MX2013009280A - Formulaciones liofilizadas. - Google Patents

Abstract

La invención se dirige a un método para producir una composición de polipéptido que comprende: combinar un polipéptido con un aditivo volátil para formar una mezcla líquida y liofilizar la mezcla líquida para obtener una composición de polipéptido liofilizado.

Description

FORMULACIONES LIOFILIZADAS CAMPO TÉCNICO La invención presente se relaciona a formulaciones útiles para reducir el tiempo de reconstitución de moléculas biológicas liofilizadas y métodos de uso.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La liofilización es un procedimiento que elimina el solvente de una solución para formar un sólido o polvo que es estable y más fácil de almacenar a temperatura elevada que el líquido. La liofilización, también conocida como secado por congelación, implica la congelación seguida por sublimación. La materia liofilizada resultante puede ser almacenada sin refrigeración, reduciendo costos de almacenamiento y transporte de la sustancia así como el espacio de almacenamiento requerido para el producto. También puede reducir el peso del producto, lo que reduce asimismo los costos de embarque y los relacionados. La liofilización es especialmente útil para conservar y almacenar varias moléculas biológicas, porque aumenta su vida de anaquel.

Las moléculas biológicas son más difíciles de estabilizar a través de la formulación que las pequeñas moléculas debido al número de grupos químicos y dependencia de la estabilidad para mantener el doblez nativo. Por esta razón, muchas moléculas biológicas comerciales son liofilizadas. En general, la liofilización mejora la estabilidad a través de (i) la eliminación de agua (ya que la mayoría de las degradaciones químico biológicas son hidrolíticas) y (ii) disminución de la movilidad general del sistema (ya que el movimiento dinámico de las cadenas secundarias y las moléculas es necesario para que ocurran los eventos de degradación química y física).

Las moléculas biológicas liofilizadas se reconstituyen antes del uso, a menudo en los mismos contenedores en los que fueron liofilizadas y almacenadas. Se prefiere el tiempo corto de la reconstitución tanto para médicos como para pacientes. Si el tiempo de reconstitución de la molécula biológica liofilizada es demasiado largo, aumentará el tiempo de preparación así haciendo difícil de administrar a muchos pacientes al mismo tiempo. Además, muchas moléculas biológicas se diseñan para ser administradas por los mismos pacientes. Un tiempo de reconstitución más corto asegura que los pacientes reconstituirán completamente la molécula biológica antes de la administración, mejorando así la seguridad y la eficacia.

Los esfuerzos anteriores para reducir el tiempo de reconstitución se han enfocado principalmente en la formulación del búfer de reconstitución. Por contraste, la invención presente se dirige a la adición de un aditivo volátil a la formulación del búfer utilizado para la liofilización de una molécula biológica. Así, hay una necesidad de métodos y composiciones que reduzcan el tiempo de reconstitución de una molécula biológica liofilizada.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención presente se dirige a un método para producir una composición de polipéptido que comprende: combinar un polipéptido con un aditivo volátil para formar una mezcla líquida y liofilizar la mezcla líquida para obtener una composición de polipéptido liofilizado.

La invención presente también se dirige a un método para reducir el tiempo de reconstitución de una composición de polipéptido liofilizada que comprende: a) liofilizar una mezcla líquida que comprende el polipéptido, en donde la mezcla líquida comprende una aditivo volátil y b) reconstituir el polipéptido liofilizado con una cantidad suficiente de un agente de dispersión farmacéuticamente aceptable a la composición del polipéptido liofilizado para producir una composición líquida de polipéptido, en donde el tiempo para reconstituir el polipéptido liofilizado en el la presencia del aditivo volátil es menor que el tiempo para reconstituir el mismo polipéptido liofilizado en ausencia del aditivo volátil. La invención presente también se dirige a un método para producir una composición líquida de polipéptido que comprende: obtener un polipéptido liofilizado producido por un método de la invención presente, y reconstituir el polipéptido liofilizado con una cantidad suficiente de un agente de dispersión farmacéuticamente aceptable para producir una composición líquida de polipéptido.

La invención presente también se dirige a una formulación adecuada para la liofilización de un polipéptido.

La invención presente también se dirige a una composición seca de polipéptido producida por un método de la invención presente.

La invención presente también se dirige a una composición líquida de polipéptido producida por un método de la invención presente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Figura 1. Gráficos de tiempos de reconstitución del liófilo utilizando el método de sacudido.

Figura 2. Gráficos de tiempos de reconstitución del liófilo utilizando el método tranquilo.

Figura 3. Gráficos de tiempos de reconstitución del liófilo como una función del número de muestra. Gráficos de cuadros que resumen los tiempos de reconstitución promedio sobre todas las pruebas como una función del número de muestra. La frontera del cuadro más cercana poner a cero indica el percentil 25°, una línea dentro del cuadro marca la mediana, y la frontera de la caja más lejana de cero indica el percentil 75°. Las líneas en forma de T (barras de error) arriba y debajo del cuadro indican el percentil 90° y 10°. Las salientes debajo del percentil 10° o encima del percentil 90° se grafican como símbolos. Todos los tiempos de reconstitución del liófilo se grafican como una función del número de muestra.

Figura 4. Gráficos de tiempos de reconstitución de liófilo como una función del número de muestra, separados por el método de analista y reconstitución.

Figura 5. La secuencia de aminoácidos del Albiglutide (SEQ ID NO:1 ).

Figura 6. Gráfica de barras que compara puntos finales de reconstitución de muestras, liofilizadas con o sin la adición de tBuOH al 2%. Las barras representan el promedio sobre todas las pruebas, y las líneas en forma de T una desviación estándar sobre todas las pruebas, como una función del tipo de muestra.

Figura 7. Gráfica de barras que compara puntos finales de reconstitución de muestras, liofilizadas con o sin la adición de tBuOH al 2%. Las barras representan el promedio sobre todas las pruebas, y las líneas en forma de T una desviación estándar sobre todas las pruebas, como una función del tipo de muestra.

Figura 8. La secuencia de aminoácidos de mAb anti-NOGO cadenas pesada (SEQ ID NO: 3) y ligera (SEQ ID NO: 4).

Figura 9. La secuencia de aminoácidos de dAb antí-TNFR1 (SEQ ID NO: 5).

Figura 10. La secuencia de aminoácidos de IL18 (SEQ ID NO: 6).

Figura 1 1. La secuencia de aminoácidos de anti-IL5 cadenas pesada (SEQ ID NO: 7) y ligera (SEQ ID NO: 8).

Figura 2. La secuencia de aminoácidos de anti-CD20 VH (SEQ ID NO: 9) y dominios de VL (SEQ ID NO: 10).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención presente proporciona, entre otras cosas, formulaciones de liofilización. La invención también proporciona, entre otras cosas, métodos de formación y métodos de utilización de formulaciones de liofilización. Ha sido descubierto por los inventores que cuando se agrega un aditivo volátil a una formulación de liofilización para la reconstitución del polipéptido, se reducen los tiempos para el polipéptido liofilizado. La invención presente también se dirige a una composición seca de polipéptido producida por un método de la invención presente.

La invención proporciona varios métodos, reactivos, y compuestos que pueden ser utilizados para producir una composición de polipéptido que comprende: combinar un polipéptido con un aditivo volátil para formar una mezcla líquida y liofilizar la mezcla líquida para obtener una composición de polipéptido liofilizado.

En la presente se proporcionan los métodos para liofilizar polipéptidos de soluciones líquidas, y los productos que comprenden los polipéptidos liofilizados obtenidos de tales soluciones líquidas liofilizadas. En ciertas modalidades, el aditivo volátil se disuelve en una solución acuosa que contiene el polipéptido y se liofiliza para proporcionar composiciones sólidas que contienen el polipéptido liofilizado. En ciertas modalidades, estas composiciones sólidas que contienen el polipéptido liofilizado son estables y adecuadas para almacenamiento, por ejemplo, adecuadas para almacenamiento por periodos de tiempo largos. Tal almacenamiento puede ser en condiciones ambientales, puede estar bajo temperatura controlada, puede estar bajo humedad controlada, o bajo otra condición o conjunto de condiciones; y puede ser almacenado en un contenedor sellado (por ejemplo, una botella o frasco con una tapa removible, unos tubos, una cápsula, una capleta, un frasco, una jeringa, una jeringa de doble cartucho, u otro contenedor), y puede estar en un contenedor sellado bajo un gas inerte (por ejemplo, nitrógeno, argón, helio, u otro gas inerte), u otro contenedor con o sin otro elemento o compuesto en el contenedor.

Será comprendido que ésta invención no se limita a métodos, reactivos, compuestos, composiciones, ni sistemas biológicos, particulares, que pueden, por supuesto, variar. También debe entenderse que la terminología utilizada aquí es con el propósito de describir modalidades en particular únicamente y no pretende ser limitante. Como se utiliza en esta especificación y en las reivindicaciones anexas, las formas singulares "un", "una", y "el" incluyen las referencias plurales a menos que el contexto claramente indique lo contrario. Así, por ejemplo, la referencia a " un polipéptido" incluye una combinación de dos o más polipéptidos, y similares.

"Aproximadamente" como se utiliza en la presente cuando se refiere a un valor medible tal como una cantidad, una duración temporal, y similares, significa que comprende variaciones de ±20% o ±10%, incluyendo ±5%, ±1 %, y ±0.1 % del valor especificado, ya que tales variaciones son apropiadas para realizar los métodos descritos.

A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente tienen el mismo significado como se entiende comúnmente por uno de experiencia ordinaria en la técnica a la que pertenece la invención. Aunque cualesquiera métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos aquí pueden utilizarse en la práctica para probar la presente invención, los materiales y métodos preferidos se describen aquí. Al describir y reivindicar la presente invención, se utilizará la siguiente terminología.

Todos los residuos de "aminoácidos" identificados en la presente están en la configuración L natural. De acuerdo con la nomenclatura estándar de polipéptidos, las abreviaturas para los residuos de aminoácido son como se muestra en el cuadro siguiente.

