MXPA02007003A - Metodo para la ansiedad. - Google Patents

Abstract

La 6-hidroxi-8- [4-[4-(2-pirimidinil) -piperazinil] -butil]-8 -azaspiro[4.5] -7,9-diona y sus sales e hidratos farmaceuticamente aceptables, son utiles en el alivio de la ansiedad.

Description

MÉTODO PARA LA ANSIEDAD CAMPO DE LA INVENCION La presente invención involucra un proceso mejorado para el alivio de la ansiedad mediante el tratamiento con una cantidad ansioliticamente efectiva de 6-hidroxi-8- [4- [4- (2-pirimidinil) -piperazinil] -butil] -8-azaspiro [4.5]-7, 9-diona. Este compuesto fue por primera vez descrito por Jajoo, et al. , Drug Metab. and Disposition/ 17/6 pp. 634-640, 1989, como uno de varios metabolitos del fármaco ansiolitico, clínicamente útil, la buspirona. La confirmación de la estructura de este metabolito se consiguió mediante la comparación con una muestra auténtica del compuesto preparado sintéticamente. Este compuesto metabolito ha sido designado BMY 28674, y también es conocido como BMY 28674.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION El fármaco original, la buspirona, tiene la siguiente estructura química.

La buspirona, químicamente : 8- [4- [4- (2-pirimidinil) 1-piperazinil ] butil-8-azaspiro ( 4 , 5 ) -decan-7 , 9-diona, es un REF 139765 compuesto farmacéuticamente activo, el cual, según se ha encontrado, es efectivo para el tratamiento de trastornos de ansiedad y de la depresión. Es aceptado que la buspirona ejerce sus efectos a través del receptor de la serotonina 1A(5-HT1A) . Sin embargo, la buspirona muestra un metabolismo de primer paso muy elevado, y en general, únicamente aproximadamente el 4% de una dosis terapéutica de buspirona llega a la circulación sistémica, en forma no metabolizada, después de la administración oral (Mayol, et al . , Clin. Pharmacol. Ther., 37, p. 210, 1985) . También se han observado grandes diferencias en la absorción de la buspirona, entra individuos. Esto ha sido demostrado por las variaciones de la concentración plasmática máxima del fármaco, en individuos, por diferencias de hasta 10 veces (Gammans, et al . , American J. Med., 80, Suppl. 3B, pp. 41-51, 1986). La síntesis de la buspirona y análogos relacionados, y la descripción de sus propiedades psicotrópicas son descritas por Wu, et al . , en la patente de los Estados Unidos 3,717,634. El uso del clorhidrato de buspirona, como un agente novedoso contra la ansiedad, para el tratamiento de pacientes neuróticos, es descrito por Casten, et al . , en la patente de los Estados Unidos 4,182,763. Previamente se analizaron las propiedades contra la ansiedad del BMY 28674, usando métodos de laboratorio desarrollados específicamente para la medición de las propiedades contra la ansiedad, en compuestos de azapirona, tales como la buspirona, gepirona y análogos estructurales. En este análisis nunca se detectó actividad significativa alguna contra la ansiedad, para el BMY 28674. Para este compuesto nunca se ha descrito actividad biológica alguna significativa de cualquier tipo. En efecto, con la excepción de la 1-pirimidinilpiperazina (1-PP) , no se ha descrito actividad significativa alguna contra la ansiedad, para alguno de los metabolismos de buspirona conocidos. Ver: Gammans, et al., JAMA, (Marzo de 1986), Vol., 80, Supp. 3B, pp. 43-44. Como una consecuencia, se ha ' creido que la dosificación oral de buspirona para el tratamiento de la ansiedad, se optimiza cuando se realiza en una manera tal que maximice la concentración del fármaco sin cambios, a expensas de los metabolitos. En la patente de los Estados Unidos No. 5,431,922 se describió una formulación de liberación prolongada, de buspirona para proporcionar una mejora en la administración oral del fármaco, en base a que los niveles sanguíneos de la buspirona sin cambios se incrementaron, mientras que los niveles del metabolito se redujeron, cuando se midió la relación de los niveles plasmáticos de buspirona respecto al metabolito 1-PP. Sin embargo nunca se describieron datos de eficacia para estas formulaciones y tampoco se comercializaron.

La patente de los Estados Unidos No. 5,633,009 describió y reivindicó un parche transdérmico para suministrar buspirona. El suministro transdérmico, como se esperó, dio confiablemente mayores niveles sanguíneos de buspirona (área bajo la curva (abe) ) con niveles del metabolito mucho más reducidos, al medirlos por el 1-PP. Se diseñó un parche típico para suministrar 60 mg de buspirona por un período de 24 horas. De manera sorprendente, estudios clínicos realizados con este parche demostraron un efecto ansiolítico que no pudo distinguirse del placebo. Más recientemente, un método mejorado para la administración oral de buspirona fue reivindicado en la patente de los Estados Unidos No. 6,008,222 en donde se incrementa la biodisponibilidad de la buspirona sin cambios, y se reduce la formación del metabolito. El método descrito involucraba la administración conjunta de buspirona, con el fármaco nefazodona, un inhibidor del citocromo P4503A4 (CYP3A4). En base a la evaluación de datos clínicos preliminares, no se ha planeado un desarrollo ulterior de esta formulación farmacéutica de combinación de fármacos. En resumen, aunque se ha descubierto que el BMY 28674 es uno de varios metabolitos humanos que resultan de la administración oral del fármaco ansiplítico, la buspirona, no se ha asociado previamente actividad biológica útil, con el compuesto mismo, antes de la presente invención. En particular, en análisis previos no se detectó actividad ansiolítica. Se han realizado recomendaciones de dosificación para la buspirona, de acuerdo con la expectativa de que la inhibición del metabolismo de la buspirona generaría una respuesta en contra de la ansiedad, más robusta. La observación clínica de que cierto porcentaje de pacientes con ansiedad no obtienen alivio con la administración de buspirona, ha sido atribuida a los niveles insuficientes del fármaco original, que se consiguen en estos respondedores. Una segunda observación clínica respecto a un período de demora de siete a diez días, antes de la observación de un efecto ansiolítico, ha sido atribuido a la necesidad de un cambio en la dinámica del sitio del receptor, como un resultado de la administración crónica de buspirona. El descubrimiento inesperado de los efectos ansiolíticos del BMY 28674, sugiere otras explicaciones para estas observaciones .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Figura 1. Efecto del BMY 28674 en la vocalización ultrasónica inducida por aislamiento y en la actividad locomotora, en la cría de rata. Figura 2. Efecto de la buspirona en la vocalización ultrasónica inducida por aislamiento y en la actividad locomotora, en la cría de rata.

