstane or pregnane series, which has 2 hydrogen atoms in position 16, and belongs to the 10oc-methyl-9ß-, 10oc-methyl, 9x- or 10ß-methyl-9x series, or their derivatives functionally derived from the 3-position oxygen function the usual ones for the microbiologically controlled oxygenation of 16-deoxysteroids Methods using enzyme systems or spores from family microorganisms the Sphärioidaceae incubated. It has been found that in particular Microorganisms of the kind of, Stagomospora curtisii (B e r k and C k e) Sacc for the method according to the invention are suitable.

Als Ausgangsprodukte für das erfindungsgemäße Verfahren sind Steroide der 10a-Methyl-9ßreihe (Retrosteroide) besonders vorteilhaft. Es wurden bei der Anwendung des erfindungsgemäßen Verfahrens auf diese Reihe Ausbeuten von mehr als 800/, festgestellt, während dabei praktisch keine bei der Aufarbeitung störend wirkenden Nebenprodukte gefunden wurden.The starting products for the process according to the invention are steroids the 10α-methyl-9β series (retro steroids) are particularly advantageous. The Applying the process of the invention to this series yields of more than 800 /, found, while practically none had a disruptive effect during work-up By-products were found.

Ein weiterer Vorteil besteht darin, daß das Kulturmedium aus billigen Rohstoffen zusammengesetzt werden kann und bei normaler Lufteinführung eine verhältnismäßig kurze Inkubationsperiode erforderlich ist.Another advantage is that the culture medium is cheap Raw materials can be composed and with normal air intake a proportionate short incubation period is required.

Das Verfahren nach der Erfindung wird auf eine Weise durchgeführt, die `den bekannten mikrobiologischen Umwandlungen entspricht, z. B. indem das Substrat unter geeigneten Verhältnissen mit einer Kultur einer der vorerwähnten Fungusarten und/oder Enzymsysteme derselben in Berührung gebracht wird. Zu diesem Zweck wird z. B. zunächst eine Kultur der Fungusarten unter aeroben Bedingungen in einer Nährlösung gezüchtet, worauf ein Gärmedium, das das zu oxydierende Steroid in einer Lösung oder Suspension enthält, 'der oxydierenden Dissimilationswirkung des entstandenen Maceliums unterworfen wird. Die Nährlösung besteht im wesentlichen aus einer Kohlenstoff= und einer Stickstoffquelle, z. B. einem Kohlehydrat, wie Glucose, Maltose oder Stärke, und einer organischen Stickstoffquelle, z. B. Maisquellwasser oder Hefeextrakt, Eiweißhydrolysaten, Aminosäuren oder einer anorganischen Stickstoffquelle, z. B. Ammoniumsalzen oder Alkalimetallnitraten. Dem Medium, das das zu oxydierende Steroid und eine oder -mehrere der vorerwähnten Nährquellen enthält, kann gewünschtenfalls noch ein Antischaummittel, z. B. Glycerylmonostearat, zugesetzt werden.The method according to the invention is carried out in a manner which corresponds to the known microbiological transformations, e.g. B. by the substrate under suitable conditions with a culture of one of the aforementioned species of fungus and / or enzyme systems thereof is brought into contact. To this end, will z. B. first a culture of the fungus species under aerobic conditions in a nutrient solution cultured, whereupon a fermentation medium containing the steroid to be oxidized in a solution or suspension contains, 'the oxidizing dissimilation effect of the resulting Maceliums is subjected. The nutrient solution consists essentially of a carbon = and a source of nitrogen, e.g. B. a carbohydrate such as glucose, maltose or starch, and an organic nitrogen source, e.g. B. corn steep liquor or yeast extract, Protein hydrolysates, amino acids or an inorganic nitrogen source, e.g. B. Ammonium salts or alkali metal nitrates. The medium that contains the steroid to be oxidized and containing one or more of the aforementioned nutrient sources may, if desired another antifoam agent, e.g. B. glyceryl monostearate may be added.

Die geeignetste Gärungstemperatur liegt gewöhnlich zwischen 20 und 28'C, obgleich höhere oder niedrigere Temperaturen zwischen 15 und 35°C im allgemeinen auch zulässig sind.The most suitable fermentation temperature is usually between 20 and 28'C, although higher or lower temperatures between 15 and 35 ° C in general are also permitted.

Der pH-Wert des - Mediums kann auf normale Weise eingestellt werden und wird vorzugsweise auf 6 bis 7 gebracht.The pH of the medium can be adjusted in the normal way and is preferably brought to 6 to 7.

