MX2010000172A - Formula libre de proteina. - Google Patents

Abstract

La invención se refiere al uso de una composición que comprende aminoácidos libres como la única fuente de proteína, una fuente de ácidos grasos que comprende ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga, una fuente de carbohidratos que comprende carbohidratos digeribles e indigeribles, y bifidobacterias libres de proteína de leche, para el tratamiento de una persona que padece: (a) cólico, congestión, rinorrea, sibilancias, vómito, diarrea, heces con sangre, moco en las heces, salpullido, eccema, reflujo gastroesofágico, esofagitis eosinofílica o asma; (b) alergia a la leche de vaca y/o intolerancia a la proteína de alimento; y/o (c) infecciones, en donde el carbohidrato indigerible se selecciona de una fuente libre de proteína de leche, y la composición total está esencialmente libre de proteínas intactas.

Description

FORMULA LIBRE DE PROTEINA CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a la estimulación de la salud en infantes que reciben una fórmula basada en aminoácidos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION En una situación preferida, los infantes son amamantados por la madre. Sin embargo, frecuentemente se suspende la lactancia materna después de que los infantes son amamantados durante un periodo inicial, y la dieta del infante comprende principalmente una fórmula láctea infantil.

Sin embargo, en un pequeño grupo de infantes la lactancia materna o la alimentación con una fórmula infantil convencional produce reacciones adversas, tales como dolor y reacción alérgica. Las personas que padecen alergia pueden tener dificultades para digerir o metabolizar algunos constituyentes del alimento, lo que entonces resulta en reacciones alérgicas gastrointestinales y sistémicas. Las reacciones alérgicas están dirigidas principalmente a la fracción de proteína del alimento. Frecuentemente es necesario un cambio significativo de la dieta para reducir los eventos adversos.

Para prevenir las reacciones alérgicas a la proteína, el alimento infantil consiste en proteínas de leche hidrolizadas, aminoácidos o proteínas no lácteas, por ejemplo proteínas de soya, y otros componentes nutricionales que no causan reacciones alérgicas.

Una nutrición infantil conocida que comprende aminoácidos como fuente de nitrógeno es Neocate™, para usarse en pacientes que padecen alergia, molestias gastrointestinales, eccema, mala absorción o mala digestión.

En la técnica anterior, frecuentemente se mantiene bajo el número de fuentes diferentes de nutrientes para prevenir la introducción de alérgenos en la fórmula por la adición de estos ingredientes. Sin embargo, esto tiene la desventaja que el infante tampoco se beneficia de los efectos benéficos de tales ingredientes adicionales.

WO2005039319 describe el uso de simbióticos en una fórmula infantil que incluye proteína en forma hidrolizada, reduciendo así el riesgo de alergia (página 1 1 , renglones 35-37).

WO2006091 03 describe una composición nutricional que comprende simbióticos para el tratamiento y prevención de trastornos inmunes que incluyen alergia. Se describe el uso de un hidrolizado de proteína y/o aminoácidos libres para reducir el riesgo de alergia La finalidad de la presente invención es mejorar las fórmulas dietarias para este grupo de pacientes vulnerables, suministrando beneficios nutricionales adicionales sin introducir alérgenos en la composición.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION Los presentes inventores han reconocido que en una fórmula elemental que contiene una variedad de aminoácidos libres sin proteína intacta, es altamente impredecible cómo se desarrolla la flora intestinal. En lugar de la flora dominante de bifidobacterias y lactobacilos de los infantes normales que reciben leche materna, en el intestino de los infantes que reciben alimentos basados en aminoácidos pueden predominar muchas otras especies bacterianas, que incluyen especies potencialmente patógenas.

El desarrollo de una flora intestinal sana es particularmente importante en todos los infantes, ya que frecuentemente estos infantes ya sufren de una función inmunológica deteriorada dando como resultado cólico, congestión, rinorrea, sibilancias, vómito, diarrea, heces con sangre, moco en las heces, salpullido o eccema.

Los presentes inventores han reconocido que el desarrollo de flora sana es de gran importancia en los infantes que reciben una dieta que contiene principalmente aminoácidos libres como fuente de proteína. Sin desear limitarse por teoría, los inventores reconocen que una flora benéfica, esto es, una flora rica en bifidobacterias y lactobacilos, es especialmente benéfica para la maduración del sistema inmune (mucosal). Una flora benéfica previene el desarrollo de alergias o por lo menos reduce la severidad de las alergias en dichos infantes. Por lo tanto, los presentes inventores reconocen la importancia crítica de un desarrollo de flora benéfica en estos infantes.