Figura 3. Concentraciones de buspirona a nivel sanguíneo humano, seguido de la dosificación oral de buspirona en sujetos humanos. Figura 4. Concentraciones de 1-PP a nivel sanguíneo humano, seguido de la dosificación oral de buspirona en sujetos humanos. Figura 5. Concentraciones de BMY 28674 a nivel sanguíneo humano, seguido de la dosificación oral de buspirona en sujetos humanos. Figura 6. Estudio del metabolismo In Vi tro : Metabolismo Microsómico en Hígado Humano' (HLM) de la buspirona, para producir BMY 28674.

BREVE DESCRIPCIÓN Y DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCION Se ha descubierto en la presente, que la 6-hidroxi-8- [4- [4- (2-pirimidinil) -piperazinil] -butíl] -8-azaspiro [4.5]-7,9-diona (I) es útil como un agente para tratar la ansiedad y en la presente se hace referencia al mismo como BMY 28674. El compuesto tiene la siguiente fórmula estructural: y se cree que es el metabolito activo de la buspirona.

Como un resultado del análisis previo con instalaciones y recursos propios, del agente ansiolítico clínicamente útil, la buspirona y varios de sus metabolitos reales y putativos, la visión prevaleciente ha sido que la acción ansiolítica era proporcionada principalmente por la buspirona misma con una pequeña, si la hay, contribución hecha por los metabolitos de la buspirona. Por ejemplo, la administración sistémica (intravenosa e intragástrica) de ciertos metabolitos putativos, a ratas, dio por resultado una poca o ninguna inhibición del disparo de impulsos neuronales en el rafe dorsal. En contraste, la buspiro'na misma inhibe potencialmente el disparo de impulsos en las neuronas del rafe dorsal. Ver: VanderMaelen, et al . , Eur. J. Pharmacol., 129, pp. 123-130, 1986. Aunque un metabolito, el fragmento estructural 1- (2-pirimidinil) piperazina, también conocido como 1-PP, IMO 1-PP exhibió una inhibición débil del disparo de impulsos en el rafe dorsal, a la vez que produjo cierta actividad en contra de la ansiedad en ciertos otros análisis preclínicos (Ver: Patente de los Estados Unidos 4,409,223), también exhibió propiedades ansiogénicas en otros paradigmas de análisis de comportamiento. Ver: Cervo, et al., Life Sciences, 43, pp. 2095-2102, 1988; Martin, Psychopharmacology, 104, pp. 275-278, 1991. Es probable que el efecto biológico del 1-PP sea mediado a través de un mecanismo alfa 2 adrenérgico ya que el 1-PP no demuestra enlazamiento al receptor 5-HT1A. Actualmente, el efecto clínico del 1-PP no está claro. Con la aceptación general de que el agente ansiolítico activo es la buspirona misma, comúnmente se proporcionan instrucciones de dosificación de acuerdo con la obtención máxima de niveles sanguíneos de buspirona sin cambios, en pacientes con ansiedad. En pacientes en donde se inhibe el metabolismo de la buspirona, ya sea debido a los niveles de actividad enzimática, hepática, en el paciente, o debido a la ingestión de sustancias que tengan efectos inhibitorios en el metabolismo hepático, particularmente el CYP3A4; se recomienda a los pacientes reducir la cantidad de buspirona tomada. Es interesante que no se ha establecido una correlación específica de los efectos adversos relacionada con mayores niveles sanguíneos de buspirona. Con el descubrimiento del metabolito activo de la presente, la dirección de esas instrucciones de dosificación deberían cambiarse a condiciones que favorezcan la producción enzimática de BMY 28674. En efecto, la dosis de buspirona debería incrementarse, no reducirse, en pacientes caracterizados por un metabolismo inhibido de la buspirona.

Otra hipótesis ampliamente aceptada se refiere a que la buspirona no proporciona alivio de la ansiedad en cierto porcentaje de pacientes. Esta falta de efecto ha sido atribuida al hecho de que en los no respondedores se consiguen niveles sanguíneos insuficientes de buspirona sin cambios, aunque los niveles sanguíneos de buspirona sean muy bajos en todos los pacientes. Se carece de la confirmación científica de esta explicación de la falla del tratamiento. Una explicación alternativa surge a la luz del descubrimiento del metabolito activo BMY 28674 y su efecto ansiolítico. Una explicación más probable para la falla del' tratamiento en ciertos pacientes, concierne a la relación de la eficacia ansiolítica respecto a los niveles sanguíneos de BMY 28674. Los no respondedores son vistos como aquellos pacientes cuya conversión metabólica de buspirona a BMY 28674 es insuficiente para conseguir niveles eficaces de BMY 28674. Con relación a esta explicación se encuentra la observación de una amplia variabilidad de los niveles sanguíneos de la buspirona, observados en el mismo paciente y entra pacientes, después de la administración oral. Esta variabilidad puede ser un resultado de variaciones conocidas que ocurren en los niveles de actividad del metabolismo hepático humano durante el transcurso de la vida diaria. Sin embargo, dado que los niveles sanguíneos de buspirona misma son muy bajos, las diferencias en los niveles sanguíneos de buspirona son generalmente pequeñas en comparación con las diferencias en los niveles sanguíneos observados para los metabolitos más abundantes . De manera similar, la demora de tiempo observada para el inicio de la acción ansiolítica después del inicio del tratamiento con buspirona, puede involucrar el tiempo requerido para la acumulación del metabolito así como para la re-regulación de la dinámica del sitio del receptor. En general, la dependencia de la acción ansiolítica en la aparición del metabolito BMY 28674 se correlaciona bien con las observaciones clínicas realizadas con' respecto a la administración oral de buspirona a pacientes con ansiedad. En base a los razonamientos aceptados de que la buspirona intacta proporcionaba la actividad útil contra la ansiedad, observada clínicamente, se desarrolló un sistema de suministro a base de parche transdérmico, para la buspirona (ver la patente de los Estados Unidos 5,633,009). Se predijo que un parche transdérmico de buspirona era un tratamiento superior para la ansiedad dado que el suministro transdérmico del fármaco dio por resultado un metabolismo minimizado de la buspirona, proporcionando por lo tanto cantidades significativamente mayores del fármaco original, con niveles de metabolitos mucho más reducidos. De manera sorprendente, clínicamente se observó poca o ninguna actividad ansiolítica con el uso del parche transdérmico de buspirona. Este resultado inesperado ha conducido a la reevaluación de los metabolitos de la buspirona y al descubrimiento de la potente acción en contra de la ansiedad del BMY 28674. El siguiente esquema de reacción metabólico (Esquema de Reacción 1) para la buspirona se tomó de Jajoo, et al., Xenobiotica, 1990, Vol. 20, No. 8, pp. 779-786, "Metabolismo In vitro del fármaco contra la ansiedad, buspirona, como un predictor de su metabolismo in vivo".