Die zur Oxydation des Steroids erforderliche Zeit kann zwischen weiten Grenzen schwanken, aber gewöhnlich ist eine Oxydationsperiode von 10 bis 48 Stunden für eine vollständige Umwandlung optimal.The time required for the steroid to oxidize can vary between Limits vary, but an oxidation period of 10 to 48 hours is common optimal for a complete conversion.

Die nach Beendigung des Oxydationsvorganges erhaltenen 16a-Hydroxysteroide können auf übliche Weise aus dem Medium und/oder dem Mycelium abgetrennt werden, vorzugsweise durch Extraktion mit nicht mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmitteln, wie Diäthyläther, Äthylacetat, Amylacetat, Methylisobutylketon, oder durch andere Ester und Ketone. Insbesondere eignet sich als Extraktionsmittel Methylisobutylketon.The 16a-hydroxysteroids obtained after the end of the oxidation process can be separated from the medium and / or the mycelium in the usual way, preferably by extraction with water-immiscible organic solvents, such as diethyl ether, ethyl acetate, amyl acetate, methyl isobutyl ketone, or by others Esters and ketones. Methyl isobutyl ketone is particularly suitable as the extractant.

Das oxydierte Steroid kann auch durch chromatographische Verfahren, gegebenenfalls in Kombination mit Extraktion, aus dem Gärmedium abgetrennt und gereinigt werden.The oxidized steroid can also be obtained by chromatographic methods, optionally in combination with extraction, separated from the fermentation medium and purified will.

Gemäß der Erfindung können die 16-Hydroxysteroide auch durch -Sporen der erwähnten Mikro= organismen entstehen, welche auf Lösungen oder Dispersionen der erwähnten Ausgangssteroide einwirken.According to the invention, the 16-hydroxysteroids can also be carried by spores of the mentioned micro-organisms arise, which on solutions or dispersions of the parent steroids mentioned.

Die Erfindung wird an Hand der nachfolgenden Beispiele näher erläutert.The invention is explained in more detail by means of the following examples.

Beispiel I Umwandlung von Retro-progesteron in 16a-Hydroxy-retroprogesteron Eine Nährlösung aus 15 g eingedicktem Maisquellwasser, 20 g Glucose und 5 g Caseinhydrolysat pro 1000 ml Leitungswasser wurde nach dem Einstellen auf pH 6,4 mittels 2 n-Natriumhydroxyd und Sterilisation bei 120°C 20 Minuten mit einer auf Hafermalzagar gewachsenen Kultur von Stagonospora curtisii in Anteilen von 250 ml in Schüttelkolben von 1000 ml geimpft. Diese Impfkulturen wurden 24 Stunden bei 27°C- auf einer rotierenden Schüttelmaschine (250 Umdr./Min) geschüttelt, worauf das entstandene Myceiium aus vier Schüttelkolben in einen rostfreien, stählernen- Gärbottich von 1001 mit Rührwerk und Belüftungsvorrichtung gebracht wurde, in dem das -nachfolgende, unter den vorerwähnten Verhältnissen sterilisierte Gärmedium sich befand: Maisquellwasser (berechnet auf den trockenen Stoff) . . . . . . . . . . ....... 200 g Glucose .......................... 200 g Glycerylmonostearat . . . . . . . . . . . . . . . 25 g Leitungswasser, . _ . . . . . . . . . bis zu 401 pH (Natriumhydroxydlösung) ...... 6,4 Diesem Fermentierüngsmediüm wurde unter asep= tischen Bedingungen 13,7 g Retro-progesteron, in 300 ml sterilen Wasser suspendiert, zugesetzt, worauf 48 Stunden bei 26'C (Umdrehungszahl 140 pro Minute unter Luftzufuhr--von 0,7 M3/m2 Bodenfläche prö Minute) fermentiert wurde.Example I Conversion of retro-progesterone into 16a-hydroxy-retroprogesterone ° C for 20 minutes with a culture of Stagonospora curtisii grown on oat malt agar in portions of 250 ml in shake flasks of 1000 ml. These inoculation cultures were shaken for 24 hours at 27 ° C. on a rotating shaker (250 rev / min), after which the resulting myceiium was brought from four shake flasks into a stainless, steel fermentation vat from 1001 with a stirrer and aeration device, in which the - The following fermentation medium, sterilized under the aforementioned conditions, was found: Corn steep water (calculated on the dry fabric). . . . . . . . . . ....... 200 g Glucose .......................... 200 g Glyceryl monostearate. . . . . . . . . . . . . . . 25 g Tap water, . _. . . . . . . . . up to 401 pH (sodium hydroxide solution) ...... 6.4 13.7 g of retro-progesterone, suspended in 300 ml of sterile water, were added to this fermentation medium under aseptic conditions, whereupon 48 hours at 26 ° C. (number of revolutions 140 per minute with air supply - of 0.7 M 3 / m 2 floor area was possible Minute) was fermented.