Debe apreciarse que todas las secuencias de residuos de aminoácidos se representan en la presente por fórmulas cuya orientación de izquierda a derecha está en la dirección convencional del extremo amino al extremo carboxi.

En ciertas modalidades el aditivo volátil es un solvente orgánico.

En una modalidad el solvente orgánico comprende un oxihidrocarburo inferior, un halohidrocarburo inferior, un haloxihidrocarburo inferior, un sulfoxihidrocarburo inferior, un ciclohidrocarburo inferior o una combinación de los mismos. En una modalidad el oxihidrocarburo inferior es metanol, etanol, n-propanol, ¡so-propanol, n-butanol, iso-butanol, 2- butanol, t-butanol, pentanol, iso-pentanol, 2-pentanol, 3-pentanol, t-pentanol, metiletilcetona, alcohol bencílico, ácido acético, metiletil cetona, o una combinación de los mismos.

En ciertas modalidades el aditivo volátil es acetonitrilo, acetato de amonio, o carbonato de amonio. En una modalidad la cantidad de acetato de amonio o carbonato de amonio es aproximadamente 50 mM a aproximadamente 300 mM. En una modalidad la cantidad de acetato de amonio o carbonato de amonio es aproximadamente 100 mM o aproximadamente 250 mM.

"Oxihidrocarburos inferiores" como se denominan en la presente significan compuestos que poseen radicales hidrocarbilo y átomos de oxígeno que tienen de 1 a 8 átomos de carbono y de 1 a 4 átomos de oxígeno. Oxihidrocarburos inferiores de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, alcanoles inferiores, cetonas inferiores, ácidos carboxílicos inferiores, ésteres carboxílicos inferiores, carbonatos inferiores, y similares.

"Inferior" como se denominan los compuestos químicos descritos en la presente se refiere a esos compuestos que tienen de 1 a 8 átomos de carbono.

"Alcanol inferior" se refiere a un grupo alquilo de CrC8 saturado que puede ser de cadena ramificada o lineal con de 1 a 4 grupos hidroxilo. Alcanoles inferiores de ejemplo que tienen 1 grupo hidroxilo incluyen, pero no se limitan a, metanol, etanol, n-propanol, iso-propanol, n-butanol, iso-butanol, 2-butanol, t-butanol, pentanol, iso-pentanol, 2-pentanol, 3-pentanol, t-pentanol, y similares.

"Cetonas inferiores" de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, acetona, metil etil cetona, metil propil cetona, metil isopropil cetona, metil butil cetona, metil iso-butil cetona, metil 2-butil cetona, metil t-butil cetona, dietil cetona, etil propil cetona, etil isopropil cetona, etil butil cetona, etil iso-butil cetona, etil t-butil cetona, y similares. "Ácidos carboxílicos inferiores" de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido butírico, ácido isobutírico y similares.

"Esteres carboxílicos inferiores" de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, acetato de metilo, acetato de etilo, acetato de propilo, acetato de isopropilo, acetato de butilo, acetato de isobutilo, acetato de 2-butilo, acetato de t-butilo, y similares.

"Carbonatos inferiores" de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, dimetil carbonato, metil etil carbonato, metil propil carbonato, metil isopropil carbonato, metil butil carbonato, metil iso-butil carbonato, metil 2-butil carbonato, metil t-butil carbonato, dietil carbonato, etil propil carbonato, etil isopropil carbonato, etil butil carbonato, etil iso-butil carbonato, etil t-butil carbonato.y similares.

"Halohidrocarburos inferiores" como se denominan en la presente se refieren a compuestos que posees radicales hidrocarbilo y átomos de halógeno que tienen 1 a 8 átomos de carbono y de 1 a 4 átomos de halógeno. Preferiblemente, los átomos de halógeno son cloro, fluoro y bromo. Más preferiblemente, los átomos de halógeno son átomos de cloro. Los halohidrocarburos inferiores de ejemplo, incluyen, pero no se limitan a, cloruro de metilo, cloruro de metileno, cloroformo, tetracloruro de carbono, y similares.

"Haloxihidrocarburos inferiores" significa oxi hidrocarburos como se defienen en la presente que están sustituidos además con de 1 a 4 átomos de halógeno. Un haloxihidrocarburo de ejemplo incluye, pero no se limita a, hexafluoroacetona.

"Sulfoxihidrocarburos inferiores" significa oxi hidrocarburos como se definen en la presente que también contienen un átomo de azufre. Sulfoxihidrocarburos inferiores de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, sulfóxido de dimetilo (DMSO) y dimetil sulfona.

"Ciclohidrocarburos inferiores" se refiere a radicales hidrocarbilo que están ciclados tales como, por ejemplo, anillos hidrocarburo de 3 a 8 miembros. Un ciclohidrocarburo de ejemplo incluye, pero no se limita a, ciclohexano.

"Polipéptido," "péptido" y "proteína" se utilizan intercambiablemente en la presente para referirse a un polímero de residuos de aminoácidos. Un polipéptido puede ser de origen natural (derivado de tejidos), una expresión recombinante o natural de preparaciones celulares procarióticas o eucarióticas, o producido químicamente a través de métodos sintéticos. Los términos aplican a polímeros de aminoácidos en los que uno o más residuos de aminoácidos es un mimético químico artificial de un correspondiente aminoácido natural, así como a polímeros de aminoácidos naturales y polímeros de aminoácidos no naturales. Los miméticos de aminoácidos se refieren a compuestos químicos que tienen una estructura que es diferente de la estructura química general de un aminoácido, pero que funciona en una manera similar a un aminoácido natural. Los residuos no naturales se describen bien en la literatura científica y de patentes; unas pocas composiciones no naturales de ejemplo útiles como miméticos de residuos de aminoácidos naturales y lineamientos se describen a continuación. Los miméticos de aminoácidos aromáticos pueden generarse reemplazando por, por ejemplo, D- o L-nafilalanina; D- o L-fenilglicina; D- o L-2 tienilalanina; D- o L-1 , -2,3-, o 4-pirenilalanina; D- o L-3 tienilalanina; D- o L-(2-piridinil)-alanina; D- o L-(3-piridinil)-alanina; D- o L-(2-pirazinil)-alanina; P- o L-(4-isopropil)-fenilglicina: D-(trifluorometil)-fenilglicina; D-(trifluorometil)-fenilalanina: D-p-fluoro-fenilalanina; D- o L-p-bifenilfenilalanina; K- o L-p- metoxi-bifenilfenilalanina: D- o L-2-indolo(alquil)alaninas; y, D- o L-alquilalaninas, donde el alquilo puede ser metilo, etilo, propilo, hexilo, butilo, pentilo, isopropilo, iso-butilo, sec-isotilo, iso-pentilo sustituido o no sustituido, o aminoácidos no ácidos. Los anillos aromáticos de un aminoácido no natural incluyen, por ejemplo, anillos aromáticos de tiazolilo, tiofenilo, pirazolilo, benzimidazolilo, naftilo, furanilo, pirrolilo, y piridilo.

"Péptido" como se utiliza en la presente incluye péptidos que son variaciones conservadoras de esos péptidos específicamente ejemplificados en la presente. "Variación conservadora" como se utiliza en la presente denota el reemplazo de un residuo de aminoácido por otro residuo biológicamente similar. Ejemplos de variaciones conservadoras incluyen, pero no se limitan a, la sustitución de un residuo hidrofóbico tal como isoleucina, valina, leucina, alanina, cisteína, glicina, fenillalanina, prolina, triptofano, tirosina, norleucina o metionina para otro, o la sustitución de un residuo polar por otro, tal como la sustitución de arginina por lisina, ácido glutámico por ácido aspártico, o glutamina por asparagina, y similares. Los aminoácidos hidrofílicos neutrales que pueden ser sustituidos entre sí incluyen asparagina, glutamina, serina y treonina. "La variación conservadora" también incluye el uso de un aminoácido sustituido en lugar de un aminoácido progenitor no sustituido con la condición de que los anticuerpos subidos al polipéptido sustituido también inmunoreaccionen con el polipéptido no sustituido. Tales sustituciones conservadoras están dentro de la definición de las clases de péptidos de la invención. "Catiónico" como se utiliza en la presente se refiere a cualquier péptido que posee una carga positiva neta a un pH 7.4. La actividad biológica de los péptidos puede ser determinada por métodos estándar conocidos por los expertos en la técnica y descritos en la presente.

"Recombinante" cuando se utiliza con referencia a una proteína indica que la proteína ha sido modificada por la introducción de un ácido nucleico o proteína, heterólogos, o la alteración de un ácido nucleico o proteína nativa.

Como se utiliza "tiempo de reconstitución" y variaciones gramaticales del mismo significan la cantidad de tiempo necesario para que una molécula liofilízada sea disuelta y/o suspendida en una forma líquida. Por ejemplo, el tiempo de reconstitución incluye, pero no se limita al tiempo necesario para que una perla secada de polipéptído se suspenda en agua o búfer después de la liofilización. Por consiguiente, una "reducción" o "reducir" el tiempo de reconstitución y las variaciones gramaticales del mismo, significa que se requiere menos tiempo para que el polipéptído secado bajo una primera formulación y/o condición se suspenda en un líquido en comparación con el mismo polipéptído secado bajo una segunda formulación y/o condición y suspendido en el mismo líquido.

La invención presente también se dirige a un método para reducir el tiempo de reconstitución de una composición de polipéptído liofilízada que comprende: a) liofilizar una mezcla líquida que comprende el polipéptído, en donde la mezcla líquida comprende una aditivo volátil y b) reconstituir el polipéptído líofilízado con una cantidad suficiente de un agente de dispersión farmacéuticamente aceptable a la composición del polipéptido liofilizado para producir una composición líquida de polipéptido, en donde el tiempo para reconstituir el polipéptido liofilizado en el la presencia del aditivo volátil es menor que el tiempo para reconstituir el mismo polipéptido liofilizado en ausencia del aditivo volátil. La invención presente también se dirige a un método para producir una composición líquida de polipéptido que comprende: obtener un polipéptido liofilizado producido por un método de la invención presente, y reconstituir el polipéptido liofilizado con una cantidad suficiente de un agente de dispersión farmacéuticamente aceptable para producir una composición líquida de polipéptido. La invención presente también se dirige a una composición líquida de polipéptido producida por un método de la invención presente.