Esquema de Reacción 1 Esquema de Reacción para el metabolismo de lá buspirona por los microsomas y hepatocitos del hígado de rata El nuevo trabajo inició con la evaluación del enlazamiento relevante al receptor, de los metabolitos de buspirona. Por consiguiente, la actividad in vi tro de la buspirona (Bu; MJ 9022) y sus metabolitos 1-PP (BMY 13653), 3'-OH-buspirona (BMY 14295), 5-OH-buspirona (BMY 14131) y 6'-OH-buspirona (BMY 28674) , se evaluaron respecto a la actividad en el receptor 5-HT1A humano. Los resultados de esos experimentos se encuentran en la Tabla 1. Tabla 1 Como puede observarse, la Tabla 1 resume la nueva acción in vi tro del MJ 9022 (buspirona) y sus metabolitos BMY 13653 (1-PP), BMY 14131 (5-OH-buspirona) , BMY 14295 (3-OH-buspirona) y BMY 28674 (6-OH-buspirona) en el receptor de la serotonina ÍA humana (5-HT1A) . La buspirona presenta una gran afinidad por el receptor de la 5-HT1A humano (Ki = 15 nM) . El BMY 28674 tiene una afinidad de enlazamiento que se aproxima a la de la buspirona ( K± = 57 nM) . Los otros metabolitos analizados tienen una afinidad relativamente débil por el receptor 5-HT1A humano comparado con la buspirona.