A pesar de las limitaciones de formulación de la fórmula dietaria para estos infantes vulnerables, los presentes inventores encontraron que se puede añadir benéficamente a la fórmula elemental una selección específica de oligosacáridos dietarios, preferiblemente fructanos o productos de degradación de pectina, para estimular el desarrollo de la flora sin causar ningún efecto secundario alérgico.

No se pueden usar productos derivados de la leche en esta fórmula elemental, puesto que esto podría agregar alérgenos de la leche al producto. Por lo tanto, las fibras prebióticas de acuerdo con esta invención se seleccionan cuidadosamente de las fibras prebióticas conocidas para evitar la adición de proteínas de leche u otras proteínas intactas y potencialmente alergénicas que están presentes en las fibras, a la composición no alergénica.

Los inventores encontraron sorprendentemente en un modelo de alergia reconocido internacionalmente, que cuando fibras prebióticas se combinan con bacterias probióticas (preferiblemente bifidobacterias), se presenta un efecto sinérgico sobre la prevención de reacciones alérgicas. Este efecto sinérgico es potencialmente muy benéfico para los infantes, pero también podría ser benéfico para los adultos.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra la respuesta alérgica de varias composiciones probadas de acuerdo con un modelo de vacuna de ratón internacionalmente reconocido.

La figura 2 muestra el efecto sinérgico de TD1 {Bifídobacteríum breve) y fibras dietarias (OS) en un modelo de alergia a la caseína en el ratón.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Una modalidad preferida de acuerdo con la invención comprende el uso de una composición que comprende aminoácidos libres como la única fuente de proteína, una fuente de ácidos grasos que comprende ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga, una fuente de carbohidratos que comprende carbohidratos digeribles e indigeribles, y bifidobacterias libres de proteína de leche, para la fabricación de una composición para el tratamiento de una persona que padece: a) cólico, congestión, rinorrea, sibilancias, vómito, diarrea, heces con sangre, moco en las heces, salpullido, eccema, reflujo gastroesofágico, esofagitis eosinofílica o asma; b) alergia a la leche de vaca y/o intolerancia a la proteína de alimento; y/o c) infecciones, en donde el carbohidrato indigerible se selecciona de una fuente libre de proteína de leche, y la composición total está esencialmente libre de proteínas intactas.

El término "única fuente de proteína" significa aquí que la presente composición contiene (preferiblemente) por lo menos 99% en peso de aminoácidos, basado en el total de proteína, preferiblemente por lo menos 99.5%, de preferencia por lo menos 99.9% en peso.

Además, la invención provee una composición que comprende un componente de proteína, un componente de grasa, un componente de carbohidrato digerible, un carbohidrato indigerible y bifidobacterias, en donde: a) el componente de proteína contiene mas de 99% en peso de aminoácidos libres, basado en el total de proteína, y comprende por lo menos los siguientes aminoácidos libres: alanina, arginina, ácido aspártico, cisteína, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina y glutamina; b) el componente de carbohidrato digerible contiene menos de 2% en peso de lactosa, basado en el total de carbohidrato digerible; c) el carbohidrato indigerible comprende fructano soluble con un DP promedio entre 2 y 200, y un ácido galacturónico soluble con un DP promedio entre 2 y 200; y d) el componente de grasa comprende entre 0.1% y 5% en peso de LCPUFA, basado en el contenido total de ácido graso. Como se muestra en la figura 1 , la combinación de fructanos solubles de cadena larga (LFOS) con un oligosacárido ácido (AOS), que en este caso es hidrolizado de pectina, funciona tan bien como las bifidobacterias cuando se prueban en el modelo de ratón. Sin embargo, es claro que si los oligosacáridos se combinan con las bifidobacterias, los efectos mejoran mucho.

En una modalidad preferida, la composición nutricional comprende tanto las fibras indigeribles como las bifidobacterias, puesto que esta composición da los mejores resultados en el modelo de ratón alérgico (véase la figura 1 ). Preferiblemente se usa Bifidobacteria breve.