Die filtrierte Kultur (39,21) wurde dann dreimal mit 81 Methylisobutylketon extrahiert. Die Gesamtextrakte wurden auf 1000 ml eingedampft und dann mit Natriumhydroxydlauge und Wasser gewaschen und schließlich mit aktivierter Kohle behandelt. Der filtrierte Extrakt wurde dann im Vakuum auf 100 ml eingedampft, aus dem nach Abkühlung 12,3 g kristallines Produkt abgetrennt wurde. Das Kristallisat wurde aus 60 ml Methanol-Wasser (2: 1) umkristallisiert, und es wurden 12,05 g weißes, kristallines Endprodukt erhalten, das als 16a-Hydr oxy-retroprogesteron identifiziert werden konnte. Schmelzpunkt 173 bis 174,5°C; [a]ö = -92,3° (c = 1, Chloroform); s = 16 900. UV-Absorptionsspektrum in Methanol: 2max = 244 mp- .The filtered culture (39.21) was then extracted three times with 81% methyl isobutyl ketone. The total extracts were evaporated to 1000 ml and then washed with sodium hydroxide solution and water and finally treated with activated charcoal. The filtered extract was then evaporated to 100 ml in vacuo, from which, after cooling, 12.3 g of crystalline product was separated off. The crystallizate was recrystallized from 60 ml of methanol-water (2: 1), and 12.05 g of white, crystalline end product were obtained, which could be identified as 16a-hydroxy-retroprogesterone. Melting point 173 to 174.5 ° C; [a] δ = -92.3 ° (c = 1, chloroform); s = 16,900. UV absorption spectrum in methanol: 2max = 244 mp-.

Elementaranalyse: C 76,20, H 9,19 °/o; berechnet für C2,H"03: C 76,32, H 9,15 °/o.Elemental analysis: C 76.20, H 9.19 ° / o; for C2, H "03: C 76.32, H 9.15%.

Aus den Mutterlaugen wurden durch Eindampfen bis zur Trockne und Umkristallisieren noch 0,85 g reines Produkt erhalten.The mother liquors were evaporated to dryness and recrystallized 0.85 g of pure product was still obtained.

Beispiel II Umwandlung von 6-Dehydro-retroprogesteron in 16ac-Hydroxy-6-dehydro-retroprogesteron Eine nach Beispiel I erhaltene 24stündige Impfkultur von 2,5 1 wurde in einen Gärbottich von 4001 mit Rührer und Belüftungsvorrichtung gebracht, der 2501 Nährmedium enthielt, das aus einer sterilisierten Lösung von 3 kg eingedicktem Maisquellwasser (berechnet als Trockenstoff) und 2 kg Glucose in Leitungswasser bestand, dem 250 g Glycerylmonostearat zugesetzt waren. Unter Rühren (Umdrehungszahl 200 pro Minute) und Belüften (0,7 m3/m2 Bodenfläche pro Minute) wurden nach 12stündigem Züchten 120 g 6-Dehydro-retroprogesteron unter aseptischen Verhältnissen in sehr fein verteiltem Zustand eingeblasen, worauf die Gärung noch 36 Stunden fortgesetzt und dann beendet wurde. Das Kulturfiltrat wurde auf die im Beispiel I beschriebene Weise verarbeitet, worauf insgesamt 101,5 g kristallines Endprodukt erhalten wurde, das als 6-Dehydro-16a-Hydroxy-retroprogesteron identifiziert werden konnte. Das Produkt schmolz bei 202,5 bis 204°C.Example II Conversion of 6-dehydro-retroprogesterone to 16ac-hydroxy-6-dehydro-retroprogesterone A 24-hour inoculum of 2.5 l obtained according to Example I was placed in a fermentation vat brought from 4001 with stirrer and aeration device containing 2501 nutrient medium, that from a sterilized Solution of 3 kg of concentrated corn steep water (calculated as dry matter) and 2 kg of glucose in tap water, the 250 g of glyceryl monostearate were added. While stirring (speed of rotation 200 per minute) and aeration (0.7 m3 / m2 floor area per minute) were made after 12 hours of cultivation 120 g of 6-dehydro-retroprogesterone under aseptic conditions in very finely divided form State blown, whereupon fermentation continued for 36 hours and then ended became. The culture filtrate was processed in the manner described in Example I, whereupon a total of 101.5 g of crystalline end product was obtained, which as 6-dehydro-16a-hydroxy-retroprogesterone could be identified. The product melted at 202.5-204 ° C.