El BMY 28674 parece ser el metabolito activo de la buspirona. No únicamente es el segundo metabolito más abundante obtenido en estudios del metabolismo a partir de orina humana (en donde el 5-hidroxi-lPP es el más abundante) ; 5-hidroxi-1-PP sino que, de manera importante, los niveles sanguíneos humanos del BMY 28674 son aproximadamente 40 veces mayores que los de la buspirona y varias veces mayores que los del 1-PP. También es significativo el hecho de que la estructura esquelética de la buspirona permanece intacta en el BMY 28674. Además, los datos de enlazamiento en el receptor 5-HT1A indican que el BMY 28674 tiene una afinidad de enlazamiento más cercana a la de la buspirona, en contraste con los otros metabolitos, lo cual demuestra únicamente una interacción más débil en el sitio del 5-HT1A. El receptor 5-HT1A es aceptado comúnmente como el receptor serotonérgico involucrado íntimamente en la regulación de la ansiedad. El enfoque de la presente investigación ha sido en los metabolitos de buspirona que mantienen la estructura del esqueleto de buspirona y que no tienen más de un grupo hidroxi hidrofílico incorporado en la molécula. Es probable que la presencia de más de un grupo hidroxi hidrofílico reduzca la distribución y transporte de esos productos metabólicos polihidroxilados en las regiones del Sistema Nervioso Central del cuerpo, por lo tanto haciendo que las interacciones necesarias de los receptores probablemente no ocurran en las regiones objetivo. Los primeros análisis funcionales, con instalaciones y recursos propios, del BMY 28674, utilizaron un método de análisis in vivo en base a la modificación del análisis de Conflicto de Vogel, un simple procedimiento de conflicto, confiable, para analizar agentes en contra de la ansiedad (ver: Vogel, et al., Psychopharmacologia, (Berl.) 21, pp. 1-7, 1971). Sin embargo, el BMY 28674 'no produjo una respuesta contra la ansiedad, en el análisis de Vogel. Previamente no se ha atribuido al BMY 28674 actividad útil contra la ansiedad. Las vocalizaciones ultrasónicas emitidas por crías de ratas, después del aislamiento de su madre y de sus compañeros de carnada, y sometidos a una variedad de estímulos ambientales (por ejemplo, temperatura fría) ha probado ser un método sensible para la evaluación de compuestos ansiolíticos y ansiogénicos potenciales (Winslo and Insel, 1991, Pychopharmacology, 105:513-520). Los compuestos psicoactivos que se supone que son ansiolíticos, suprimen la frecuencia de las llamadas ultrasónicas, mientras que las llamadas se incrementan con fármacos que tengan propiedades ansiogénicas. De manera más importante, el paradigma de la vocalización ultrasónica inducida por el aislamiento, parece ser el más sensible para detectar propiedades ansiolíticas a través de un amplio espectro de clases de fármacos, tales como las benzodiazepinas, los inhibidores de la recaptación del 5-HT, los agonistas del 5-HT1A así como los antagonistas NMDA. En la presente investigación, el metabolito 6-hidroxilado de la buspirona, BMY 28674, que tiene afinidad por el receptor 5-HT1A humano K = 57 nM) se evaluó respecto a su actividad ansiolítica potencial usando crías de rata de 9 a 11 días de edad que habían sido separadas de su madre y compañeros y puestos en una placa fría (18-20°C) ' para producir vocalizaciones ultrasónicas inducidas por la aflicción. Ver la Figura 1. La Figura 2 muestra los resultados obtenidos por la buspirona en este método de análisis. La administración de BMY 28674 (0.03-1 mg/kg, subcutáneamente; Figura 1) 30 minutos antes del análisis, produjo una eliminación dependiente de la dosis, de la vocalización ultrasónica de las crías de rata sobre la placa fría [F(4,45) = 19.27, p = 0.0001]. La dosis de BMY 28674 predicha para reducir el número de llamadas en un 50% (ID50) fue de 0.13 mg/kg. La actividad locomotora se deterioró significativamente seguido de la administración de BMY 28674 [F(4,45) = 5.85, p = 0.007]. Sin embargo, la dosis ID50 (0.41 mg/kg) de BMY 28674 estimada para reducir la actividad locomotora fue de aproximadamente 3 veces mayor que la dosis ID5o (0.13 mg/kg observada para eliminar las llamadas ultrasónicas, sugiriendo que, al igual que la buspirona, las propiedades ansiolíticas del BMY 28674 ocurren a menores dosis . La administración de buspirona (0.03-1 mg/kg, subcutáneamente; Figura 2) 30 minutos antes del análisis, produjo una eliminación dependiente de la dosis de la vocalización ultrasónica de las crías de rata sobre la placa fría [F(4,42) = 15.44, p = 0.0001]. La dosis de buspirona predicha para reducir el número de llamadas en un 50% (ID50) fue de 0.10 mg/kg. La actividad locomotora' se vio también deteriorada [F(4,42) = 4.343, p = 0.005] aproximadamente a dosis 5 veces mayores que aquellas que eliminan las llamadas ultrasónicas . Los presentes resultados demuestran que, al igual que la buspirona, el metabolito BMY 28674 produce una actividad similar a la ansiolítica en el modelo de ansiedad con vocalización ultrasónica inducida por el aislamiento de crías de rata. La actividad ansiolítica asociada con el BMY 28674 (y la buspirona) ocurrió a dosis mucho menores que las requeridas para eliminar la actividad motora. En resumen, los análisis in vi tro e in vivo, precedentes, demuestran resultados del análisis en contra de la ansiedad, positivos, tanto para la buspirona como para el BMY 28674; sin embargo, las concentraciones a nivel sanguíneo de buspirona son pequeñísimas seguidas a la administración oral a sujetos humanos. Antes del presente trabajo no existía información concerniente a las concentraciones a nivel sanguíneo, clínicas, de BMY 28674. Se han realizado estudios farmacocinéticos en humanos y han producido resultados sorprendentes que respaldan además el papel del BMY 28674 como el metabolito ansiolítico activo. Se administró buspirona, oralmente, durante 25 días, a sujetos humanos (n = 13) con dosis diarias totales que variaban de 10 mg a 60 mg. El esquema de dosificación se dividió en cinco intervalos de dosificación de 5 días, incrementando la dosificación BID en cada intervalo. Se realizaron mediciones farmacocinéticos en el día 5 de cada intervalo y estos datos se usaron para evaluar la farmacocinética de la buspirona, del 1-PP, y del BMY 28674. El esquema de dosificación en humanos se presenta a continuación .

Se encontró que estas dosis múltiples de buspirona oral a los niveles de 5 dosis eran seguras y en general bien toleradas por los adultos saludables que participaron en el estudio de 25 días. Las Figuras 3, 4 y 5 muestran concentraciones promedio del nivel sanguíneo, de buspirona, 1-PP y BMY 28674, respectivamente, a través de un período de dosificación de 12 horas en el último día de cada intervalo de dosificación. Los niveles de buspirona (Figura 3) son en general muy bajos (de aproximadamente 1-2 ng/mL a las dosis mayores) y descienden hasta niveles de menos de 1 ng/mL dos horas después de la dosis. En contraste, los niveles de 1-PP (Figura 4) y los niveles de BMY 28674 (Figura 5) son mucho mayores y son sostenidos en comparación a los de buspirona. El BMY 28674 tiene concentraciones varias veces mayores que el 1-PP y concentraciones de aproximadamente 30 a 40 veces mayores que la buspirona. Hasta ahora, los estudios indican que después de la administración oral de buspirona, existen niveles sanguíneos del metabolito, el BMY 28674, que son significativos comparados con los niveles sanguíneos despreciables de buspirona que se observan. Aunque se ha demostrado que la buspirona misma tiene propiedades ansiolíticas, en modelos de análisis tales como el modelo VUS en cría de rata descrito en la presente, las bajas concentraciones a nivel sanguíneo, observadas en humanos, conducen a la conclusión de que es el abundante metabolito BMY 28674 el que media el efecto contra la ansiedad observado clínicamente. Antes de esta presente evaluación de los metabolitos de la buspirona, la relativa abundancia del BMY 28674 en humanos después de la administración oral de buspirona, no era conocida. Aunque es evidente que el BMY 28674 puede como tal administrarse para conseguir un efecto ansiolítico, la administración oral de sus precursor, la buspirona, realizada bajo condiciones apropiadas, puede ofrecer también un método mejorado para introducir el BMY 28674 al' sistema de un paciente con ansiedad. Para obtener una mejor definición de estas condiciones, se realizaron experimentos del metabolismo in vi tro para estudiar el metabolismo Microsómico del Higado Humano (HLM), de la buspirona. Se seleccionaron preparaciones de HLM de múltiples donadores, seleccionadas en base a sus actividades enzimáticas del CYP3A4. Las preparaciones HLM se compraron a Gentest Corporation (Woburn, MA: Números de catálogo H023, H056, H070, H093 y H112) , quienes caracterizaron las preparaciones HLM utilizando procedimientos estándares. Además de la medición de la pérdida del compuesto original en las incubaciones, también se midieron los niveles del metabolito BMY 28674. El primer conjunto de experimentos midió la correlación observada en la Figura 6 entre la actividad específica del CYP3A4 en preparaciones HLM y el metabolismo de la buspirona y la producción del metabolito. Una sola concentración de buspirona-C14 (10 µM) se incubó con cinco preparaciones HLM de hígados de cinco donadores. Las incubaciones se realizaron por 15 minutos con 0.5 mg/ml de proteína microsómica y se utilizaron como un sistema generador NADPH. Los niveles de buspirona-C14 y BMY 28674, en las muestras de incubación, fueron determinados mediante HPLC de fase inversa, utilizando detección de radiactividad en línea y por comparación con estándares auténticos. Se obtuvo la recuperación cuantitativa de C14. La 'relación de la concentración de BMY 28674 respecto a buspirona, contra la actividad especifica del CYP3A4 medida en preparaciones HLM de hígados de cinco donadores, se presenta en la Figura 6 (media de dos determinaciones separadas) . Estos resultados muestran que la relación de BMY 28674 a buspirona, se incrementa a medida que se incrementa la actividad específica del CYP3A4 en HLM. El cambio en la relación a medida que se incrementa la actividad del CYP3A4, se observa tanto como un incremento en los niveles de BMY 28674 como por una disminución en las concentraciones de buspirona (no se muestran los resultados) . Se realizó un segundo conjunto de incubaciones para determinar el potencial de un inhibidor del CYP3A4 para alterar la relación de BMY 28674 a buspirona en incubaciones de HLM.