En ciertas modalidades ejemplares, el polipéptido liofilizado se reconstituye fácilmente una vez en contacto con una cantidad suficiente de un agente de dispersión farmacéuticamente aceptable. Por ejemplo, en ciertas modalidades, el polipéptido liofilizado se mezcla, por ejemplo, sacudiendo por aproximadamente 5 segundos y entonces permitido reposar por aproximadamente 5 a aproximadamente 30 minutos, con un agente de dispersión para proporcionar una composición líquida de polipéptido. El agente de dispersión es preferiblemente agua estéril o "agua para inyección" (WFI, por sus siglas en inglés). El polipéptido líquido puede ser diluido además con salina isotónica u otros excipientes para producir una concentración deseable antes de la administración. Según la invención presente, "excipientes" incluye, pero no se limita a, estabilizantes, por ejemplo, albúmina de suero humano (hsa), albúmina de suero bovino (bsa), a-caseína, globulinas, a-lactalbúmina, LDH, lisozima, mioglobina, ovalbúmina, RNasa A; agentes búfer, por ejemplo, ácido cítrico, HEPES, histidina, acetato de potasio, citrato de postasio, fosfato de potasio (KH2P04), acetato de sodio, bicarbonato de sodio, citrato de sodio, fosfato de sodio (NAH2P04), base Tris, y Tris-HCI; aminoácidos/metabolitos, por ejemplo, glicina, alanina (a-alanina, ß-alanina), arginina, betaina, leucina, lisina, ácido glutámico, ácido aspártico, histidina, prolina, 4-hidroxiprolina, sarcosina, ácido ?-aminobutírico (GABA), opinas (alanopina, octopina, estrombina), y trimetilamina N-óxido (TMAO); surfactantes, por ejemplo, polisorbato 20 y 80, y poloxámero 407: ácidos grasos, por ejemplo, fosfatidil colina, etanolamina, y acetiltriptofanato: polímeros, por ejemplo, polietilen glicol (PEG), y polivinilpirrolidona (PVP) 10, 24, 40; excipientes de bajo peso molecular, por ejemplo, arabinosa, celobiosa, etilen glicol, fructosa, fucosa, galactosa, glicerina/glicerol, glucosa, inositol, lactosa, manitol, maltosa, maltotriosa, mañosa, melibiosa, 2-metil-2,4-pentanediol, octulosa, propilen glicol, rafinosa , ribosa, sorbitol, sacarosa, trehalosa, xilitol, y xilosa; y excipientes de alto peso molecular, por ejemplo, celulosa, ß-ciclodextrina, dextrano (10 kd), dextrano (40 kd), dextrano (70 kd), ficol, gelatina, hidroxipropilmetil-celulosa, hidroxietil almidón, maltodextrina, methocel, peg (6 kd), polidextrosa, polivinilpirrolidona (PVP) k15 (10 kd), PVP (40 kd), PVP k30 (40 kd), PVP k90 (1000 kd), sephadex G 200, y almidón; antioxidantes, por ejemplo, ácido ascórbico, cisteína HCI, tioglicerol, ácido tioglicólico, tiosorbitol, y glutationa; agentes reductores, por ejemplo, cisteína HCI, ditiotreotol, y otro tiol o tiofenos; agentes quelantes, por ejemplo, EDTA, EGTA, ácido glutámico, y ácido aspártico; sales inorgánicas/metales, por ejemplo, Ca2+, Ni2+, Mg2+, Mn2+, Na2S04, (NH4)2S04, Na2HP04/NaH2P0 , K2HP04/KH2P04, MgS0 , y NaF; sales orgánicas, por ejemplo, acetato de Na, polietielno de Na, caprilato de Na (octanoato de Na), proprionato, lactato, succinato, y citrato; solventes orgánicos, por ejemplo, acetonitrilo, dimetilsulfóxido (dmso), y etanol.

En modalidades ejemplares de la invención presente, las composiciones líquidas de polipéptido que se producen exhiben características deseables, tales como características deseables de viscosidad y tensión superficial.

El término "tensión superficial" se refiere a la fuerza de atracción ejercida por las moléculas debajo de la superficie sobre ésas en la superficie/interfaz de aire, resultando de la concentración molecular alta de un líquido en comparación a la concentración molecular baja del gas. Los líquidos con valores bajos de tensión superficial, tales como líquidos no polares, fluyen más fácilmente que el agua. Típicamente, los valores de tensiones superficiales se expresan en newtons/metros o dinas/centímetros.

La "Tensión superficial dinámica" como se denomina en la presente es la superficie/interfaz de aire y la tensión interfacial dinámica en la superficie/interfaz de superficie. Hay varios métodos alternativos para la medición de la tensión superficial dinámica, por ejemplo, tensionometría de superficie de burbuja cautiva o tensionometría de superficie de burbuja pulsante.

El término "viscosidad" se refiere a la resistencia interna al flujo exhibida por un fluido a una temperatura especificada; la proporción de esfuerzo cortante al índice de corte. Un líquido tiene una viscosidad de un poise si una fuerza de 1 dina/centímetro cuadrado causa que dos superficies líquidas paralelas de un centímetro cuadrado de área y un centímetro cuadrado aparte se muevan una delante de la otra a una velocidad de 1 cm/segundo. Un poise equivale a cien centipoise.

Al referirse a la viscosidad aparente, se comprende que el valor de la viscosidad depende de las condiciones bajo las cuales se tomó la medición, tal como temperatura, el índice de corte y el esfuerzo cortante empleados. La viscosidad aparente se define como la proporción del esfuerzo cortante al índice de corte aplicado. Hay varios métodos alternativos para la medición de la viscosidad aparente. Por ejemplo, la viscosidad puede probarse por un cono y una placa adecuados, placa paralela u otro tipo de viscosímetro o reómetro.

La invención presente también se dirige a una formulación adecuada para la liofilización de un polipéptido. En ciertas modalidades la mezcla líquida comprende de aproximadamente 0.1 % en volumen a aproximadamente 10% en volumen de aditivo volátil, de aproximadamente 0.25% en volumen a aproximadamente 5% en volumen de aditivo volátil, o aproximadamente 2% por volumen de aditivo volátil. En una modalidad la formulación comprende aproximadamente 10 mM de fosfato de sodio, pH 7.2, aproximadamente 117 mM de trehalosa, aproximadamente 153 mM de manitol, y aproximadamente 0.01 % (p/v) polisorbato-80. En otra modalidad, la formulación comprende 26 mM de histidina, 150 mM de trehalosa, 0.02% de polisorbato 80 (PS80), pH 6.0. En ciertas modalidades el polipéptido comprende albiglutide (SEQ ID NO: 1 ).En otras modalidades el polipéptido comprende IL18 (SEQ ID NO: 6 ). en una modalidad, la invención presente se dirige a una formulación líquida que comprende aproximadamente 2% de t-butanol. En una modalidad la formulación líquida comprende aproximadamente 2% de t-butanol, aproximadamente 10mM de fosfato de sodio, pH 7.2, aproximadamente 1 17mM de trehalosa, aproximadamente 153mM de mannitol, y aproximadamente 0.01 % (p/v) de polisorbato-80. En otra modalidad, la formulación comprende aproximadamente 2% de t-butanol, aproximadamente 26 mM de histidina, pH 6.0, aproximadamente 150 mM de trehalosa, y aproximadamente 0.02% de polisorbato 80 (PS80).

Como se utiliza en la presente "proteína terapéutica" se refiere a cualquier proteína y/o polipéptido que puede ser administrado a un mamífero para producir una respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o humano que es buscada, por ejemplo, por un investigador o médico. Una proteína terapéutica puede producir más de una respuesta biológica o médica. Además, el término "cantidad terapéuticamente efectiva" significa cualquier cantidad que, en comparación con un correspondiente sujeto que no ha recibido tal cantidad, tiene como resultado, pero no se limita a, la curación, la prevención, o la mejora de una enfermedad, trastorno, o efecto secundario, o una disminución en la velocidad de avance de una enfermedad o trastorno. El término también incluye dentro de su alcance cantidades efectivas para aumentar la función fisiológica normal así como cantidades efectivas para provocar una función fisiológica en un paciente, que mejora o ayuda en el efecto terapéutico de un segundo agente farmacéutico.

En un aspecto, la invención presente se dirige a una composición que comprende: un polipéptido terapéutico, un búfer, un surfactante, por lo menos un excipiente, y por lo menos una aditivo volátil. En una modalidad, el polipéptido terapéutico comprende GLP-1 o un fragmento y/o variante del mismo. En una modalidad, el polipéptido terapéutico comprende por lo menos dos polipéptidos GLP-1 (7-36(A8G)) genéticamente fundidos al extremo N de albúmina de suero humano. En una modalidad, el polipéptido terapéutico comprende SEQ ID NO:1. En una modalidad, la proteína terapéutica comprende un agonista de GLP-1. En una modalidad, la proteína terapéutica comprende albúmina de suero humano.

En un aspecto, la invención presente se dirige al uso de cualquiera de las composiciones de las reivindicaciones de la invención presente para formar un medicamento que comprende SEQ ID NO: 1.

En una modalidad, el búfer es fosfato de sodio. En una modalidad el búfer es histidina. En una modalidad, el surfactante es polisorbato-80.En una modalidad, el por lo menos un excipiente se selecciona de: trehalosa, maltosa, sacarosa, mañosa, lactosa, manitol, sorbitol, glicerol y dextrosa.En una modalidad, el excipiente comprende: trehalosa y manitol.