[x] ö = -520° (c = 1, Chloroform). UV-Absorptionsspektrum in Methanol: Amax 286 mp.; E = 26 600.[x] δ = -520 ° (c = 1, chloroform). UV absorption spectrum in methanol: Amax 286 mp .; E = 26,600.

Elementaranalyse: C 77,15, H 8,400/0; berechnet für C"H2803: C 76,79, H 8,59 0/0. Beispiel III Umwandlung von Retrotestosteron in 16:x-Hydroxy-retrotestosteron 10- bis 24stündigen Schüttelkulturen von Stagonospora curtisii von je 1000 ml (Nährmedium: eingedicktes Maisquellwasser 10/0 [berechnet auf den trockenen Stoff], Glucose 10/0, Hefeextrakt 0,10/0, Primärammoniumphosphat 0,10/0) wurden pro Kultur 200 mg Retrotestosteron in 15 ml Aceton zugesetzt. Nach 28stündiger Inkubation (Umdrehungszahl 250 pro Minute) bei 26°C wurde das Gemisch der Kulturen durch Filtrieren von dem Mycelium befreit und dann viermal mit 1,51 Methylisobutylketon extrahiert. Der Extrakt wurde im Vakuum auf 350 ml konzentriert, dann mit 4 n-Natriumhydroxyd in Wasser gewaschen und mit aktivierter Kohle behandelt. Dieser so behandelte Extrakt wurde im Vakuum auf 60 ml eingedampft. Es trennten sich dabei 1,65 g kristallines Produkt ab. Die Mutterlauge wurde dann zur Trockne eingedampft und der Rückstand wurde aus einem Gemisch von 4 ml Aceton und 6 ml Heptan nach Behandlung mit aktivierter Kohle umkristallisiert. Es wurden noch 0,27 mg Kristallisat erhalten. Das Gesamtprodukt wurde darauf aus 35 ml Methanol-Wasser (2: 1) umkristallisiert, wobei 1,84 g Produkt erhalten wurden, das als 16a-Hydroxy-retrotestosteron identifiziert werden konnte. Schmelzpunkt 210 bis 212°C.Elemental analysis: C 77.15, H 8.400 / 0; calculated for C "H2803: C 76.79, H 8.59 0/0. Example III Conversion of retrotestosterone to 16: x-hydroxy-retrotestosterone 10- to 24-hour shaking cultures of Stagonospora curtisii of 1000 ml each (nutrient medium: thickened corn steep water 10/0 [calculated on the dry matter], glucose 10/0, Yeast extract 0.10 / 0, primary ammonium phosphate 0.10 / 0) were 200 mg retrotestosterone per culture added in 15 ml of acetone. After 28 hours of incubation (number of revolutions 250 per minute) at 26 ° C, the mixture of cultures was freed from the mycelium by filtration and then extracted four times with 1.51 methyl isobutyl ketone. The extract was in vacuo concentrated to 350 ml, then washed with 4N sodium hydroxide in water and washed with activated carbon treated. This extract treated in this way was reduced to 60 in vacuo ml evaporated. 1.65 g of crystalline product separated off. The mother liquor was then evaporated to dryness and the residue was made from a mixture of 4 ml of acetone and 6 ml of heptane recrystallized after treatment with activated charcoal. 0.27 mg of crystals were still obtained. The overall product was based on it 35 ml of methanol-water (2: 1) recrystallized, whereby 1.84 g of product were obtained, which could be identified as 16a-hydroxy-retrotestosterone. Melting point 210 up to 212 ° C.

[4]ö = -167° (c = 1, Chloroform). UV-Absorptionsspektrum in Methanol: Amax 242 m#L; E = 16 600.[4] δ = -167 ° (c = 1, chloroform). UV absorption spectrum in methanol: Amax 242 m # L; E = 16,600.

Elementaranalyse: C 74,84, H 9,210/0; berechnet für Ci0H2303: C 74,96, H 9,27°/0.Elemental analysis: C 74.84, H 9.210 / 0; calculated for Ci0H2303: C 74.96, H 9.27 ° / 0.

Claims

Claims: 1. Process for the production of 16x-hydroxysteroids, characterized in that a 3-keto-4 4-, 3-keto-d 4 # s- or a 3-hydroxy-A 5-steroid of the androstane or pregnane series, which has two hydrogen atoms in the 16 position and belongs to the 10a-methyl-9ß-, 10x-methyl, 9x- or 10ß-methyl-9x series or their derivatives functionally derived from the 3-position oxygen function according to the usual for the microbiologically controlled oxygenation of 16-deoxysteroids Methods using enzyme systems or spores from family microorganisms the Sphärioidaceae incubated.

2. The method according to claim 1, characterized in that that the microorganism is a fungus of the Stagonospora species, in particular Stagonospora curtisii, is used.