Una sola concentración de buspirona-C14 (10 µM) se incubó con HLM de fondo (reunida a través de la combinación de volúmenes iguales de los hígados de cinco donadores, descrito anteriormente) . A las incubaciones se adicionó, a diferentes concentraciones, ketoconazol, un inhibidor del CYP3A4 bien caracterizado. Todas las otras condiciones de incubación, así como el análisis de las muestras, fueron como se describieron anteriormente. En la ausencia de ketoconazol, después de la incubación de buspirona por 15 minutos, con el HLM recolectado, la proporción de BMY 28674 respecto a la buspirona, fue de 0.42 (Tabla 2). No se observó efecto alguno 'en el metabolismo de la buspirona, a concentraciones de ketoconazol de hasta 0.125 µM. A razones de ketoconazol de 0.25 µM, la proporción de 6' -hidroxi-buspirona respecto a la buspirona, se redujo hasta 0.32. A las mayores concentraciones de ketoconazol, de 1.25 µM y 2.5 µM, la proporción de BMY 28674 respecto a la buspirona se redujo adicionalmente hasta 0.06 y 0.01, respectivamente. Estos resultados muestran que cuando el ketoconazol se incuba conjuntamente con la buspirona, en HLM recolectado, la proporción de BMY 28674 respecto a buspirona, disminuye a medida que la concentración del inhibidor del CYP3A4, el ketoconazol, se incrementa. El cambio en la proporción cuando se incrementa la concentración de ketoconazol, se observa tanto por una reducción en los niveles de BMY 28674 como un incremento en las concentraciones de buspirona sin cambios.

Tabla 2 Inhibición del Metabolismo de la Buspirona por el Ketoconazol En resumen, estos experimentos in vi tro muestran la dependencia tanto del metabolismo de la buspirona como de la aparición del metabolito BMY 28674 en la actividad del CYP3A4 en el hígado humano. Un objeto de esta invención es proporcionar un método mejorado para producir una respuesta ansiolítica en pacientes con ansiedad. Este objeto se consigue proporcionando niveles sanguíneos, efectivos contra la ansiedad, de BMY 28 74 en pacientes con ansiedad. El medio más evidente para conseguir esto sería a través de la administración sistémica del BMY 28674 como tal, al paciente. Por lo tanto, un aspecto de la presente invención concierne al proceso para mejorar un estado de ansiedad en un mamífero que necesite de ese tratamiento, a través de la administración sistémica de una dosis de BMY 2867L4, efectiva contra la ansiedad.