"Agonista de GLP-1 " como se utiliza en la presente significa cualquier compuesto o composición capaz de simular la producción de insulina y/o que tiene por lo menos una actividad de GLP-1 incluyendo, pero no limitado a, una hormona y/o fragmento de incretina, variante y/o conjugado del mismo y un mimético y/o fragmento de incretina, variante y/o conjugado del mismo.

La "hormona Incretina" como se utiliza en la presente significa cualquier hormona que potencia la secreción de insulina o eleva de otro modo el nivel o la insulina. Un ejemplo de una hormona incretina es GLP-1. La GLP-1 es una incretina secretada por células L intestinales en respuesta a la ingesta de alimento. En un individuo sano, la GLP-1 juega un papel importante que regula los niveles de glucosa en sangre post-prandial estimulando la secreción de insulina dependiente de glucosa por el páncreas lo que tiene como resultado la absorción aumentada de glucosa en la periferia. El GLP-1 también suprime la secreción de glucagon, llevando a una salida reducida de glucosa hepática. Además, la GLP-1 retarda el tiempo de vaciado gástrico y desacelera la motilidad del intestino delgado retardando la absorción del alimento. La GLP-1 promueve la competencia continuada de las células beta estimulando la transcripción de genes involucrados en la secreción de insulina dependiente de glucosa y promoviendo la neogénesis de las célula beta (Meier, et al. Biodrugs 2003; 17 (2): 93-102).

"Actividad de GLP-1" como se utiliza en la presente significa una o más de las actividades de la GLP-1 humana natural, incluyendo pero no limitado a, reducir la glucosa en sangre y/o plasma, estimular la secreción de insulina dependiente de glucosa o elevar de otro modo el nivel de insulina, suprimir la secreción de glucagon, reducir la fructosamina, aumentar el suministro de glucosa y el metabolismo al cerebro, retardar el vaciado gástrico, y promover la competencia de las células beta, y/o la neogénesis. Cualquiera de estas actividades y otras actividades asociadas con la actividad de GLP-1 puede ser causada directa o indirectamente por una composición que tiene actividad de GLP-1 o un agonista de GLP-1. A manera de ejemplo, una composición que tiene actividad de GLP-1 puede estimular indirecta o directamente la producción de insulina dependiente de glucosa mientras que la estimulación de la producción de insulina puede reducir indirectamente los niveles de glucosa de plasma en un mamífero.

Un "mimético de incretina" como se utiliza en la presente es un compuesto capaz de potenciar la secreción de insulina o de elevar de otro modo el nivel de insulina. Un mimético de incretina puede ser capaz de estimular la secreción de insulina, aumentando la neogénesis de células beta, inhibiendo la apoptosis de células beta, inhibiendo la secreción de glucagon, retardando el vaciado gástrico e induciendo saciedad en un mamífero. Un mimético de incretina puede incluir, pero no se limita a, cualquier polipéptido que tiene actividad GLP-1 , incluyendo pero no limitado a, exendina 3 y exendina 4, incluyendo cualquier fragmento y/o vanante y/o conjugado del mismo.

Como se utiliza en la presente "conjuga" o "conjugado" y las variaciones gramaticales del mismo se refieren a dos moléculas que están unidas entre sí. Por ejemplo, un primer polipéptido puede estar covalentemente o no covalentemente unido a un segundo polipéptido. El primer polipéptido puede estar covalentemente unido por un enlazador químico o puede estar fusionado genéticamente al segundo polipéptido, en donde el primer y segundo polipéptidos comparten un elemento principal común de polipéptido.

Como se utiliza en la presente "fragmento", cuando se usa con respecto a un polipéptido, es un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que es igual como parte pero no toda la secuencia de aminoácidos del polipéptido entero natural. Los fragmentos pueden ser "de soporte libre" o comprendidos dentro de un polipéptido más grande del cual forman parte o región como una región continua única en un único polipéptido más grande. A manera de ejemplo, un fragmento de GLP-1 natural incluiría los aminoácidos 7 a 36 de lod aminoácidos 1 a 36 naturales. Además, los fragmentos de un polipéptido también pueden ser variantes de la secuencia parcial natural. Por ejemplo un fragmento de GLP-1 que comprende los aminoácidos 7-30 de la GLP-1 natural también puede ser una variante que tiene sustituciones de aminoácidos dentro de su secuencia parcial.

"Variante" como se utiliza el término en la presente, es un polinucleótido o polipéptido que varía de un polinucleótido o polipéptido de referencia respectivamente, pero retiene propiedades esenciales. Una vanante típica de un polinucleótido varía en la secuencia de nucleótidos de otro polinucleótidos de referencia. Los cambios en la secuencia de nucleótidos de la variante pueden o no alterar la secuencia de aminoácidos de un polipéptido codificado por el polinucleótido de referencia. Los cambios de nucleótido pueden tener como resultado sustituciones de aminoácidos, adiciones, deleciones, fusiones y truncamientos en el polipéptido codificado por la secuencia de referencia, como se discutido posteriormente. Una variante típica de un polipéptido varía en la secuencia de aminoácido de otro polipéptido de referencia. Generalmente, las diferencias son limitadas de manera que las secuencias del polipéptido de referencia y la variante sean muy similares en general y, en muchas regiones, idénticas. Una variante y polipéptido de referencia puede variar en la secuencia de aminoácidos por una o más sustituciones, adiciones, deleciones en cualquier combinación. Un residuo de aminoácido sustituido o insertado puede o no ser codificado por el código genético. Una variante de un polinucleótido o polipéptido puede ser una natural tal como una variante aléica, o puede ser una variante que no se sabe que existe naturalmente. Las variantes no naturales de los polinucleótidos y polipéptidos se pueden hacer mediante técnicas de mutagénesis o mediante síntesis directa. Las variantes también pueden incluir, pero no se limitan a, polipéptidos o fragmentos de los mismos que tienen una modificación química de uno o más de sus grupos secundarios de aminoácidos. Una modificación química incluye, pero no está limitada a, agregar porciones químicas, crear nuevos enlaces, y remover porciones químicas. Las modificaciones en los grupos secundarios de los aminoácidos incluyen, sin limitación, la acilación de los grupos lisina-s-amino, N-alquilación de arginina, histidina, o lisina, la alquilación de los grupos ácidos carboxílicos glutámico o aspártico, y la desamidación de la glutamina o la asparagina. Las modificaciones del grupo terminal amino incluyen, sin limitación, modificaciones de des-amino, N-alquilo inferior, N-di-alquilo inferior, y N-acilo. Las modificaciones del grupo terminal carboxi incluyen, sin limitación, las modificaciones de la amida, alquilo inferior amida, dialquil amida, y alquilo inferior éster. Además, uno o más grupos secundarios, o grupos terminales, pueden ser protegidos por grupos protectores conocidos por químico en proteínas con experiencia ordinaria.

En una modalidad de la invención presente, el polipéptido es un polipéptido de GLP-1. "El polipéptido de GLP-1" incluye, pero no se limita a, GLP- o un fragmento, variante, y/o conjugado del mismo. Los fragmentos de GLP-1 y/o las variantes y/o conjugados de la invención presente tienen típicamente por lo menos una actividad de GLP-1. Un GLP-1 o un fragmento, variante, y/o conjugado del mismo puede comprender albúmina de suero humano. La albúmina de suero humano puede estar conjugada a la GLP-1 o fragmento y/o variante del mismo. La albúmina de suero humano puede estar conjugada a una hormona incretina (tal como GLP-1) y/o mimético de incretina (tal como exendina 3 y exendina 4) y/o fragmentos y/o variantes del mismo a través de un enlazador químico antes de la inyección o puede estar ligado químicamente a albúmina de suero humano natural ¡n vivo (vea por ejemplo la Patente de EEUU No. 6,593,295 y la Patente de EEUU No. 6,329,336, incorporadas en la presente como referencia en su totalidad). Alternativamente, la albúmina de suero humana puede ser fundida genéticamente a una GLP-1 y/o fragmento y/o variante del mismo u otro agonista de GLP-1 tal como exendina-3 o exendina-4 y/o fragmentos y/o variantes del mismo. Ejemplos de GLP-1 y fragmentos y/o variantes del mismo fundidos genéticamente con albúmina de suero humano se proporcionan en las siguientes solicitudes de PCT:WO 2003/060071 , WO 2003/59934, WO 2005/003296, WO 2005/077042 (incorporadas en la presente como referencia en su totalidad).

Los polipéptidos que tienen actividad de GLP-1 pueden comprender por lo menos un fragmento y/o variante de GLP-1 humano. Los dos fragmentos naturales del GLP-1 humano se representan en SEQ ID NO: 2. 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser- 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe- 29 30 31 32 33 34 35 36 37 Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Xaa (SEQ ID NO. : 2) en donde: Xaa en la posición 37 es Gly (en lo siguiente designada como "GLP-1 (7-37)"), o -NH2 (en lo siguiente designada como "GLP-1 (7-36)"). Los fragmentos de GLP-1 pueden incluir, pero no se limitan a, moléculas de GLP-1 que comprenden, o que alternativamente consisten de, aminoácidos 7 a 36 de GLP-1 humano (GLP-1 (7-36)). Las variantes de GLP-1 o fragmentos de los mismos pueden incluir, pero no se limitan a, uno, dos, tres, cuatro, cinco o más sustituciones de aminoácidos en el GLP-1 del tipo silvestre o en los fragmentos naturales de GLP-1 mostrados en la SEQ ID NO.: 2. Las vahantes de GLP-1 o los fragmentos de GLP-1 pueden incluir, pero no se limitan a, las sustituciones de un residuo de alanina análogo a la alanina 8 de GLP-1 de tipo silvestre, tal alanina es mutada a una glicina (en lo siguiente designada como "A8G") (Vea por ejemplo, los mutantes descritos en la Pat. de EEUU No. 5,545,618, en la presente incorporada como referencia en su totalidad).