Carbohidrato indigerible Los fructanos son oligosacáridos neutros basados en fructosa (>50% de las unidades de monosacárido son fructosa), preferiblemente inulina, fructano y/o fructooligosacárido, de preferencia una mezcla de fructooligosacárido de cadena larga (IcFOS) con un DP promedio entre 10 y 60, y fructooligosacárido de cadena corta (scFOS) con un DP promedio entre 3 y 10. La modalidad preferida comprende una mezcla de icFOS y scFOS en una relación de 1 :9, puesto que esta relación se acerca más a la composición de oligosacáridos en la leche materna y se ha probado que estimula eficazmente el crecimiento de bifidobacterias en los infantes.

El presente método comprende preferiblemente la administración de una porción que comprende entre 0.05 gramos y 25 gramos de sacárido indigerible, preferiblemente entre 0.1 gramos y 5 gramos. Preferiblemente, el presente método comprende la administración de una porción que comprende entre 0.05 gramos y 25 gramos de scFOS, de preferencia entre 0.1 gramos y 5 gramos de scFOS. Preferiblemente, el presente método comprende la administración de 0.05 gramos a 25 gramos de sacárido indigerible por día, preferiblemente entre 0.1 gramos y 5 gramos por día.

Producto de degradación de pectina La pectina se divide en dos categorías principales: pectina de alta metoxilación, que está caracterizada por un grado de metoxilación arriba de 50%, y pectina de baja metoxilación que tiene un grado de metoxilación abajo de 50%. Como se usa aquí, el "grado de metoxilación" (también referido como DE o "grado de esterificación") significa la magnitud a la que los grupos de ácido carboxílico libres contenidos en la cadena de ácido poligalacturónico han sido esterificados (por ejemplo por metilación). La presente pectina se prepara preferiblemente de pectina de alta metoxilación.

Preferiblemente, la pectina se caracteriza por un grado de metoxilación arriba de 20%, de preferencia arriba de 30%, muy de preferencia arriba de 50%.

La pectina usada en el presente método tiene un grado de polimerización (DP) promedio entre 2 y 500, preferiblemente entre 10 y 250, de preferencia entre 20 y 50. Cuando se usa una mezcla de pectinas con diferentes grados de polimerización, el DP promedio de la mezcla de oligosacárido ácido es, de preferencia, entre 3 y 1000, de preferencia entre 3 y 250, muy de preferencia entre 3 y 50. Se encontró que un DP mas bajo de los oligosacáridos mejora el sabor y resulta en un producto de viscosidad reducida si el oligosacárido ácido se administra en forma líquida.

Preferiblemente, la pectina se administra en una cantidad de entre 0.1 gramos y 100 gramos por día, de preferencia entre 0.4 gramos y 50 gramos por día, muy de preferencia entre 1 gramo y 20 gramos por día.

Una modalidad preferida comprende fructanos y productos de degradación de pectina en una relación de 50:50 - 95:5. Preferiblemente, la relación es 85:15, puesto que esta es la relación de oligosacáridos neutros y oligosacáridos ácidos presentes en la leche materna.

Bacterias probióticas Las bacterias probióticas que son adecuadas para usarse en la invención preferiblemente tendrán por lo menos un efecto positivo en el modelo de alergia de ratón descrito más abajo en los ejemplos. Además, los probióticos se deben cosechar en ausencia sustancial de alérgenos de alimento. Esto requiere procedimientos o medios de cultivo especiales sin proteínas intactas para la preparación de las bacterias probióticas.

Por lo tanto, la modalidad preferida comprende bacterias probióticas en ausencia sustancial de proteínas de alimento intactas o alérgenos de alimento, específicamente en ausencia sustancial de proteínas de leche.

En una modalidad preferida, las bacterias probióticas son bifidobacterias. Muy de preferencia la bacteria probiótica es Bifidobacterium breve. Las bifidobacterias tienen el efecto inductor de tolerancia más fuerte en los modelos de ratón usados y por lo tanto se prefieren. En particular, la Bifidobacterium breve es altamente eficaz.

En otra modalidad preferida las bifidobacterias no son viables. Esto tiene la ventaja de que la vida en anaquel del producto se hace más larga, y que la actividad inmunomoduladora de la bacteria se hace independiente del número de bifidobacterias vivas. Los experimentos han mostrado que los efectos inmunoestimuladores de las bacterias no viables son similares e incluso algunas veces superiores que la actividad de las bifidobacterias vivas.