Una dosis efectiva deberá, en general, proporcionar concentraciones mínimas a nivel sanguíneo (CMIN) de BMY 28674, que sean al menos de 1 a 2 ng/mL. Generalmente, el punto de medición para los niveles CMIN es a las 12 horas después de la dosis; es decir, justo antes de la próxima dosis BID. El BMY 28674 se puede administrar a través de una variedad de rutas que incluyen, aunque no se limitan a, la oral, sublingual, bucal, transnasal o parenteral, por ejemplo intramuscular, intravenosa, subcutánea, etc. Terapéuticamente, el BMY 28674 puede proporcionarse por una de estas rutas, como una formulación 'compuesta de una cantidad de BMY 28674 efectiva contra la ansiedad o una de sus sales de adición de ácido o un hidrato, farmacéuticamente aceptables, en un portador farmacéuticamente aceptable. Se prefieren las composiciones farmacéuticas que proporcionan desde aproximadamente 5 a 50 mg del ingrediente activo por dosis unitarias y se pueden preparar convencionalmente como soluciones acuosas y como suspensiones acuosas o aceitosas. El BMY 28674 puede darse también oralmente cuando se compone en una formulación para dosificación oral, tal como una tableta, pildora, cápsula, jarabe, elíxir, solución acuosa o suspensión. Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables, del BMY 28674, se consideran también útiles como agentes ansiolíticos. Por definición, estas son aquellas sales en las que el anión no contribuye significativamente a la toxicidad o actividad farmacológica de la forma básica del BMY 28674. Las sales de adición de ácido se obtienen, ya sea por reacción del BMY 28674 con un ácido orgánico o inorgánico, preferentemente por contacto en solución, o a través de cualesquiera de los métodos estándares detallados en la literatura y disponibles para cualquier experimentado en la técnica. Ejemplos de ácidos orgánicos útiles son los ácidos carboxílicos tales como el ácido maleico, ácido acético, ácido tartárico, ácido propiónico, 'ácido fumárico, ácido isetiónico, ácido succínico, ácido pamoico y similares; los ácidos inorgánicos útiles son los ácidos hidrácidos tales como el HCl, HBr, Hl; ácido sulfúrico, ácido fosfórico, y similares. Las composiciones orales preferidas se encuentran en la forma de tabletas o cápsulas y además del BMY 28674 puede contener excipientes convencionales tales como agentes aglutinantes (por ejemplo, jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto, o polivinilpirrolidona) , materiales de relleno (por ejemplo, lactosa, azúcar, almidón de maiz, fosfato calcico, sorbitol o glicina) , lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco, polietilenglicol o sílice), desintegrantes (por ejemplo, almidón) y agentes humectantes (por ejemplo, lauriisulfato de sodio) . Las soluciones o suspensiones de BMY 28674 con los vehículos farmacéuticos convencionales, se emplean para composiciones parenterales tales como una solución acuosa para inyección intravenosa o una suspensión aceitosa para inyección intramuscular. Esas composiciones que tienen la claridad, estabilidad y adaptabilidad deseadas para el uso parenteral, se obtienen disolviendo de 0.1% a 10% en peso del ingrediente activo (BMY 28674 o una sal de adición de ácido o hidrato, farmacéuticamente aceptable, del mismo) en agua o un vehículo que consista de un alcohol alifático polihídrico tal como la glicerina, propilenglicol y polietilenglicol'es o mezclas de los mismos. Los polietilenglicoles consisten de una mezcla de polietilenglicoles, normalmente líquidos, no volátiles, que son solubles tanto en agua como en líquidos orgánicos y que tienen pesos moleculares desde aproximadamente 200 hasta 1500. El BMY 28674 se puede sintetizar mediante métodos fácilmente disponibles en la literatura química y conocidos por los experimentados en la química de síntesis orgánica. Un método de preparación utiliza la buspirona como un material de partida y el proceso se muestra en el Esquema de Reacción 2.

Esquema de Reacción 2 Preparación del BMY 28674 Pl) Este método de preparación se proporciona como un ejemplo auxiliar e ilustra una síntesis conveniente del BMY 28674. Deberá apreciarse también que el BMY 28674 se puede obtener mediante la conversión enzimática (por los microsomas del hígado de humano o rata) de la buspirona, in vi tro. (Ver: Jajoo, et al., Xenobiotica, 1990, Vol. 20, No. 8, pp. 779- 786) . La administración sistémica puede también conseguirse a través de un segundo método para conseguir niveles sanguíneos efectivos contra la ansiedad, de BMY 28674, el cual consiste en administrar oralmente una forma precursora del BMY 28674. Esas formas de profármaco se administrarían en cantidades de dosificación que produzcan efectos ansiolíticos efectivos sin causar efectos secundarios dañinos o adversos. Es decir, la administración sistémica del BMY 28674 puede conseguirse mediante la administración oral de un precursor o forma de profármaco del BMY 28674, por ejemplo la buspirona, a mamíferos. Sin embargo, este método de introducción sistémica del BMY 28674 es mejor y difiere del método estándar conocido de administración oral de la buspirona. El profármaco de buspirona se utiliza en un método mejorado para efectuar la ansiólisis en la presente invención. De esta manera, otro aspecto de esta invención está enfocado a aliviar la ansiedad en un mamífero, a través de un método mejorado de administración oral de buspirona. La mejora involucra la administración oral de buspirona en una manera tal que la producción metabólica del BMY 28674 sea favorecida, proporcionando por lo tanto al paciente, cantidades de BMY 28674 efectivas contra la ansiedad. Esto está en contradicción con los métodos de administración comúnmente aceptados, que están enfocados a maximizar los niveles sanguíneos de buspirona sin cambios. Como un ejemplo, la guía de dosificación ha descrito en el pasado que si la buspirona se administra bajo condiciones que favorezcan la inhibición de su metabolismo, es decir, en donde resultarán mayores niveles de buspirona sin cambios y menores niveles del metabolismo, deberá reducirse la dosis de buspirona. El método mejorado está directamente en contra al método del pasado de administrar oralmente la buspirona. En lugar de reducir la dosis de buspirona cuando se inhibe su metabolismo, la dosis de buspirona deberá incrementarse para conseguir niveles apropiados del BMY 28674. No existe correlación específica de efectos adversos serios con cantidades crecientes de la buspirona ingerida. En resumen, el segundo aspecto 'de la presente invención concierne a un proceso mejorado para aliviar un estado de ansiedad indeseable, en un mamífero, mediante la administración oral de buspirona, o de una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable de la misma, en una manera que favorezca la producción metabólica de BMY 28674 en el mamífero. En general, la cantidad de buspirona, que se va a proporcionar, es una dosis que da por resultado una concentración sanguínea mínima (CMIN) de 1 a 2 ng/mL de BMY 28674. Las determinaciones de CMIN en pacientes son realizadas usualmente 12 horas después de una dosis del fármaco y justo antes de la próxima dosis. Un ejemplo de un factor que afecta la producción metabólica del BMY 28674, es el efecto del alimento en la dosificación oral de buspirona. De acuerdo con el instructivo de uso ara el BUSPAR (tabletas orales de HCl (Clorhidrato) de buspirona) , se hace la sugerencia implícita de que se tome buspirona con alimentos, para incrementar la concentración plasmática de buspirona sin cambios. Un segundo ejemplo de una modificación de dosificación descrita en el instructivo de uso del BUSPAR® es la recomendación de disminuir la dosificación de buspirona cuando se administre en combinación con un inhibidor del CYP3A4. Para propósitos del método mejorado para aliviar un estado de ansiedad indeseable, mediante la administración oral de buspirona, los ejemplos precedentes hac n descripciones apartadas del método mejorado de la presente invención. En lugar de dosificar buspirona en las comidas, la dosificación deberá ocurrir aproximadamente dos horas o más, antes o después de una comida. De manera similar, en el caso de un funcionamiento reducido del citrocromo P450 3A4 (CYP3A4), la dosis de buspirona deberá incrementarse y no reducirse, tal como los describe el instructivo de uso del BUSPAR . Otras modificaciones de la dosificación, contempladas por el método ansiolítico mejorado, involucran la introducción sistémica del BMY 28674 a través de la administración oral de buspirona, y comprenden las siguientes. • Administrar buspirona oral coincidiendo con períodos diurnos de la actividad máxima del CYP3A4 en el mamífero.