En algunos aspectos, por lo menos un fragmento y variante de GLP-1 comprende GLP-1 (7-36(A8G)) y se fusiona genéticamente a la albúmina de suero humano. En una modalidad adicional, los polipéptidos de la invención comprenden uno, dos, tres, cuatro, cinco, o más moléculas orientadas en tándem de GLP-1 y/o fragmentos y/o variantes del mismo fusionado al extremo N- o C- de la albúmina de suero humano o variante del mismo. Otras modalidades tienen tales polipéptidos A8G fusionados al extremo N- o C- de la albúmina o variante de la misma. Un ejemplo de dos fragmentos de GLP-1 (7-36)(A8G) orientados en tándem y/o variantes fusionadas al extremo N- de albúmina de suero humano comprende SEQ ID ??. , que se presenta en la Figura 3. En otro aspecto, por lo menos un fragmento y variante de GLP-1 comprende por lo menos dos GLP-1 (7-36(A8G)) fusionados en tándem y genéticamente a la albúmina de suero humano. En un aspecto, por lo menos dos GLP-1 (7-36(A8G)) se fusionan genéticamente en el extremo N- de la albúmina de suero humano. Por lo menos un polipéptido que tiene actividad de GLP-1 puede comprender SEQ ID No.: 1.

Las variantes de GLP-1 (7-37) pueden ser denotadas por ejemplo como Glu22-GLP-1 (7-37)OH que designa una variante GLP-1 en la cual la glicina normalmente se fusiona en la posición 22 de GLP-1 (7-37)OH se ha reemplazado con ácido glutámico; Val8-Glu22-GLP-1 (7-37)OH designa un compuesto de GLP-1 en el cual la alanina se encuentra normalmente en la posición 8 y la glicina normalmente se encuentra en la posición 22 de GLP-1 (7-37)OH ha sido reemplazado con valina y ácido glutámico, respectivamente. Ejemplos de variantes de GLP-1 incluyen, pero no se limitan a, Val8 -GLP-1 (7-37)OH Gly8 -GLP-1 (7-37)OH Glu2 -GLP-1 (7-37)0- H Asp 22-GLP-1(7-37)OH Arg 2-GLP-1(7-37)OH Lys22-GLP-1(7-37)OH Cys: 22-GLP-1(7-37)OH Val8 -Glu22-GLP-1(7-37)OH Val8-Asp22-GLP-1(7-37)OH Val8 -Arg22-GLP-1 (7-37)OH Val8 -Lys22-GLP-1(7-37)OH Val8-Cys22-GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Glu22-GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Asp22-GLP-1(7-37)OH Gly8-Arg 2-GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Lys22-GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Cys2 -GLP-1(7-37)OH Glu22-GLP-1(7-36)OH Asp: 22-GLP-1(7-36)OH Arg -GLP-1 (7-36)OH Lys22-GLP-1(7-36)OH Cys: 22-GLP-1 (7-36)OH Val8 -Glu22-GLP-1(7-36)OH Val8-Asp 2-GLP-1(7-36)OH Val8 -Arg 2-GLP-1(7-36)OH Val8 -Lys22-GLP-1(7-36)OH Val8-Cys22-GLP-1(7-36)OH Gly8 -Glu 2-GLP-1(7-36)OH Gly8 -Asp2 -GLP-1(7-36)OH Gly8-Arg22-GLP-1 (7-36)OH Gly8 -Lys22-GLP-1(7-36)OH Gly8 -Cys2 -GLP-1 (7-36)OH Lys"-GLP-1 (7-37)OH Val8 -Lys23-GLP-1(7-37)OH Gly8 -Lys23-GLP-1 (7-37)OH H 24-GLP-1(7-37)OH Val8 -Hls24-GLP-1(7-37)OH Gly8 -His24-GLP-1(7-37)OH Lys24-GLP-1(7-37)OH Val8 -Lys2,-GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Lys23-GLP-1(7-37)OH Glu30-GLP-1(7-37)OH Val8 -Glu30-GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Glu30-GLP-1 (7-37)OH Asp30-GLP-1(7-37)OH Val8 -Asp3o-GLP-1(7-37)OH Gly8-Asp30-GLP-1(7-37)OH Gln30-GLP-1(7-37)OH Val8 -Gln3o-GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Gln30-GLP-1(7-37)OH Tyr30-GLP-1 (7-37)OH Val8 30-GLP-1(7-37)OH Gly8 -Tyr30-GLP-1 (7-37)OH Ser30-GLP-1(7-37)OH Val8 -Ser30-GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Ser30-GLP-1(7-37)OH HiS30-GLP-1(7-37)OH Val8 -His30-GLP-1(7-37)OH Gly8 -GLP-1 (7-37)OH Glu34-GLP-1 (7-37)OH -1(7-37 -1 (7-37JOH -1(7-37)OH Val8 -Ala3--GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Ala3j4-GLP-1(7-37)OH Gly3<-GLP-1(7-37)OH Val8 -Gly3,-GLP-1(7-37)OH Gly8 -GlyM-GLP-1 (7-37)OH Ala35-GLP-1(7-37)OH Val8 -Ala35-GLP-1(7-37)OH Gly8Ala35-GLP-1 (7-37)OH Lys35-GLP-1(7-37)OH Val8 -Lys35-GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Lys -GLP-1(7-37)OH His35-GLP-1 (7-37)OH Val8 -His35-GLP-1 (7-37)OH Gly8 -His35-GLP-1(7-37)OH Pro35-GLP-1 (7-37)OH Val8 -Pro35-GLP-1(7-37)OH Gly8 ¦Pro35-GLP-1 (7-37)OH Glu35-GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Glu35-GLP-1 (7-37)OH Val8 -Ala -GLP-1(7-37)OH Val8-H -GLP-1 (7-37)OH Val8 -GIU22-Lys23-GLP-1(7-37)OH Val8 -GLP-1 (7-37)OH Vale-Glu22-Ala -GLP-1 (7-37)OH Val8 -GlyM-Lys -GLP-1(7-37)OH Val8 •His37-GLP-1- (7-37)OH Gly8-H¡s -GLP-1(7-37)OH Val8 -Glu22-Ala27-GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Glu22-Ala -GLP-1(7-37)OH Val8-Ly822 -GLP-1 (7-37)OH Gly8 -Lys22-Glu23-GLP-1 (7-37)OH. Val8 ¦Glu35-GLP-1(7-37)OH Las variantes de GLP-1 también pueden incluir, pero no se limitan a, GLP-1 o fragmentos de GLP-1 que tienen una modificación química de uno o más de sus grupos secundarios de aminoácidos. Una modificación química incluye, pero no está limitada a, agregar porciones químicas, crear nuevos enlaces, y remover porciones químicas. Las modificaciones en los grupos secundarios de los aminoácidos incluyen, sin limitación, la acilación de los grupos lisina-£-amino, N-alquilación de arginina, histidina, o lisina, la alquilación de los grupos ácidos carboxílicos glutámico o aspártico, y la desamidación de la glutamina o la asparagina. Las modificaciones del grupo terminal amino incluyen, sin limitación, modificaciones de des-amino, N-alquilo inferior, N-di-alquilo inferior, y N-acilo. Las modificaciones del grupo terminal carboxi incluyen, sin limitación, las modificaciones de la amida, alquilo inferior amida, dialquil amida, y alquilo inferior éster. Además, uno o más grupos secundarios, o grupos terminales, pueden ser protegidos por grupos protectores conocidos por químico en proteínas con experiencia ordinaria.

Los fragmentos o variantes de GLP-1 también pueden incluir polipéptidos en los que se han agregado uno o más aminoácidos al extremo N- y/o al extremo C- de GLP-1 (7-37)OH del fragmento o variante. Los aminoácidos en GLP-1 en el cual se han agregado los aminoácidos al extremo N- o al extremo C- se denotan por el mismo número como el correspondiente aminoácido en GLP-1 (7-37)OH. Por ejemplo, el aminoácido del extremo N- de un compuesto de GLP-1 obtenido agregando dos aminoácidos al extremo N-de GLP-1 (7-37)OH están en la posición 5; y el aminoácido del extremo C- de un compuesto de GLP-1 obtenido agregando un aminoácido al extremo C- de GLP-1 (7-37)OH está en la posición 38. Así, la posición 12 está ocupada por fenilalanina y la posición 22 está ocupada por glicina en ambos de estos compuestos de GLP-1 , como en GLP-1 (7-37)OH. Los aminoácidos 1-6 de un GLP-1 con aminoácidos agregados al extremo N- puede ser igual que o una sustitución conservadora del aminoácido en la correspondiente posición de GLP-1 (1-37)OH. Los aminoácidos 38-45 de un GLP-1 con aminoácidos agregados en el extremo C- pueden ser iguales que o una sustitución conservadora del aminoácido en la correspondiente posición de glucagon o exendina-4.

El albiglutide es un análogo novedoso de GLP-1 sintetizado por fusión genética de una forma resistente de DPP-IV del péptido como un dímero a albúmina humana, que proporciona una actividad de GLP-1 duradera con una vida media de aproximadamente 5 a 7 días. La secuencia primaria del aminoácido del albiglutide es SEQ ID NO.:1.

En otro aspecto de la invención presente, la composición que comprende por lo menos un polipéptido que tiene actividad GLP-1 se administra a un humano de una vez diariamente a una vez cada mes y puede administrarse una vez diariamente, una vez cada dos días, una vez cada tres días, una vez cada siete días, una vez cada catorce días, una vez cada cuatro semanas y/o una vez cada mes. En otro aspecto, una primera dosis y una segunda dosis de una composición que comprende por lo menos un polipéptido que tiene actividad de GLP-1 se administra a un humano. La primera y la segunda dosis pueden ser iguales o pueden ser diferentes. Cada dosis de por lo menos un polipéptido que tiene actividad de GLP-1 puede comprender aproximadamente 0.25 pG a aproximadamente 1000 mg del por lo menos un polipéptido que tiene actividad de GLP-1. Las dosis pueden incluir, pero no se limitan a, 0.25 pg, 0.25 mg, 1 mg, 3 mg, 6 mg, 16 mg, 24 mg 48 mg, 60 mg, 80 mg, 104 mg, 20 mg, 400 mg. 800, mg hasta aproximadamente 1000 mg de por lo menos un polipéptido que tiene actividad de GLP-1 .