La presente composición comprende preferiblemente de 102 a 1013 unidades formadoras de colonia (ufe) de bifidobacterias por gramo de peso seco de la presente composición, preferiblemente de 102 a 1012 ufe, de preferencia de 105 a 1010 ufe, muy de preferencia de 104 a 5 x 109 ufe.

Aminoácidos Se pueden usar aminoácidos en la fórmula nutricional para bebés e infantes. Sin embargo, la composición de los aminoácidos en la fórmula comprende preferiblemente todos los aminoácidos esenciales, excepto para los pacientes con fenilcetonuria (PKU) y con defectos innatos del metabolismo no PKU, y preferiblemente es óptima para la nutrición infantil o para bebé. Los inventores encontraron que la mayor parte de la composición óptima de aminoácidos debe ser tan cercana como sea posible a la composición de aminoácidos de la fracción de proteína de la leche materna. Esto resulta en una composición de aminoácidos preferida como la que se indica en el cuadro 1 (véase más abajo).

En una modalidad preferida, la composición comprende menos de 1 % en peso de péptidos, basado en el total de proteína, y más de 99% en peso de aminoácidos libres, basado en el total de proteína, que comprende por lo menos los siguientes aminoácidos libres: alanina, arginina, ácido aspártico, cisteína, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina y glutamina.

Fórmula La fórmula de acuerdo con la invención comprende aminoácidos libres como fuente de nitrógeno, grasa que incluye una mezcla de grasa que comprende LCPUFA y carbohidratos. Se agregan vitaminas y minerales de acuerdo con los requerimientos de la legislación.

La presente composición provee preferiblemente nutrición al infante, y comprende un componente de lípido, un componente de proteína y un componente de carbohidrato. El componente de lípido provee preferiblemente de 5% a 50% del total de las calorías, el componente de proteína provee preferiblemente de 5% a 50% del total de las calorías, y el componente de carbohidrato provee preferiblemente de 15% a 90% del total de las calorías. La presente composición se usa preferiblemente como una fórmula infantil, en donde el componente de lípido provee de 35% a 50% del total de las calorías, el componente de proteína provee de 7.5% a 12.5% del total de las calorías, y el componente de carbohidrato provee de 40% a 55% del total de las calorías. Para el cálculo del porcentaje del total de las calorías para el componente de proteína, se requiere considerar el total de energía provisto por los aminoácidos.

LCPUFA El contenido de LC-PUFA de 20 y 22 átomos de carbono en la presente composición, preferiblemente no rebasa el 15% en peso del total del contenido de grasa, preferiblemente no rebasa el 10% en peso, muy de preferencia no rebasa el 5% en peso del total del contenido de grasa. Preferiblemente, la presente composición comprende por lo menos 0.1 % en peso, de preferencia por lo menos 0.25% en peso, de preferencia por lo menos 0.5% en peso, muy de preferencia por lo menos 0.75% en peso de LCPUFA de 20 y 22 átomos de carbono del total del contenido de grasa. El contenido de ácido docosahexaenoico (DHA) preferiblemente no rebasa el 5% en peso, de preferencia no rebasa el 1 % en peso, pero es de por lo menos 0.1% en peso del total de grasa. Como se encontró que el ácido araquidónico (AA) era particularmente eficaz para reducir la permeabilidad de la unión estrecha, la presente composición comprende cantidades relativamente altas, \ de preferencia por lo menos 0.1 % en peso, de preferencia por lo menos 0.25% en peso, de preferencia por lo menos 0.5% en peso del total de la grasa. El contenido de AA preferiblemente no rebasa el 5% en peso, de preferencia no rebasa el 1 % en peso del total de la grasa. El exceso de metabolitos de AA puede ocasionar inflamación. Por lo tanto, la presente composición comprende preferiblemente AA y DHA, en donde la relación en peso de AA/DHA preferiblemente es mayor de 0.25, de preferencia mayor de 0.5, de preferencia mayor de 1. La relación es preferiblemente menor de 25.

Los LC-PUFA's son preferiblemente aceites de células simples no derivados de pescado, por ejemplo disponibles de Martek.

Las características preferidas de las composiciones de acuerdo con la invención se indican en los cuadros 1-3.