• Descontinuar los medicamentos o productos alimenticios, concomitantes, que inhiban la actividad del CYP3A4. • Incrementar la dosis de buspirona para ajustar la actividad reducida del CYP3A4, cuando la suspensión del medicamento concomitante que inhiba la actividad del citocromo sea médicamente impráctica. En resumen, la administración oral de buspirona a un paciente con ansiedad, se modifica en cierta manera y hasta cierto punto, de conformidad con la' buena práctica médica, de manera tal que se favorezca la producción metabólica del BMY 28674. Manteniendo la buena práctica clínica, es preferente administrar el BMY 28674, o una forma precursora, a niveles de concentraciones que produzcan efectos ansiolíticos efectivos sin causar efectos secundarios dañinos o adversos.

DESCRIPCIÓN DE MODALIDADES ESPECIFICAS El compuesto cuyo uso constituye esta invención, y su método de preparación, serán evidentes de manera más completa a la luz de los siguientes ejemplos que se presentan con el propósito de ilustración únicamente y no den considerarse como limitantes de la invención en su esfera de aplicación o alcance.

Ejemplo 1 Preparación del BMY 28674 (I) A. Peroxidicarbonato de di-4-nitrobencilo (III) Se preparó peroxidicarbonato de di-4-nitrobencilo, usando una modificación del procedimiento de la literatura1. De esta manera, a una solución enfriada con hielo de cloroformiato de 4-nitrobencilo (10.11 g, 4.7 mmoles) en acetona (20 ml) se adicionó, gota a gota, en 30 minutos, una mezcla enfriada con hielo de H202 al 30% (2.7 ml, 24 mmoles) y NaOH 2.35 N (20 ml, 47 mmoles). La mezcla se agitó vigorosamente durante 15 minutos y luego se filtró y la torta del filtro se lavó con agua y luego con hexano. El sólido mojado resultante se recogió en diclorometano, la solución se secó (Na2S04) y luego se diluyó con un volumen igual de hexano. La concentración de esta solución, a 20 °C, en un evaporador giratorio, dio un precipitado cristalino que se filtró, se lavó con hexano y se secó in vacuo para dar el compuesto III (6.82 g, 74%) como icrocristales de color amarillo pálido, p.f. 104°C (descomposición).

Se encontró que el peroxidicarbonato de di-4-nitrobencilo era un material relativamente estable que se descomponía al alcanzar su punto de fusión, con lenta emanación de gas. En comparación, el peroxidicarbonato de dibencilo2 se descompuso con una vigorosa expulsión repentina de material, del capilar para punto de fusión.

B. 6- (4-Nitrobencilperoxidicarbonatil) -8- [4- [4- (2- pirimidinil) -piperazinil] -butil-8-azaspiro [4.5] -7, 9- diona (II) A una solución de 8- [4- [4- (2-pirimidinil) -piperazinil] -8-azaspiro [4.5] -7, 9-diona (buspirona: 10 g, 26 mmoles) en THF seco (250 ml) se adicionó LiN(Me3Si)2 (28.5 ml de una solución de THF 1M) a -78 °C y se agitó durante 3 horas y luego se adicionó una solución de peroxidicarbonato de di-4-nitrobencilo (11.2 g) en THF seco (150 ml) , gota a gota, durante 1 hora. Se continuó la agitación a -78 °C por una hora.

F. Strain, et al., J. Am. Chem. Soc, 1950, 72, 1254 Cf. M.P. Gore, J.C. Vederas, J. Org. Chem., 1986, 51, 3700 El baño de enfriamiento se retiró y la solución de reacción se vertió en una mezcla de H20 y EtOAc. La fase orgánica se separó y se lavó con H20 y luego con salmuera. La base orgánica se secó y luego se evaporó hasta producir un aceite viscoso. La cromatografía instantánea de este aceite, eluyendo la columna de sílice con MeCN-EtOAc (1:2) dio el producto crudo el cual se lavó con acetona, para eliminar la buspirona que no había reaccionado, dejando 6.23 g de un sólido blanco (46%) del producto (II) .

C. 6-Hidroxi-8- [4- [4- (2-pirimidinil) -piperaizinil] -butilo] - 8-azaspiro[4.5]-7, 9-diona (I; BMY 28674) Se hidrogenó una mezcla de II (4.0 g; 6.9 mmoles) y Pd/C al 10% (aproximadamente 1 g) en MeOH (100 ml) en un agitador Parr a 2.81-3.16 Kg/cm2 (40-45 psi) durante 1 hora. La mezcla de hidrogenación se filtró a través de una almohadilla de Celite la cual se lavó luego con EtOAc. El filtrado se evaporó hasta producir una goma que se purificó mediante cromatografía instantánea a través de una columna de gel de sílice eluyendo con EtOAc para dar 0.41 g de un sólido blanquecino (I) . Análisis Calculado para C2?H3?N503: C, 62.82; H, 7.78; N, 17.44. Encontrado: C, 62.84; H, 7.81; N, 17.33.