En una modalidad, las composiciones de la invención presente comprenden aproximadamente 15 mg, 30 mg, 50 mg o 100 mg de SEQ ID NO: 1.

En otra modalidad el polipéptido es un polipéptido que se une a antígeno. En una modalidad el polipéptido que se une a antígeno se selecciona del grupo que consiste de un receptor soluble, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, dominio de variable simple de inmunoglobulina, Fab, F(ab')2, Fv, Fv enlazado a bisulfuro, scFv, anticuerpo multiespecífico de conformación cerrada, scFv enlazado a bisulfuro, o diacuerpo.

El término "polipéptido que se une a antígeno" como se utiliza en la presente se refiere a anticuerpos, fragmentos de anticuerpo y otras construcciones de proteína que son capaces de unirse a un antígeno.

En una modalidad el polipéptido que se une a antígeno es un anti-NOGO mAb. En una modalidad el polipéptido que se une a antígeno comprende la cadena pesada de SEQ ID NO: 3 y la cadena ligera de SEQ ID NO: 4.

En una modalidad el polipéptido que se une a antígeno es un anti-IL5 mAb. En una modalidad el polipéptido que se une a antígeno comprende la cadena pesada de SEQ ID NO: 7 y la cadena ligera de SEQ ID NO: 8.

En una modalidad el polipéptido que se une a antígeno es un mAb anti-CD20.En una modalidad el polipéptido que se une a antígeno comprende la cadena pesada de la región variable de SEQ ID NO: 9 y la cadena ligera de la región variable de SEQ ID NO: 10. En una modalidad el polipéptido que se une a antígeno es un dominio variable único de inmunoglobulina. En una modalidad el dominio de variable único de inmunoglobulina es un anti-TNFR1 dAb. En una modalidad el dominio de variable único de inmunoglobulina comprende SEQ ID NO: 5.

Los términos Fv, Fe, Fd, Fab, o F(ab)2 se utilizan con sus significados estándar (vea, por ejemplo, Harlow et al., Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)).

Un "anticuerpo quimérico" se refiere a un tipo de anticuerpo diseñado que contiene una región variable natural (cadena ligera y cadenas pesadas) derivadas de un anticuerpo de donador en asociación con regiones constantes de cadena ligera y de cadena pesada derivadas de un anticuerpo de aceptor.

Un "anticuerpo humanizado" se refiere a un tipo de anticuerpo diseñado que tiene sus CDRs derivadas de una inmunoglobulina de donador no humano, las partes restantes derivadas de inmunoglobulina de la molécula que es derivada de una (o más) inmunoglobulinas humanas. Además, los residuos de soporte del marco pueden ser alterados para conservar la afinidad de unión (vea, por ejemplo, Queen et al., Proc. Nati. Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)). Un anticuerpo aceptor humano adecuado puede ser uno seleccionado de una base de datos convencional, por ejemplo, la base de datos ABAT.RTM. la base de datos de Los Alamos, y la base de datos suiza de Proteínas, por homología a las secuencias de nucleótidos y aminoácidos del anticuerpo de donador. Un anticuerpo humano caracterizado por una homología a las regiones de marco del anticuerpo de donador (en una base de aminoácidos) puede ser adecuado para proporcionar una región constante de cadena pesada y/o una región de marco variable de cadena pesada para la inserción de las CDRs del donador. Un anticuerpo de aceptor adecuado capaz de donar regiones de marco constante o variable de cadena ligera puede seleccionarse en una manera similar. Debe apreciarse que las cadenas pesada y ligera del anticuerpo de aceptor no requieren originarse del mismo anticuerpo de aceptor. La técnica previa describe varias maneras de producir tales anticuerpos humanizados -vea por ejemplo la EP-A-0239400 y EP-A-054951.

El término "anticuerpo de donador" se refiere a un anticuerpo (monoclonal, y/o recombinante) que contribuye a las secuencias de aminoácidos de sus regiones variables, CDRs, u otros fragmentos funcionales o análogos de los mismos a un primer socio de la inmunoglobulina, para proporcionar la región alterada de codificación de inmunoglobulina y el resultante anticuerpo alterado expresado con la especificidad antigénica y actividad neutralizante característica del anticuerpo de donador.

El término "anticuerpo de aceptor" se refiere a un anticuerpo (monoclonal y/o recombinante) heterólogo al anticuerpo del donador, que contribuye todas (o cualquier porción, pero en algunas modalidades toda) de las secuencias de aminoácidos que codifican sus regiones de marco de cadena pesada y/o ligera y/o sus regiones constantes de cadena pesada y/o ligera al primer socio de la inmunoglobulina. En ciertas modalidades un anticuerpo humano es el anticuerpo de aceptor.

Las "CDRs" se definen como las secuencias de aminoácidos de la región que determina la complementariedad de un anticuerpo que son las regiones hipervariables de las cadenas pesada y ligera de la inmunoglobulina. Vea, por ejemplo, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987). Hay tres cadenas pesadas y tres cadenas ligeras de CDRs (o regiones de CDR) en la porción variable de una inmunoglobulina. Así, las "CDRs" como se utiliza en la presente se refieren a las tres CDRs de cadena pesada, o las tres CDRs de cadena ligera (o ambas CDRs todas de cadena pesada o todas de cadena ligera, según sea apropiado). La estructura y doblez de la proteína del anticuerpo pueden significar que otros residuos son considerados parte de la región de unión a antígeno y así serían comprendidos por un experto en la técnica. Vea por ejemplo Chothia et al., (1989) Conformations of immunoglobulin hypervariable regions; Nature 342, p 877-883.

Como se utiliza en la presente el término "dominio" se refiere a una estructura doblada de proteína que tiene una estructura terciaria Independiente del resto de la proteína. Generalmente, los dominios son responsables de las propiedades funcionales discretas de las proteínas y en muchos casos pueden ser agregados, eliminados o transferidos a otras proteínas sin pérdida de la función del resto de la proteína y/o del dominio. Un "dominio variable único de anticuerpo" es un dominio doblado de polipéptido que comprende secuencias características de dominios variables de anticuerpo. Por lo tanto incluye dominios variables completos de anticuerpo y dominios variables modificados, por ejemplo, en el que uno o más bucles han sido reemplazados por secuencias que no son características de los dominios vanables de anticuerpos, o dominios variables de anticuerpo que han sido truncados o que comprenden extensiones del extremo N- o C-, así como fragmentos doblados de dominios variables que retienen por lo menos la actividad y especificidad de unión del dominio de longitud completa.

La frase "dominio variable único de inmunoglobulina" se refiere a un dominio variable de anticuerpo (VH, VHH, V) que se une específicamente a un antígeno o epítopo independientemente de una región o dominio de V diferente. Un dominio variable único de inmunoglobulina puede estar presente en un formato (por ejemplo, el homo- o hétero-multímero) con otro, regiones variables o dominios variables diferentes donde las otras regiones o dominios no se requieren para la unión del antígeno por dominio variable único de inmunoglobulina (es decir, donde el dominio variable único de inmunoglobulina se une al antígeno independientemente de los dominios de variable adicionales). Un "anticuerpo de dominio" o "dAb" es el mismo que un "dominio variable único de inmunoglobulina" que es capaz de unirse a un antígeno tal como el término se utiliza en la presente. Un dominio variable único de inmunoglobulina puede ser un dominio variable de anticuerpo humano, pero también incluye dominios variables únicos de anticuerpo de otra especie tal como un roedor (por ejemplo, como se describe en WO 00/29004), VHH dAbs (nanocuerpos). Los VHH de Camélidos son polipéptidos de dominio variable único de inmunoglobulina que se derivan de las especies que incluyen camellos, llamas, alpacas, dromedarios, y guanaco, que producen anticuerpos de cadena pesada naturalmente desprovistos de cadenas ligeras. Tales dominios de VHH pueden ser humanizados según técnicas estándar disponibles en la técnica, y tales dominios son aún considerados como "anticuerpos de dominio" según la invención. Como se utiliza en la presente "VH incluye dominios de VHH de Camélido. Los NARV son otro tio de dominio variable único de inmunoglobulina que fueron identificados en peces cartilaginosos incluyendo el tiburón nodriza. Estos dominios también son conocidos como región variable del Receptor de Antígeno Novedoso (abreviado comúnmente a V(NAR) o NARV). Para más información vea Mol. Immunol. 44, 656-665 (2006) and US20050043519A.

El término "dominio de unión a epítopo" se refiere a un dominio que se une específicamente a un antígeno o epítopo independientemente de una región o dominio V diferente, este puede ser un anticuerpo de dominio (dAb), por ejemplo un dominio variable único de inmunoglobulina de humano, camélido o tiburón.

Como se utiliza en la presente, el término "sitio de unión a antígeno" se refiere a un sitio en una proteína que es capaz de unirse específicamente al antígeno, esto puede ser un dominio único, por ejemplo un dominio de unión a epitope, o pueden ser dominios apareados VH/VL como puede encontrarse en un anticuerpo estándar. En algunos aspectos de la invención los dominios Fv (ScFv) de cadena única pueden proporcionar sitios de unión a antígeno.

Los términos "mAbdAb" y dAbmAb" son utilizados en la presente para referirse a proteínas de unión a antígeno de la invención presente. Los dos términos pueden ser utilizados intercambiablemente, y pretenden tener el mismo significado como se utiliza en la presente.

EJEMPLOS La invención presente puede ser mejor comprendida por referencia a los siguientes ejemplos no limitativos.