CUADRO 1 Contenido de aminoácidos de la composición de acuerdo con la invención Contenido de AA como porcentaje del total de AA Escala (g/100g) Aminoácido Unidades infante 0-1 año infante 1-10 años Ala g 3.95 4.01 3.12 3.03 Arg g 6.99 7.02 14.24 13.91 Asp g 6.54 6.57 5.73 5.59 Cys g 2.59 2.58 1.85 2.91 Acido glutámico g 0.00 0.00 0.00 Gly g 6.15 6.12 5.1 1 5.01 His g 4.02 3.99 3.71 3.61 Iso g 6.15 6.12 5.11 5.01 Leu g 10.56 10.51 8.54 8.32 Lys g 7.19 7.19 6.25 6.1 1 Meth g 1.68 1.69 4.02 3.90 Phe g 7.51 7.47 7.10 6.93 Pro g 4.73 4.72 5.97 5.82 Ser g 4.60 4.61 3.71 3.61 Thr g 5.18 5.17 4.29 4.19 Try g 2.07 2.08 1.72 1.69 tyr g 4.73 4.72 1.44 1.40 Val g 6.74 6.74 5.42 5.30 Car g 0.06 0.06 0.10 0.12 tau g 0.19 0.20 0.17 0.17 Glu g 8.42 8.43 12.35 13.39 total g 100 100 99.97 100 CUADRO 2 Fórmula nutricional infantil para infantes alérgicos CUADRO 3 Escalas en la composición de ácido graso políinsaturado de cadena larga ÍLCP Las escalas preferidas de la composición de oligosacárido son -1.2g /100 mi, en donde 85% en peso es scFOS e IcFOS, y 15% en peso hidrolizado de pectina. Preferiblemente, la relación de scFOS a IcFOS es entre 2 y 20, de preferencia la relación es 9.

Una modalidad preferida de una formulación en polvo nutricionalmente completa y libre de proteína de leche y alérgenos de acuerdo con la invención, que es adecuada para su dilución en agua para formar un alimento enteral, comprende: Componente Por 100g de polvo Equivalente de proteína (g) 13 Total de aminoácidos (g) 15.5 Total de grasa (g) 23 Aceite de girasol (g) 4 Aceite de coco fraccionado (g) 7 Aceite de cañóla (g) 4 Aceite de girasol de alto contenido de ácido oleico (g) 6.6 Aceite ARASCO™ (g) 0.21 Aceite DHASCO™ (g) 0.11 Carbohidrato: Maltodextrina (g) 49 Prebiótico (g) 5.33 scFOS (g) 4.1 IcFOS (g) 0.43 AOS (g) 0.8 Probiótico: B. breve (unidades formadoras de colonia; UFC) 1 x 1010 Otras vitaminas/minerales/oligoelementos El resto La formulación anterior provee aproximadamente 455 kcal de energía x 100 g de polvo.

La formulación se puede diluir con agua hervida fría para proveer una concentración recomendada de 15% p/v.

Usos De preferencia la composición se usa para tratar un infante (particularmente con una constitución atópica) que padece: a) cólico, congestión, rinorrea, sibilancias, vómito, diarrea, heces con sangre, moco en las heces, salpullido, eccema, reflujo gastroesofágico, esofagitis eosinofílica o asma; b) alergia a la leche de vaca y/o intolerancia a la proteína de alimento; y/o c) infecciones.

La composición también se puede usar preferiblemente para mejorar las características de las heces de los infantes que padecen los síntomas anteriormente mencionados. La composición está diseñada específicamente para infantes entre 0 y 3 años. Con algunas adaptaciones en el perfil de aminoácidos (véase el cuadro 1), la composición también es adecuada para infantes entre 3 y 10 años de edad. Los infantes alérgicos frecuentemente padecen diarrea pero también ocurre constipación. Se puede usar una composición preferida para prevenir y tratar estos síntomas que comprende fibras de acuerdo con la composición de la leche materna, en donde la relación scFOS/lcFOS es de 9:1 , y adicionalmente está presente hidrolizado de pectina.

EJEMPLOS Para determinar los efectos inmunoestimuladores de los oligosacáridos y el probiótico Bifidodacterium breve (TD1), se hicieron pruebas en un modelo de vacuna de ratón internacionalmente reconocido (figura 1 ), y en un modelo de alergia (figura 2).