Ejemplo 2 : Ensayo de Enlazamiento al Receptor 5-HT1A Se preparan membranas para el enlazamiento, usando el receptor 5-HT1A humano expresado en células HEK293. Las células se recolectaron y rompieron usando un homogeneizador Dounce. Las células se centrifugan a 18000xg durante 10 minutos y la masa pelotiforme se vuelve a suspender en una solución reguladora para ensayo, se congela en nitrógeno líquido y se mantiene a -80 °C hasta el día del ensayo. Se usa un total de 30 µg de proteína por pozo. El análisis se lleva a cabo en placas de 96 po'zos profundos. La solución reguladora para análisis es HEPES 50 mM que contiene MgCl2 2.5 mM y EGTA 2 mM. La preparación de membrana se incuba a 25 °C durante 60 minutos con una cantidad de 0.1 nM a 1000 mM, del compuesto de análisis y 1 nM de 3H-8-OH-DPAT . La serotonina 10 mM sirve como agente bloqueador para determinar el enlazamiento no específico. La reacción se finaliza mediante la adición de 1 ml de solución reguladora de HEPES 50 mM enfriada con hielo y la filtración rápida a través de un Recolector de Células Brandel usando filtros Whatman GF/B. Las almohadillas del filtro se cuentan en un contador de centelleo de líquidos LKB Trilux. Los valores IC50 se determinan usando regresión no lineal mediante el ajuste con Excel .

Ejemplo 3 Análisis de la Vocalización Ultrasónica Inducida por el Aislamiento, de Crías de Rata Crías de rata Harían Sprague-Dawley (hembras y machos) se alojaron en jaulas de policarbonato con la madre, hasta una edad de 9 a 11 días. Treinta minutos antes del análisis se retiraron las crías de la madre, se colocaron en una nueva jaula con una pequeña cantidad de trapos caseros y se llevaron al laboratorio y se pusieron bajo una luz para mantener la temperatura corporal a 37 °C. Luego se pesaron las crías, se les determinó el sexo, se marcaron' y se regresaron al grupo de la carnada hasta la evaluación del comportamiento. El análisis se llevó a cabo en una cámara de registro Plexiglás que contenía una placa metálica mantenida a una temperatura de 18 a 20 °C, con una cuadrícula de 5x5 cm dibujada sobre la placa. Se suspendió un micrófono 10 cm por encima de la placa para registrar las vocalizaciones ultrasónicas. Las llamadas ultrasónicas se registraron usando el sistema UltraVox de Noldus proporcionando análisis en línea de la frecuencia y duración de las llamadas. El número de celdas de la cuadrícula por las que cruzaron las crías, se recavó también mediante puntuación visual. Las crías que fallaron en emitir al menos 60 llamadas durante una sesión de 5 minutos, previa al análisis, se excluyeron de la evaluación farmacológica. Inmediatamente después de la reunión de las mediciones de línea base se inyectaron las crías con el vehículo o fármaco, subcutáneamente, en el cogote del cuello y se regresaron a sus compañeros de carnada. Treinta minutos después se volvieron a analizar las crías respecto a cada una de las mediciones dependientes (vocalización y cruces por celdas de la cuadrícula) para evaluar los efectos del fármaco. Al menos que se especifique de otra manera, cada cría se usó únicamente una vez. Las diferencias de línea base y el cambio porcentual respecto a la línea base, para la frecuencia de vocalizaciones ultrasónicas y los cruces por las celdas de la cuadrícula, se analizaron usando un análisis de varianza (ANOVA) de una vía. Se realizaron comparaciones por hoc de Bonferroni/Dunn para evaluar los efectos agudos del fármaco con el control del vehículo. Se usó el análisis Logaritmo próbit para estimar la dosis (miligramos por kilogramo) de cada agonista, predicha para inhibir las vocalizaciones ultrasónicas inducidas por el aislamiento, en un 50% (ID50) . Todas las comparaciones se realizaron con una taza de error tipo I experimental (a) ajustado a 0.05. Las dosis para cada fármaco se administraron en un orden irregular a través de varias camadas. El BMY 28674 y la buspirona se disolvieron en solución salina fisiológica (NaCl al 0.9%; vehículo). Todas las inyecciones se administraron subcutáneamente en un volumen de 10 ml/kg. Las dosis de los fármacos se refieren al peso de la sal.

Ejemplo 4 : Estudios del Metabolismo In Vitro: Conversión de la Buspirona en BMY 28674 • Las preparaciones de HLM de 5 donadores se seleccionaron en base a sus actividades de la enzima P450 en el citocromo CYP3A4. • La buspirona-C14 (10 µM) se incubó con cinco preparaciones de HLM de hígados de cinco donadores (15 minutos con 0.5 mg/ml de proteína microsómica) . • Los niveles de buspirona-C14 'y BMY 28674 en las muestras de incubación se determinaron mediante HPLC de fase inversa, utilizando detección de radiactividad en línea y por la comparación con estándares auténticos . • Se realizó un segundo conjunto de incubaciones para determinar el potencial de ketoconazol (un inhibidor del CYP3A4) para alterar la proporción de BMY 28674 respecto al BUSPAR® en incubaciones con HLM. • La buspirona-C14 (10 µmoles) se incubó con HLM reunido de varios donadores (15 minutos con 0.5 mg/ml de proteína microsómica).

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (10)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un proceso para aliviar un estado de ansiedad, indeseable, en un mamífero, caracterizado porque comprende la administración sistémica al mamífero, de una dosis ansiolítica, efectiva pero no tóxica, de 6-hidroxi-8- [4- [4-(2-pirimidinil) -piperazinil] -butil] -8-azas?iro [4.5] -7, 9-diona o una sal de adición de ácido o hidrato, farmacéuticamente aceptable, de la misma.

2. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende 6-hidroxi-8- [4- [4- (2-pirimidinil) -piperazinil] -butil] -8-azaspiro [4.5] -7, 9-diona, o una sal de adición de ácido o hidrato farmacéuticamente aceptable, de la misma, y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

3. La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque la sal de adición de ácido es el clorhidrato.

4. La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque es formulada en forma de dosis adecuada para una vía de administración seleccionada del grupo que consiste de la oral, sublingual, bucal, transnasal o parenteral.

5. La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque es formulada en una forma de dosis oral.

6. La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque es formulada en una forma de liberación prolongada.

7. La composición de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque es formulada en una forma de dosis oral.

8. La composición de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque es formulada en una forma de liberación prolongada.

9. La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque está en forma de tableta.

10. La composición de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque está en forma de tableta.