EJEMPLO 1 Liofilización de albiqlutide en la presencia de t-butanol, etanol, acetonitrilo. NHL Acetato o NH HCO3 Se prepararon muestras de albiglutide por liofilización de acuerdo con la matriz de preparación analítica descrita en el Cuadro 1. Los liófilos se prepararon al liofilizar 0.750mL de solución que contenía 50mg de albiglutide en 10mM fosfato de sodio, pH 7.2, con 1 17mM trehalosa, 153mM manitol, 0.01% (p/v) polisorbato-80 en frascos (2mL 13mm) que contenía la concentración apropiada de t-butanol, etanol, y acetonitrilo (1 , 5, y 10% p/v); y la concentración apropiada de NH^cetato y NH4HCO3 (100mM y 250 mM).

CUADRO 1 Condiciones de albiglutide como una función del número de muestra Agitación/Reposo No alterado # Condiciones Veces de Veces de econ (min) Recon (min) cambio cambio 1 : Búfer de Form. 7.18 (+/-0.75) NA 18.09 (+/-4.55) 2: 1 % tButanol 3.23 (+/-0.43) 0.45 6.01 (+/-1.56) 0.33 3: 5% tButanol 5.38 (+/-0.44) 0.75 9.18 (+/-4.57) 0.51 4: 10% tButanol 4.06 (+/-0.56) 0.57 4.80 (+/-0.10) 0.27 5: 1 % Etanol 6.17 (+/-0.67) 0.86 14.89 (+/-2.83) 0.82 6: 5% Etanol 6.85 (+/-0.61 ) 0.95 13.47 (+/-0.56) 0.74 7: 10% Etanol 5.78 (+/-0.55) 0.81 1 1.01 (+/-0.83) 0.61 8: 1 % Acetonitrilo 5.90 (+/-0.55) 0.82 13.22 (+/-0.60) 0.73 9: 5% Acetonitrilo 6.05 (+/-0.53) 0.84 12.60 (+/-1.64) 0.70 10: 10% Acetonitrilo 5.82 (+/-0.51 ) 0.81 10.27 (+/-0.11 ) 0.57 11 : 100 mM de NH4 Acetato 7.81 (+/-0.51 ) 1.09 10.73 (+/-0.59) 0.59 12: 250 mM de NH4Acetato 6.65 (+/-0.90) 0.93 10.98 (+/-3.22) 0.61 13: l OOmM de NH4HC03 6.55 (+/-0.56) 0.91 10.63 (+/-2.26) 0.59 14: 250mM de NH4HC03 6.72 (+/-0.20) 0.94 9.95 (+/-1.85) 0.55 (n = 5) (n = 3) Las muestras fueron liofilizadas utilizando un secador por congelación LyoStar bajo las siguientes condiciones cíclicas: Ciclo de 74hrs Etapa Tiempo (min) Temp. Presión Carga 0 5°C Atmosférica 60 5°C Atmosférica Elevar hasta Congelación 180 -55°C Atmosférica Congelación 300 -55°C Atmosférica Elevar hasta Recocido 360 -15°C Atmosférica Recocido 660 -15°C Atmosférica Elevar a 1 o Secado 780 -55°C Atmosférica Recongelación 900 -55°C Atmosférica Llevar a Vacío 930 -55°C 100um Hg 10 secado 1050 -55°C 100um Hg Elevar a 1 o Secado 1170 -25°C 100um Hg 10 Secado 3570 -25°C 100um Hg Elevar a 2° Secado 3930 40°C 100um Hg 2o Secado 4350 40°C 100um Hg 2hr elevar a TA 4470 25°C 100um Hg Mantener a TA 4650 25°C 100um Hg 74.5 EJEMPLO 2 Reconstitución de albiqlutide liofilizado Se reconstituyeron los liófilos con 0.675mL de agua para inyección (WFI) a través de una jeringa de 1mL y aguja 25G(5/8") a través del émbolo del frasco liofilizado (jeringas de tuberculina, Becton-Dickinson# 309626). El volumen de 0.675mL corrige el volumen de los componentes secos resultando un volumen final de 0.75mL. La reconstitución se realizó utilizando cualquiera de un "método de sacudido" o un "método tranquilo".

Para el método de sacudido, la muestra fue sacudida por 10 segundos, seguido de 15 segundos de reposo. Para el método tranquilo, la muestra fue mecida de aquí para allá por 5 segundos y entonces se dejó tranquila. Se consideró que las muestras habían sido reconstituidas cuando no hubo partículas visibles en los frascos. Los resultados de ambos métodos de reconstitución se muestran en el Cuadro 1 y también en las Figuras 1 y 2.

EJEMPLO 3 Liofilización de albiglutide en la presencia de t-butanol Las muestras de albiglutide se prepararon por liofilización según la matriz de preparación analítica descrita en el Cuadro I. Los liófilos se prepararon liofilizando 0.750mL de solución que contenía 50mg de albiglutide en 10mM de fosfato de sodio, pH 7.2, con 1 17mM trehalosa, 153mM manitol, 0.01 % (p/v) polisorbato-80 en frascos (2mL 13mm) que contenían la concentración apropiada de t-butanol (entre 34 y 202 mM, o 0.25 a 2% p/v).

CUADRO 2 Condiciones de albiglutide como una función del número de muestra.

Las muestras fueron liofilizadas utilizando un secador por congelación LyoStar bajo las siguientes condiciones cíclicas: Ciclo de 74hrs Etapa Tiempo (min) Temp. Presión Carga 0 5°C Atmosférica 60 5°C Atmosférica Elevar hasta Congelación 180 -55°C Atmosférica Congelación 300 -55°C Atmosférica Elevar hasta Recocido 360 -15°C Atmosférica Recocido 660 -15°C Atmosférica Elevar a 1 o Secado 780 -55°C Atmosférica Recongelación 900 -55°C Atmosférica Llevar a Vacío 930 -55°C 100um Hg 10 Secado 1050 -55°C 100um Hg Elevar a 1 o Secado 1 170 -25°C 100um Hg 10 Secado 3570 -25°C 100um Hg Elevar a 2o Secado 3930 40°C 100um Hg 2o Secado 4350 40°C 100um Hg 2hr Elevar a TA 4470 25°C 100um Hg Mantener a TA 4650 25°C 100um Hg 74.5 EJEMPLO 4 Reconstitución de albiqlutide liofilizado Se reconstituyeron los liófilos con 0.675mL de agua para inyección (WFI) a través de una jeringa de mL y aguja 25G (5/8") a través del émbolo del frasco liofilizado (jeringas de tuberculina, Becton-Dickinson # 309626). El volumen de 0.675mL corrige el volumen de los componentes secos resultando un volumen final de 0.75mL. La reconstitución fue realizada utilizando un "método tranquilo" (la adición de agua fue seguida por un mezclado inmediato ligero seguido por permitir al frasco reposar tranquilo). La adición de agua se realizó con cuatro variaciones basadas en el analista (tres personas diferentes que realizan el paso de reconstitución) y el método de pipeteado: El analista 1 : reconstitución a través de jeringa por el tapón.

El analista 2: reconstitución a través de jeringa por el tapón.

El analista 3: reconstitución a través de jeringa por el tapón.

El analista 1 : reconstitución a través del método tradicional de pipeteado P1000 Rainin.

Los tiempos individuales de reconstitución son resumidos en el Cuadro 4, y gráficamente en la Figura 3. Hay un efecto claro del t-butanol agregado antes de la liofilización en los valores resultantes de punto final de tiempo de reconstitución. Las muestras de control fueron liofilizadas en la presencia de búfer de formulación únicamente (sin aditivo volátil) y dieron un promedio de t = 17.87 (± 2.94) min (n = 26); los valores altos y bajos fueron t = 12.25 min y t = 26.53 min, respectivamente. Las muestras al 0.25% de t-Butanol fueron virtualmente idénticas a las muestras de control, con un tiempo promedio de punto final de reconstitución de t = 19.35 (± 4.08) min (n = 20); los valores altos y bajos fueron t = 12.42 min y t = 28.90 min, respectivamente.

A las concentraciones de t-butanol a 0.5% o superior, hay una aceleración clara de las velocidades de reconstitución con valores de punto final que disminuyen con el aumento en las concentraciones de t-butanol. A 0.5% de t-butanol, el punto final de tiempo de reconstitución sobre todos los resultados fue aproximadamente 65% del grupo de control, con t = 11.84 (± 2.94) min (n = 19); los valores altos y bajos fueron t = 0.58 min y t = 17.93, respectivamente. Apreciar que una muestra en el grupo de 0.5% dio> 37 min. En este caso el liófilo se atascó al lado del frasco encima del menisco del solvente y falló en entrar a la solución, así el punto de datos fue excluido del promedio.

Comparando los grupos de 1% t-butanol, 1.5% t-butanol, y 2% t-butanol, hay una aceleración marcada en los tiempos de reconstitución con puntos finales de t = 7.71 (+ 2.44) min (n = 30) a 1% de tButanol, t = 7.16 (± 2.65) min (n = 20) a 1.5% de tButanol, y t = 4.74 (± 1.75) min (n =20) a 2% de tButanol. Los altos y bajos valores de punto final de reconstitución fueron t = 1.37 min y t = 11.67 min a 1% de tButanol, t = 3.90 min y t = 15.50 min a 1.5% de tButanol, y t = 2.75 min y t = 9.25 min a 2% de tButanol. Este intervalo de valores puede sugerir que los tiempos de reconstitución para el albiglutide liofilizado en la presencia de 2% de tButanol en el búfer de formulación puede ser 3 veces más rápido, del orden de 10 min, de lo que se recomienda para el albiglutide en el búfer de formulación, 30 min. En resumen, las muestras al 2% de tButanol fueron aproximadamente 1.5 veces más rápidas que las muestras al 1% de tButanol, y es ~3.75 veces más rápido que el grupo de muestra de control.

CUADRO 4 Puntos finales promedio del tiempo de reconstitución para los liófilos de albiglutide, agrupados según el tipo de muestra.