Materiales y métodos del modelo de vacuna Ratones Se obtuvieron ratones hembras C57BI/6JOIal-lsd de 6 y 8 semanas de edad de Harían (Horst, Países Bajos), y se mantuvieron bajo condiciones normales en un ciclo de 12 horas de oscuridad y luz y con libre acceso a alimento y agua. Todos los experimentos fueron aprobados por un Comité Independiente de Experimentación en Animales (DEC Consult, Bilthoven, Países Bajos).

Dietas y preparaciones de oligosacándo Todos los animales recibieron dietas basadas en AIN-93G semipurificadas (Research Diet Services, Wijkbij Duurstede, Países Bajos). Todos los productos de olígosacárido suplementados se intercambiaron por la misma cantidad del total de carbohidratos para mantener este parámetro igual. Además, este enfoque resultó en una composición general de carbohidrato comparable en diferentes dietas, para asegurar que la flora intestinal fuera afectada mínimamente por diferencias entre las dietas de control y de prueba en parámetros tales como el tiempo de pasaje intestinal y retención de fluido. Los oligosacáridos se mezclaron en la dieta A1N-93G y se comprimieron en pellas.

Protocolo de vacunación y respuesta de DTH Se hicieron experimentos de vacunación usando Influvac (Solvay Pharmaceuticals, Weesp, Países Bajos) de la estación 2002/2003. Es una vacuna del virus de la influenza desactivado basada en hemaglutinina aislada (HA) y antígenos de neuraminidasa de tres cepas de mixovirus de influenza, en una dosis equivalente a 30 pg/mL de HA por cepa (90 pg/mL de HA en total). Se usó un adyuvante de aceite en todas las vacunaciones (Stimune, conocido previamente como Specol; Cedi-diagnostics, Lelystad, Países Bajos). Los ratones recibieron una vacunación primaria y una vacunación de refuerzo que consiste en una inyección subcutánea (s.c.) de una mezcla 1 :1 de vacuna y adyuvante en un volumen total de 100 µ/L. La vacunación de refuerzo se dio 21 días después de la vacunación primaria. Los experimentos finalizaron 10 días después de la vacunación de refuerzo. Se tomaron muestras de sangre (tomadas por punción retroorbital) antes de la vacunación primaria y secundaria, y al final del experimento. Los grupos de control negativo que se incluyeron en todos los experimentos (indicados como "grupo tratado en falso") recibieron inyecciones con una mezcla 1 :1 de PBS y adyuvante en un volumen total de 100 pL. Los grupos tratados en falso nunca se usaron para comparaciones estadísticas con grupos suplementados, sino que únicamente sirvieron para mostrar la especificidad de las respuestas inducidas por la vacuna. Las reacciones de DTH se indujeron 9 días después de la vacunación de refuerzo mediante inyección s.c. de 25 µ/L de Influvac en el pabellón de ambas orejas. El grosor de la oreja se midió por duplicado antes de la provocación de vacuna y 24 horas después, utilizando un micrómetro digital (Mitutoyo Digimatic 293561 , Veenendaal, Países Bajos). La respuesta de DTH se calculó restando el grosor basal de la oreja del valor 24 horas después de la provocación.

Material y métodos del modelo de alergia a la proteina de leche de vaca Agentes químicos Se obtuvo caseína y suero de leche de DMV International, Veghel, Países Bajos. Se compró toxina de cólera a Quadratech Diagnostics, Epsom, Reino Unido. Se compró PBS a Cambrex Bio Science, Verviers, Bélgica. Se obtuvo amortiguador de recubrimiento de Elisa de Sigma, Alphen aan den Rijn, Países Bajos. Se compró anti-lgE de ratón de rata marcado con biotina a BD Biosciences, Alphen aan den Rijn, Países Bajos. Todos los otros agentes químicos se obtuvieron de Sigma-Aldrich-Chemie, Zwijdrecht, Países Bajos.

Sensibilización oral y provocación de ratones Se compraron ratones hembras C3H/HeOuJ libres de patógenos específicos de 3 a 5 semanas de edad (n=4-6 por grupo) a Charles River Laboratories (Maastricht, Países Bajos); se mantuvieron con alimento para ratón libre de proteína de leche de vaca (Special Diets Services, Witham, Essex, Reino Unido) y se alojaron en la instalación para animales en la Utrecht University. El cuidado y utilización de los animales se hizo de acuerdo con las guías del Comité Holandés para Experimentación en Animales. Los ratones se sensibilizaron por vía ¡ntragástrica (i.g.) con 0.5 mL de caseína homogeneizada (40 mg/mL PBS) con toxina de cólera (CT, 20 pL/mL PBS) como adyuvante, utilizando una aguja despuntada. Los ratones de control recibieron CT sola o PBS. Semanalmente se administró a los ratones un refuerzo durante un periodo de 6 semanas; una semana después de la última sensibilización los ratones se provocaron por vía i.g. con 100 mg de caseína.

Se tomaron muestras de sangre y posteriormente se centrifugaron (15 min a 13500 rpm). El suero se almacenó a -70° C. Los ratones se sacrificaron por dislocación cervical una hora y media después de la provocación i.g.

Respuesta de la piel específica de alérgeno La respuesta aguda de la piel específica de alérgeno se midió después de la inyección de la proteína específica en los pabellones de la oreja. Antes de la provocación i.g. (t=0), los ratones de control sensibilizados con caseína fueron inyectados por vía intradérmica (i.d.) en la oreja izquierda con 20 pL de caseína homogeneizada (0.5 mg/mL en PBS), respectivamente. En la oreja derecha se inyectaron 20 pL de PBS como un control de vehículo. También los ratones CT y PBS recibieron una provocación de caseína en la oreja utilizando inyecciones de PBS como control. El grosor de la oreja se midió por duplicado usando un micrómetro digital (Mitutoyo, Veenendaal, Países Bajos), 0, 1 , 4 y 24 horas después de la provocación. Se calculó la hinchazón de la oreja específica de alérgeno restando el grosor basal (0 h) y el control (oreja derecha) del valor medido en los tres puntos de tiempo diferentes (1 , 4 y 24 h).

Medición de los niveles de inmunoqlobulina y proteasa 1 de mastocito de ratón en el suero Por medio de ELISA se determinaron las concentraciones del total de IgE y de IgE, lgG1 e lgG2a específicas de caseína o suero de leche en el suero de los ratones sacrificados. Placas Microlon (Greiner, Alphen aan den Rijn, Países Bajos) se cubrieron con caseína en amortiguador de recubrimiento o anti-lgE de ratón de rata (1 pg/mL) en PBS durante 18 horas a 4 °C. Las placas se lavaron y se bloquearon durante 1 hora con 5% de BSA. Se aplicaron muestras del suero en varias diluciones y se incubaron durante 2 horas a temperatura ambiente. Las placas se lavaron 5 veces y se incubaron durante una hora y media a temperatura ambiente con 1 pg de anti-lgE de ratón de rata marcado con bíotina. Después de lavar las placas, se incubaron con peroxidasa de rábano (HRP) durante una hora, se lavaron y se revelaron con o-fenilendiamina (OPD). La reacción se detuvo con H2S04 4M y la absorbancia se midió a 490 nm en una lectora de microplaca Benchmark (Biorad, California, EE. UU.). Las concentraciones de proteasa 1 de mastocito de ratón (m CP-1) en el suero se determinaron como se describió anteriormente, usando un kit de ELISA disponible comercialmente (Moredun Scientific Ltd., Midlothian, Reino Unido).

Los resultados del modelo de vacuna de ratón se muestran en la figura 1 , en la cual es evidente que la combinación con TD1 (Bifidobacterium breve) provee el efecto más fuerte sobre la respuesta de DTH, y es significativamente mejor que TD1 sola o cualquier otra combinación probada.

Los resultados del modelo de alergia a la caseína del ratón se muestran en la figura 2 y muestran que la combinación de fibra dietaria y TD1 inhibe sinergísticamente la respuesta de DTH "alergénica" a la caseína.

Claims (16)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1. - El uso de una composición que comprende aminoácidos libres como la única fuente de proteína, una fuente de ácidos grasos que comprende ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga, una fuente de carbohidratos que comprende carbohidratos digeribles e indigeribles, y bifidobacterias libres de proteína de leche, para la fabricación de una composición para el tratamiento de una persona que padece: (a) cólico, congestión, rinorrea, sibilancias, vómito, diarrea, heces con sangre, moco en las heces, salpullido, eccema, reflujo gastroesofágico, esofagitis eosinofílica o asma; (b) alergia a la leche de vaca y/o intolerancia a la proteína de alimento; y/o (c) infecciones; en donde el carbohidrato indigerible se selecciona de una fuente libre de proteína de leche, y la composición total está esencialmente libre de proteínas intactas.