Grupo Ctrl 2% tBu 1.5% tBu 1% tBu 0.5% tBu 0.25% tBu Todas las pruebas 17.87 4.74 7.16 7.71 11.84 19.35 Promedio (dev. estándar) 2.94 1.75 2.65 2.44 5.18 4.08 (n) 26 20 20 30 19 20 Analista 1 (jeringa) 17.06 4.61 6.51 6.97 13.53 17.37 Promedio (dev. estándar) 1.42 1.57 1.27 1.45 0.71 4.34 (n) 6 3 3 6 3 3 Analista 2 (jeringa) 17.95 4.90 8.63 7.16 9.23 21.24 Promedio (dev. estándar) 3.27 2.62 3.81 3.99 7.76 4.49 (n) 7 6 6 9 5 6 Analista 3 Geringa) 18.01 4.60 6.39 8.00 11.48 18.80 Promedio (dev. estándar)) 4.55 0.87 1.64 1.26 5.05 3.99 (n) 7 6 6 9 6 6 Analista 1 (pipeta) 18.40 4.78 6.71 8.84 13.86 18.94 Promedio (dev. estándar) 1.54 1.93 2.54 1.24 3.56 3.93 (n) 6 5 5 6 5 5 Los resultados de los tiempos de reconstitución del liófilo también fueron separados como una función del analista, y se comparó el método que involucra inyección de WFI a través del tapón (jeringa) contra el método tradicional de destapar el frasco y distribuir a través de pipeta de Rainin, resumido en el Cuadro 4 y gráficamente en la Figura 4. La distribución de puntos los finales de tiempo de reconstitución dentro de cada grupo de muestra representa la fuente de variabilidad dominante, con los métodos individuales de analista y/o reconstitución que tienen influencia mínima en los valores o desviaciones estándar medios para cada tipo de muestra. Las excepciones son para 0.5% de tButanol (prueba 5) y 0.25% de tButanol (prueba 6) que mostró una variabilidad más amplia de tiempos de reconstitución promedio y desviaciones estándar en comparación con las otras muestras.

EJEMPLO 5 Reconstitución de mAbs, dAbs, y IL18 liofilizados mAb Anti-NOGO (SEQ ID NOS: 3 y 4), dAb anti-TNFR1 (SEQ ID NO: 5), IL18 (SEQ ID NO: 6), anti-IL5 (SEQ ID NOS: 7 y 8), y anti-CD20 (dominios de variable SEQ ID NOS: 9 y 10) fueron concentrados a las concentraciones mostradas a continuación en una formulación que comprende 26 mM de histidina, 150 mM de trehalosa, 0.02% de polisorbato 80 (PS80), pH 6.0, en un volumen de aproximadamente 0.75 mL, y luego liofilizada en un frasco de 2 mL. 79.3 mg de mAb anti-IL5 77.9 mg de mAb anti-NOGO 78.2 mg de mAb anti-CD20 29.1 mg de dAb anti-TNFR1 19.0 mg de IL-18 Se reconstituyeron los liófilos con 0.675mL de agua para inyección (WFI) a través de una jeringa de 1mL y aguja 25G(5/8") a través del émbolo del frasco liofilizado (jeringas de tuberculina, Becton-Dickinson# 309626). El volumen de 0.675ml_ corrige el volumen de los componentes secos resultando un volumen final de 0.75mL La reconstitución fue realizada utilizando un "método tranquilo" (la adición de agua fue seguida por un mezclado inmediato ligero seguido por permitir al frasco reposar tranquilo). Se realizó adición de agua por tres analistas diferentes (tres personas diferentes que realizan el paso de reconstitución) vía la jeringa a través del tapón.

Los tiempos individuales de reconstitución se resumen en el Cuadro 5, y gráficamente en las Figuras 6 y 7.

A través de las 5 proteínas probadas, ésas con 2% de t-butanol salpicado durante la liofilización tuvieron tiempos de reconstitución más rápidos que los grupos de control. Esto es evidente no sólo para los mAbs probados, sino también puede observarse para las pequeñas moléculas probadas; dAb anti-TNFR1 y IL-18, que también parecieron tener tiempos de reconstitución más rápidos en la presencia de t-butanol.

CUADRO 5 Nota: tiempo de registro minutos M + (segundos/60) Los expertos en la técnica reconocerán, o podrán acertar utilizando no más que experimentación rutinaria, muchos equivalentes a las modalidades específicas de la invención descrita en la presente. Dichos equivalentes se proyecta que estén comprendidos por las siguientes reivindicaciones. El contenido entero de todas las referencias, patentes, y solicitudes de patente publicadas citadas a lo largo de esta solicitud se incorporan en la presente como referencia.

Claims (28)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un método para producir una composición de polipéptido que comprende: combinar un polipéptido con un aditivo volátil para formar una mezcla líquida y liofilizar la mezcla líquida para obtener una composición de polipéptido liofilizada, en donde la mezcla líquida comprende aproximadamente 2% en volumen de aditivo volátil, y el aditivo volátil es t-butanol.

2. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el polipéptido es un polipéptido que se une a antígeno.

3. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el polipéptido comprende por lo menos dos polipéptidos de GLP-1 fusionados genéticamente al extremo N- de albúmina de suero humano.

4. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el polipéptido de unión a antígeno se selecciona del grupo que consiste en receptor soluble, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, dominio variable único de inmunoglobulina, Fab, F(ab')2, Fv, Fv enlazado a bisulfuro, scFv, anticuerpo multiespecífico de conformación cerrada, scFv enlazado a bisulfuro, y diacuerpo.

5. - Una composición seca de polipéptido producida por el método de la reivindicación 1.

6. - La composición de polipéptido de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque comprende por lo menos dos polipéptidos de GLP-1 fusionados genéticamente al extremo N- de albúmina de suero humano.

7 - Un método para producir una composición líquida de polipéptido que comprende: obtener un polipéptido liofilizado producido por el método de la reivindicación 1 , y reconstituir el polipéptido liofilizado con una cantidad suficiente de un agente de dispersión farmacéuticamente aceptable para producir una composición líquida de polipéptido.

8.- El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque el polipéptido es un polipéptido que se une a antígeno.

9.- El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque el polipéptido comprende por lo menos dos polipéptidos de GLP-1 fusionados genéticamente al extremo N- de albúmina de suero humano.

10.- El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque el polipéptido de unión a antígeno se selecciona del grupo que consiste en receptor soluble, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, dominio variable único de inmunoglobulina, Fab, F(ab')2, Fv, Fv enlazado a bisulfuro, scFv, anticuerpo multiespecífico de conformación cerrada, scFv enlazado a bisulfuro, y diacuerpo.

11. - Una composición líquida de polipéptido producida por el método de la reivindicación 7.

12. - Un método para reducir el tiempo de reconstitución de una composición de polipéptido liofilizado que comprende: a) liofilizar una mezcla líquida que comprende el polipéptido, en donde la mezcla líquida comprende aproximadamente 2% en volumen de aditivo volátil, en donde el aditivo volátil es t-butanol y b) reconstituir el polipéptido liofilizado con una cantidad suficiente de un agente de dispersión farmacéuticamente aceptable para la composición de polipéptido liofilizado para producir una composición líquida de polipéptido, en donde el tiempo para reconstituir el polipéptido liofilizado en la presencia del aditivo volátil es menor que el tiempo para reconstituir el mismo polipéptido liofilizado en la ausencia del aditivo volátil.

13. - El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque el polipéptido es un polipéptido que se une a antígeno.

14. - El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque el polipéptido comprende por lo menos dos polipéptidos de GLP-1 fusionados genéticamente al extremo N- de albúmina de suero humano.

15. - El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque el polipéptido de unión a antígeno se selecciona del grupo que consiste en receptor soluble, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, dominio variable único de inmunoglobulina, Fab, F(ab')2, Fv, Fv enlazado a bisulfuro, scFv, anticuerpo multiespecífico de conformación cerrada, scFv enlazado a bisulfuro, y diacuerpo.

16. - Una composición que comprende: un polipéptido terapéutico, un búfer, un surfactante, por lo menos un excipiente, y por lo menos un aditivo volátil.

17. - La composición de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada además porque el polipéptido terapéutico comprende GLP-1 o un fragmento y/o variante del mismo.

18.- La composición de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada además porque el polipéptido terapéutico comprende por lo menos dos polipéptidos de GLP-1 (7-36(A8G)) genéticamente fusionados al extremo N- de albúmina de suero humano.

19. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, caracterizada además porque el polipéptido terapéutico comprende SEQ ID NO: 1.

20. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16 o 19, caracterizada además porque el búfer es fosfato de sodio.

21.- La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 20, caracterizada además porque el surfactante es polisorbato-80.

22.- La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 21 , caracterizada además porque el por lo menos un excipiente se selecciona de: trehalosa, maltosa, sacarosa, mañosa, lactosa, manitol, sorbitol, glicerol y dextrosa.

23. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 22, caracterizada además porque el excipiente comprende: trehalosa y manitol.

24. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 23, caracterizada además porque el aditivo volátil es un oxihidrocarburo.

25.- La composición de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada además porque el oxihidrocarburo se selecciona de: metanol, etanol, n-propanol, iso-propanol, n-butanol, iso-butanol, 2- butanol, t-butanol, pentanol, iso-pentanol, 2-pentanol, 3-pentanol, t-pentanol, metiletilcetona, alcohol bencílico, ácido acético, metiletil cetona, o una combinación de los mismos.

26.- La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 25, caracterizada además porque el aditivo volátil se selecciona de t-butanol, etanol, acetonitrilo, NH4Acetato y NH4HC03 o una combinación de los mismos.

27.- Una composición que comprende: un polipéptido que comprende SEQ ID NO: 1 , fosfato de sodio, trehalosa, manitol, polisorbato-80 y t-butanol.

28.- La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 25, caracterizada además porque el aditivo volátil es t- butanol y el t-butanol está presente a aproximadamente 2% en volumen.