2. - El uso que se reclama en la reivindicación 1 , en donde la persona es un infante con una edad de entre 0 y 36 meses.

3. - El uso de una composición que comprende aminoácidos libres como la única fuente de aminoácidos, una fuente de ácido graso que comprende ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga, una fuente de carbohidrato que comprende carbohidratos digeribles e indigeribles, y bifidobacterias libres de proteína de leche, para la fabricación de una composición para estimular la maduración del sistema inmune en un infante con una constitución atópica, en donde el carbohidrato indigerible se selecciona de una fuente libre de proteína de leche y la composición total está esencialmente libre de proteínas intactas.

4. - El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde los aminoácidos libres basados en la proteína total comprenden por lo menos los siguientes aminoácidos libres: alanina, arginina, ácido aspártico, cisteína, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina y glutamina;.

5. - El uso de una composición como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde los aminoácidos comprenden entre 5-16 %en del total de la composición, entre 30-60 %en de grasa de la cual entre 0.1-5 %en es LCPUFA, y entre 25-75 %en son carbohidratos digeribles.

6. - El uso que se reclama en la reivindicación 5, en donde el LCPUFA comprende entre 0.2-1 %en del total de la composición.

7.- El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde el carbohidrato indigerible comprende (i) fructano soluble con un grado de polimerización promedio entre 3 y 200, y (¡i) ácido galacturónico soluble con un grado de polimerización promedio entre 3 y 200.

8.- Una composición que comprende un componente de proteína, un componente de grasa, un componente de carbohidrato digerible, un carbohidrato indigerible, y bifidobacterias libres de proteína de leche, en donde: (a) el componente de proteína comprende aminoácidos libres como la única fuente de proteína, y comprende por lo menos los siguientes aminoácidos libres: alanina, arginina, ácido aspártico, cisteína, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina y glutamina; (b) el componente de carbohidrato digerible contiene menos de 2% en peso de lactosa, basado en el total de carbohidrato digerible; (c) el carbohidrato indigerible comprende fructano soluble con un DP promedio entre 2 y 200, y un ácido galacturónico soluble con un DP promedio entre 2 y 200; y (d) el componente de grasa comprende entre 0.1% y 5% en peso de LCPUFA, basado en el contenido total de ácido graso.

9.- La composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada además porque el componente de grasa comprende entre 0.2% y 1 % en peso de LCPUFA, basado en el contenido total de ácido graso.

10. - La composición de conformidad con la reivindicación 8 o 9, caracterizada además porque comprende fructano soluble indigerible con un DP promedio entre 2 y 200, y un ácido galacturónico soluble indigerible con un DP promedio entre 2 y 200.

11. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, caracterizada además porque comprende Bifidobacterium breve.

12.- La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8-11 , caracterizada además porque comprende ácido araquidónico y/o ácido docosahexaenoico.

13.- La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8-12, caracterizada además porque el carbohidrato indigerible consiste en FOS de cadena larga y FOS de cadena corta.

14. - La composición de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada además porque los FOS de cadena larga tienen un DP promedio entre 10 y 60, y los FOS de cadena corta tienen un DP promedio entre 3 y 10.

15. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8-14, caracterizada además porque el producto es un polvo o un líquido. ú

16.- Una composición que comprende aminoácidos libres como la única fuente de proteína, una fuente de ácidos grasos que comprende ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga, una fuente de carbohidratos que comprende carbohidratos digeribles e indigeribles, y bifidobacterias libres de proteína de leche, en donde el carbohidrato indigerible se selecciona de una fuente libre de proteína de leche y la composición total está esencialmente libre de proteínas intactas, para usarse en el tratamiento de una persona que padece: (a) cólico, congestión, rinorrea, sibilancias, vómito, diarrea, heces con sangre, moco en las heces, salpullido, eccema, reflujo gastroesofágico, esofagitis eosinofílica o asma; (b) alergia a la leche de vaca y/o intolerancia a la proteína de alimento; y/o (c) infecciones.